暨南大学色谱08其次次

本文格式为Word版，下载可任意编辑——暨南大学色谱08其次次2023/9级《色谱分析》其次次作业

一、选择题

1．衡量色谱柱柱效性能的指标是（C）A．分开度B．容量因子C．塔板数D．分派系数

2．在液相色谱中，范氏方程中的哪一项对色谱柱效能的影响可以忽略不计？（B）A．涡流扩散项B．分子扩散项C．滚动区域的滚动项传质阻抗D．中止区域的滚动项传质阻抗

3．在正相色谱法中，如增加滚动相极性，则（Ａ）A．样品的k降低，tR降低B．k增加，tR增加C．相邻组分的α增加D．对α基本无影响

4．用色谱法进行定量分析中，要求混合物每一个组分都出峰的是（Ａ）A．归一化法B．外标法C．内标法D．内加法

5．对于正相液相色谱法，不能用作滚动相的溶剂是（Ｄ）A．氯仿B．乙醚C．正已烷D．水

6．内标法定量的优点是（Ｂ）A．不需要校正因子B．对进样量要求不严格C．样品配制简单D．内标物易得

7．液相色谱中通用型检测器是（Ｃ）A．紫外吸收检测器B．荧光检测器C．示差折光检测器D．热导池检测器

8．以HPLC法测定复方药物中的微量成分，宜采用的定量方法是（Ｂ）A．归一化法B．内标法C．外标工作曲线法D．外标一点法

9．采用ODS柱分析有机弱碱混合物样品，当以某比例的乙腈-水为滚动相时，样品的容量

因子较小，若想使容量因子适当增加，应如何调整滚动相的组成？（Ｄ）A．增加滚动相中乙腈的比例B．减小滚动相中水的比例C．在滚动相中参与少量醋酸D．在滚动相中参与少量氨水

二、问答题

1．Martin和Synge在二十世纪四十年代所提出的色谱领域两个远见有何重要意义？答：他们的宏伟之处在于提出的两个远见：

（１）滚动相可以用气体代替液体以获得更高效分开

（２）在液相色谱中，使用小粒径填料以及高压传输可以获得最小的理论塔板高度Ｈ。第一个远见导致了气相色谱法的诞生，其次个远见则促进了高效液相色谱的诞生。

2．高效液相色谱与气相色谱在滚动相上有何区别？

答：ＧＣ：滚动相为惰性气体，组分与滚动相无亲和力。

ＨＰＬＣ：滚动相为液体，滚动相与组分间具亲和力，这为提高柱选择性、改善分开增

加了因素，且滚动相种类较多，选择余地广；滚动相极性和ｐＨ值选择对分开起重要作用，选不同比例两种以上液体作为滚动相可以增大选择性。3．HPLC与GC中影响分开R的因素有何不同？答：ＧＣ：柱选择项主要受固定相影响（分开关键）柱容量项主要受柱温影响。

ＨＰＬＣ：柱选择项主要受滚动相性质影响（分开关键）

分开相种类确定后，柱容量项主要受滚动相配比（洗脱能力）的影响

4．写卓越谱分开方程，结合该方程谈谈如何提高高效液相色谱的分开度？答：R?14N??1?k1?k

H?A?C?u，ｎ：采用粒度小、填充均匀的固定相

采用粘度小、低流速的滚动相

??K2K1Ws?k2k1?tR'2tR'1?VR'2VR'1，?：调整滚动相种类、极性和ｐＨ值（受柱温度影响小）

tR't0k?Wm?CsVsCmVm?K?VsVm?，ｋ：调整滚动相和固定相配比（受柱温影响小）

5．试解释以下名词：

ODS柱；化学键合相；封尾键合相；键合相色谱；检测限；溶剂梯度洗脱答：

ODS柱：十八烷基硅烷载体表面的硅醇基键合，构成十八烷基硅烷键合光相。化学键合相：通过化学反应将固定液的官能团键合在载体表面而构成的固定相。

封尾键合相：用化学反应的方式将键合相的载体表面剩余的硅醇基除去，这种键合相称封尾键合相。

键合相色谱：以化学键合相为固定相的液相色谱分析法。

最重要、应用最广泛的高效液相色谱法，目前已经完全取代了液液分派色谱法，与液液分派色谱相比，ｋ的影响因素相像。

检测限：又叫敏感度，是响应值恰为２倍噪音时所需要的样品。敏感度同时考虑了检测器的噪音和灵敏度，是仪器整体性能的综合量度。溶剂梯度洗脱：滚动相的溶剂强度变化的洗脱方式；滚动相的溶剂强度和组成变化影响组分的保存和选择性。

6．封尾键合相具有什么特点？键合相进行封尾处理的目的是什么？答：封尾键合相具有的特点：仅有分派作用，无吸附作用稳定性好，并具有强疏水性。

键合相进行封尾处理的目的是：防止剩余硅羟基对极性物质产生过分吸附而改变键合相分开性能，键合反应后用小分子烷化剂进行封尾处理以消除剩余硅羟基，提高键合相稳定性和色谱分开重复性。

7．采用HPLC对一组邻苯二甲酸酯类化合物进行分析，采用滚动相为四氢呋喃:异辛烷(5%:95%,V/V)，得到色谱图如下：

A.Dibutylphthalate邻苯二甲酸二丁酯B.Dimethylphthalate邻苯二甲酸二甲酯C.dinonylphthalate邻苯二甲酸二壬酯D.diethylphthalate邻苯二甲酸二乙酯

试回复以下问题

（１）预计该组邻苯二甲酸酯类化合物在正相高效液相色谱柱上的洗脱顺序？答：Ｃ－＞Ａ－＞Ｄ－＞Ｂ

（2）假使滚动相换成甲苯：异辛烷(5%:95%,V/V)，请预计色谱图的变化状况答：整体洗脱能力差，保存时间增加。

8．试推测以下每组化合物在RP-BPC上的洗脱顺序：（1）

COOHCH3OHABCD

（2）

(CH2)4

COOHCOOHCH2COOH(CH2)2COOH(CH2)3CH3CH3CH3CH3GHEF

答：

（１）Ｂ－＞Ｄ－＞Ｃ－＞Ａ（２）Ｂ－＞Ｃ－＞Ｄ－＞Ａ

9．IPC，ISC和IEC中参与pH一定的缓冲溶液的作用有何不同？IPC参与pH一定缓冲液的作用是

对于较弱酸碱,调理pH值改善离子化程度,以改变保存值与分开选择性,,控制在pH值在2-7以保证键合相稳定.

ISC参与pH一定缓冲液的作用是

分析弱酸样品,滚动相参与少量弱酸,分析弱碱性样,滚动相参与少量弱酸,来抑制样品的解离.增加保存时间和k

IEC参与pH一定缓冲液的作用是

pH值降,弱电解质离解减少,使溶质的离解被抑制,使保存时间降少,Ks降低

10．空间排阻色谱法的英文缩写是什么？简述其分开原理以及洗脱顺序?答：空间排阻色谱法的英文缩写是ＳＥＣ。其分开原理：利用凝胶的孔径与被分开组分分子线团尺寸相对大小关系而对高分子溶液进行分开分析，分开过程类似于分子筛：留下小的，排出大的。

洗脱顺序：洗脱顺序取决于分子线团尺寸；大粒径的分子先洗脱下来，由于难以进入凝胶孔隙中，所以路径最短，保存时间最短，ｋ最小。

11．什么叫做凝胶的渗透极限？什么叫做凝胶的排阻极限？什么叫做凝胶的选择性渗透？答：

1)当凝胶的孔穴都能全部接受样品分子时（分子量大），[Xs]?[Xm],Kp?1：凝胶的＂

渗透极限＂－全渗透，VR?VO?VS?VT最大

2)当凝胶的孔穴都不能接受样品分子时（分子量小），Xs?0,Kp?0；凝胶的＂排阻极

限＂－全排斥，VR?V0最小

3)不同尺寸的分子的Kp在0~1之间：凝胶的＂选择性渗透＂，VR?V0~V0?VS

12．简述UVD，RID，FD，ELSD，ECD，MSD等高效液相色谱检测器的主要特点。答：ＵＶＤ：不破坏样品，与其它检测器串联，可用于制备样品受流速和温度变化影响小，适于梯度洗脱

滚动相的截止波长必需小于样品的检测波长（缺点）选择性检测器

可直接用于定量分析的浓度型检测器

ＤＲＩＤ：受温度、压力、滚动相组成影响很大，不适于梯度流脱通用性检测器

可进行定量分析的浓度型检测器

ＦＤ：与ＵＶＤ相比：有极高的灵敏度和良好的选择性，最灵敏的ＨＰＬＣ检测器，特别适于痕量分析。

是可直接用于定量分析的浓度检测器ＥＬＳＤ：通用性的质量型检测器ＥＣＤ：选择性的检测器

可进行定量分析的浓度型检测器

ＭＳＤ：软电离：产生准分子离子，易确定分子量碰撞诱导解离：多级质谱提供丰富结构信息

LC-MS接口技术是解决离子化问题的关键通用性、浓用性以及质量型检测器

13．为何说检测限是衡量检测器性能的重要指标？

答：敏感度又叫检测限，是响应值恰为２倍噪音时所需要的样品。

敏感度同时考虑了检测器的噪音和灵敏度，是仪器整体性能的综合量度敏感度全面反映了检测器的质量，是衡量检测器性能的重要指针它不仅取决检测器性能，还与色谱操作条件、仪器的稳定性有关

14．在高效液相色谱分开中，为何有时需要进行溶剂梯度洗脱？答：

擅长分开宽ｋ值范围的繁杂混合物，且分析时间短改善分开，提高灵敏度，提高检测性能可以降低难洗脱溶质对色谱柱的污染但简单引起基线漂移，不太适合定量。

15．简述薄层色谱的基本操作程序？答：

1)展出容器的准备

2)薄层板的准备：包括薄层板的古铺制、自然枯燥以及活化3)点样

4)薄屠板的溶剂预平衡和展开5)定性（定性）／洗脱（半定量）

三、计算题1．在一根3m长的色谱柱上分开一个混合试样，组分1和2的保存时间分别为12分钟和17分钟，滚动相保存时间为1分钟，组分2的峰底宽亦为1分钟。（1）求两组分的调整保存时间。

（2）用组分2求有效塔板数及有效塔板高度（3）求两组分的容量因子（4）求相对保存值（5）求分开度

（6）若使两组分刚好完全分开，柱子至少多长？答:

（１）求两组分的调整保存时间。

'tR1?tR1?to?12?1?11min'tR2?tR2?to?17?1?16min

（２）用组分2求有效塔板数及有效塔板高度

neff?16?(H?Lneff?tR2W3')2?16?(161)2?4096

4096?0.00073m

（３）求两组分的容量因子

由tR1?t0(1?k1)得k1?tR1totR2to?1?121171?1?11

k2??1??1?16

（４）求相对保存值

α?k2k1?1611?1.455

（５）求分开度

n40961.455?116???1??k2???R??????4.709?????4?1?k41.4551?16???2?

（６）若使两组分刚好完全分开，柱子至少多长？若要使两组分刚好完全分开,则R=1.5

L/H1.5?L?0.3m4???1??k2??????????1?k2?????L/0.000734?1.455?11.455?161?16

2．Glajch三角形法则相关计算：

（1）正相色谱10%CHCL3/己烷二元溶剂体系中氯仿分开效果不好，试选择等溶剂强度的新的溶剂系统并计算其组成？

SolventP’hexane0.1ether2.8dichloromethane3.1chloroform4.1

答:

由题意得,

φdichlormethane?φchlorform?PchlorformPdichloromethane'?10%*4.13.1?0.132

即新的二元系统是13.2%二氯甲烷/己烷

（2）反相色谱的三角形等洗脱面一点滚动相组成为70%的甲醇/水，试根据Glajch三角形法则计算三角形中其它各点滚动相的组成。SolventSwatermethanolacetonitriletetrahydrofuron答:

由题意得,

φφ?φ?SmetholStetrahydro'furan'acetonitrile03.03.24.5?φmethol?SmetholSacetonitrile'?70%*33.2?0.656

tetrahydrofuranmethol?70%*34.5?0.4671.70%甲醇/水2.65.6%乙腈/水3.46.7%四氢呋喃/水4.0.35甲醇:0.33乙腈5.0.33乙腈:0.23四氢呋喃6.0.33甲醇:0.23四氢呋喃

7.0.23甲醇:0.22乙腈:0.15四氢呋喃8.0.47甲醇:0.10乙腈:0.075四氢呋喃9.0.11甲醇:0.44乙腈:0.075四氢呋喃10.0.11甲醇:0.10乙腈:0.31四氢呋喃

3．用内标法测定复方APC片剂中三组分的含量对照品溶液的配制：确凿称取阿司匹林、非那西丁、咖啡因及内标物扑热息痛的标准品各0.220，0.150，0.035和0.035g，分置100mL容量瓶中，用乙醇-氯仿（1：1）溶解，定容。

样品溶液的配制：取10片研成细粉，确凿称取约一片量0.5005g，用上述溶剂屡屡萃取转移至100mL容量瓶中，加内标物扑热息痛的标准品0.035g溶解，定容。

每个供试品溶液进样三次，每次2μL。对照液进样结果如下：A，S，P，C的峰面积平均值分别为154856，171222，692272和372221面积单位；样品溶液进样结果如下：A，S，P，C的峰面积平均值分别为178024，202694，820968和407792面积单位。

（１）试用内标对比法求A，P和C的百分含量、标示量%及每片中绝对含量；答：

A(%)?(AA/AS)樣品(A?mAA/AS)對照品m?178024/202694154856/171222?0.2200.5005?100%?42.68%P(%)?(AP/AS)樣品?mP?820968/202694?0.150(A?100%?30.02%P/AS)對照品m692272