医学微生物学 试验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测

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医学微生物学试验综合性试验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测(六)药敏试验结果分析糖发酵、动力试验结果分析玻片凝集试验高压蒸汽灭菌细菌综合性试验总结试验报告撰写细菌感染的检查方法和防治原则(录像)洗刷

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常用药敏试验纸片判断标准P21抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)耐药中度敏感敏感≤28≤11≤1212~1413~1415~1813~1713~16≥29≥15≥15≥19≥18≥17

青霉素G(葡萄球菌)10单位链霉素10微克庆大霉素10微克四环素30微克氯霉素30微克磺胺300微克

≤14≤12≤12

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药敏试验结果分析青霉素黄色细菌白色细菌紫黑细菌粉红细菌注：耐药-,中度敏感,敏感+。链霉素庆大霉素

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抗菌素药敏试验纸片法结果G+金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素敏感，对链霉素中度敏感。G-粉红色和紫黑色细菌对青霉素耐药，对链霉素敏感。G+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。

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糖发酵、动力试验结果判断反应现象结果描述符号

培养基变色无气泡培养基变色有气泡培养基不变色

分解糖产酸不产气分解糖产酸又产气不分解糖

+

⊕-

细菌扩散生长,培基混浊沿接种线生长,培基清澈透明

细菌有鞭毛细菌无鞭毛

+-

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肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表葡萄糖埃希菌属⊕志贺菌属+沙门菌属⊕/+霍乱弧菌+变形杆菌属⊕★+产酸或阳性，乳糖麦芽糖甘露醇蔗糖半固体⊕⊕⊕√+√√+/--/+⊕⊕+++++√√+⊕产酸产气，-阴性，

+/-多数阳性，-/+多数阴性，√不确定。

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常见肠道感染细菌主要生化反应特征葡萄糖乳糖半固体(动力)大肠埃希菌⊕⊕+痢疾志贺菌+伤寒沙门菌++霍乱弧菌+★+幽门螺杆菌不分解糖类+变形杆菌⊕+★产酸能迅速杀死该菌。

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组号12345678910结果

细菌生化反应结果分析甲、乙→紫黑丙、丁→粉红↓↓①葡萄糖②乳糖半固体③葡萄糖④乳糖

半固体

⊕

⊕+-

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实结果错误错误可能性错误纯培养时，菌落挑错了。无菌操作不严格，污染杂菌。接种时未协调好，接种错误。

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玻片凝集试验在适量电解质存在的状况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体混合，假使比例适合，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。用于细菌的抗原分析、鉴定及分型，也可应用已知细菌检查未知血清的抗体。诊断血清与待检测细菌混合→细菌凝集→阳性→报告：检出细菌。

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玻片凝集试验原理凝集反应的机制是由于抗原与其相应抗体间存在着相对应的极性基。极性基的相互吸附，使抗原外周的水化膜除去，由亲水溶胶变成憎

水溶胶。电解质具有降低电位的作用，使抗原颗粒间的排斥力消除，从而产生了凝集现象。

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玻片凝集反应试验步骤取清白枯燥的载片一片，分试验与对照区。滴加生理盐水15ul,置于对照区中心；滴加诊断血清15ul,置于试验区中心。用接种环取菌苔，分别研磨乳化于盐水或血清内，混合均匀。将玻片反复旋转或倾侧、菌液充分混匀，凝集速度更快、结果更明白。观测是否有凝集块出现，如有则记为阳性，没有则记为阴性。

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载玻片1张

痢疾血清，生理盐水各15ul

粉红色菌苔与血清混匀

粉红色菌苔与盐水混匀

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玻片凝集结果

玻片来回倾侧数次，数次，肉眼观察；2~3分钟~分钟内仍不出现凝集者,可认为集者可认为阴性(-。阴性-)。

……;菌液混菌液混浊，少量絮凝集,状,25%凝集凝集阳性(+。阳性+)。

……;菌液轻菌液轻度混浊,絮状度混浊絮状凝集块较小,凝集块较小阳性(++++)。阳性++。

……;菌液澄菌液澄清,有明显絮有明显絮凝集,片,75%凝集凝集阳性(++++++)。阳性+++。

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安全警告本次试验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对试验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%,大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。试验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持恬静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。

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综合性试验一试验总结采用平板划线分开法，从浓汁标本中分开出黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。

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用伊红美蓝平板，从粪便标本分开出紫黑色具有金属光泽的菌落和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和痢疾志贺菌。金黄色葡萄球菌和痢疾志贺菌，这两株致病菌分别做了药敏试验，G+的金黄色葡萄球菌对青霉素敏感，G-的痢疾杆菌对链霉素敏感；庆大霉素对G+和G-菌都敏感。

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标本

脓汁和粪便标本细菌检测结果分析血浆痢疾菌落形态葡乳半青链庆凝固酶血清黄色G+球++++

结论金黄色葡萄球菌

脓汁白色G+球+

++白色葡萄球菌

紫黑粪便

G-杆

⊕⊕+

-

+

+

大肠埃希菌

粉红G-杆

+

-

-

+

-

+

+

福氏志贺菌

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细菌鉴定的原则及基本方法必需用纯的细菌培养物作鉴定。由于不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。鉴定试验的选择：测定细菌的试验方法好多，根据鉴定目的选择适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少。一般考虑以下几个问题。选择有价值的试验：鉴别两种细菌选择的试验应当其一为阳性，另一为阴性，且阳性和阴性的概率大于90%。否则，试验无鉴别价值。选择快速简便的试验。由于是常规试验室，选择的方法应快速便利，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等应为首选方法。鉴定一种细菌假使有几种特异方法，只选一两种，多项选择无价值。测定细菌的一种生物特性可能有几种不同方法