第九章化学发光免疫技术

第九章化学发光免疫技术第1页，共43页，2023年，2月20日，星期一教学目的要求：1、掌握化学发光、化学发光酶免疫分析及化学发光的临床应用2、熟练掌握电化学发光免疫分析3、了解化学发光效率、化学发光剂、发光剂的标记技术（自学）、直接化学发光免疫分析第2页，共43页，2023年，2月20日，星期一发光免疫分析:

是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。全自动化学发光分析仪第3页，共43页，2023年，2月20日，星期一第一节概述一、发光的分类是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。根据形成激发态分子的能量来源不同，可将发光分为三种：光照发光、生物发光和化学发光。第4页，共43页，2023年，2月20日，星期一（一）光照发光是指发光剂经短波长入射光照后进入激发态，回至基态时发出较长的可见光。第5页，共43页，2023年，2月20日，星期一（二）生物发光典型例子为荧火虫发光。荧火虫发光素光ATP、O2、Mｇ2+荧光素酶第6页，共43页，2023年，2月20日，星期一（三）化学发光是指常温下经化学反应所产生的发射光。化学发光是一个多步骤的过程。第7页，共43页，2023年，2月20日，星期一二、化学发光产生的条件1、反应必须提供足够的能量（170-300KJ/mol）2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。第8页，共43页，2023年，2月20日，星期一直接化学发光：间接化学发光：第9页，共43页，2023年，2月20日，星期一三、化学发光效率第10页，共43页，2023年，2月20日，星期一四、化学发光免疫技术的分类1、直接化学发光免疫分析2、化学发光酶免疫分析3、电化学发光免疫分析4、鲁米诺氧途径免疫分析常用化学发光剂：（1）吖啶酯类直接标记发光剂（2）三联吡啶钌电化学发光剂（3）酶促反应发光剂：鲁米诺

AMPPD(金刚烷)第11页，共43页，2023年，2月20日，星期一（一）固相分离——板式或管式（二）过滤分离——过滤杯（膜）（三）珠式分离——与丙烯酰胺小珠子（四）顺磁珠性颗粒分离——顺磁性颗粒五、化学发光免疫的非均相分离方式第12页，共43页，2023年，2月20日，星期一一、化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。第二节化学发光剂和标记技术第13页，共43页，2023年，2月20日，星期一第14页，共43页，2023年，2月20日，星期一第15页，共43页，2023年，2月20日，星期一第16页，共43页，2023年，2月20日，星期一第17页，共43页，2023年，2月20日，星期一第18页，共43页，2023年，2月20日，星期一第19页，共43页，2023年，2月20日，星期一鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼。刑侦学应用：在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血。第20页，共43页，2023年，2月20日，星期一第21页，共43页，2023年，2月20日，星期一第22页，共43页，2023年，2月20日，星期一二、发光剂的标记技术（自学）

第23页，共43页，2023年，2月20日，星期一第三节化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析第24页，共43页，2023年，2月20日，星期一第25页，共43页，2023年，2月20日，星期一二、化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。第26页，共43页，2023年，2月20日，星期一HRP标记的LEIA（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析第27页，共43页，2023年，2月20日，星期一（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析ALP标记的LEIA第28页，共43页，2023年，2月20日，星期一第29页，共43页，2023年，2月20日，星期一三、电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析（ECLIA）：是电化学发光和免疫测定相结合的产物。第30页，共43页，2023年，2月20日，星期一第31页，共43页，2023年，2月20日，星期一第四节化学发光免疫测定的临床应用化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质，且易于实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等特点，已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其化微量生物活性物质测定。第32页，共43页，2023年，2月20日，星期一临床应用特点：1、灵敏度高，特异性强可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测，保证了各种激素、病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定。第33页，共43页，2023年，2月20日，星期一2、线性范围宽可满足103-106数量级的绝对定量检测需要。保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。第34页，共43页，2023年，2月20日，星期一3、标记物稳定，试剂有效期长有效期可长达一年第35页，共43页，2023年，2月20日，星期一4、自动化程度高，检测菜单齐全第36页，共43页，2023年，2月20日，星期一Thyroid甲状腺T3三碘甲状腺原氨酸T4四碘甲状腺原氨酸FT3游离三碘甲状腺原氨酸FT4游离四碘甲状腺原氨酸RT3反三碘甲状腺原氨酸TRAB促甲状腺受体抗体TGA甲状腺球蛋白抗体TMA甲状腺微粒体抗体TG甲状腺球蛋白TSH(3rdGen)促甲状腺激素(第三代超敏)第37页，共43页，2023年，2月20日，星期一Fertility生育

FSH促卵泡激素

LH黄体生成素

PRL催乳素

E2，Estradiol雌二醇PRG孕酮TEST睾酮F-TEST游离睾酮

HCG/β-HCG绒毛膜促性腺激素B-HCG绒毛膜促性腺激素B亚单位FE3游离雌三醇PAPP-A妊娠相关血浆蛋白DHEA-S脱氢表雄酮第38页，共43页，2023年，2月20日，星期一Cardiac心血管及心肌标志物类TroponinI肌钙蛋白IMyoglobinI肌红蛋白CK-MB肌酸激酶同工酶AI血管紧张素IAII血管紧张素IIAldosterone醛固酮脑自然肽N端前体蛋白第39页，共43页，2023年，2月20日，星期一TumorMakers肿瘤标志物AFP甲胎蛋白CEA癌胚抗原Ferritin铁蛋白TPA组织多肽抗原PAP前列腺酸性磷酸酶PSA前列腺特异性抗原F-PSA游离前列腺特异性抗原CA125糖类抗原125第40页，共43页，2023年，2月20日，星期一PrenatalScreening产前筛查AFP甲胎蛋白Free-B-HCG游离绒毛膜促性腺激素B亚单位PAPP-A妊娠相关蛋白第41页，共43页，2023年，2月20日，星期一KidneyFunction肾功能β2-MGβ2微球蛋白H-ALB人尿微量白蛋白第42页，共43页，202