维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点对比

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目前研究维生素C测定方法的有好多，如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果。

目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是HPLC法上升趋势尤为明显。

一、荧光法1．原理

样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。

脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022g/ml。

2．适用范围

本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定

二、2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC，GB／T6195—1986）1、原理：

还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。

2、优点

简便、快速、比较确凿等，适用于大量不同类型样品的分析。

3、缺点

2，6一二氯靛酚法虽然简便，但是药品价格昂贵。而且不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰。假使样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观测造成困难。

三、分光光度法1、原理：

维生素C在空气中特别在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸，pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸。脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎，脎在500nm波长有最大吸收。根据样品溶

液吸光度，由工作曲线查出VC的浓度，即可求出VC的含量。

四、2，4-二硝基苯肼法1、原理

总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。

2、适用范围

本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。

3、缺点：

易受色素影响，当待测液本身有颜色时，吸光值会受到影响，从而影响到测定结果的确凿性。且该法操作麻烦，试剂较多，耗时较长。

五、磷钼蓝分光光度法测定维生素C1、测定原理

染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。

用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。

2、优点

该方法简单、快速、确凿，且回收率特别高。

六、紫外快速测定法原理：

维生素C的2，6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。

七、高效液相色谱法测定维生素C（HPLC法）

1、原理：

高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻

力，需用高压输送滚动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。

色谱法的分开原理是：溶于滚动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分派、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

高效液相色谱法按分开机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分派色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。

2、优点：

高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，具有灵敏度高、选择性好、测定迅速、分析时间短、样品处理简单和测定结果重复性好等优点。是测定维生素C较好的方法。

八、碘量法

1、维生素C的原理

维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种。当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子。随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。

九、电位滴定法

1.原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.

Pt为指示电极，甘汞作参比电极

E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I-+k(常数)

随着滴定剂的参与，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；从而指示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。计算式：(与碘量法一致)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%

2、优点：

解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题

用线性电位滴定法分析抗坏血酸,抗坏血酸回收率为99.80％～101.5％,相对标准偏差为0.61％;分析维生素C片中的抗坏血酸,相当标示量为98.90％～100.5％,相对标准偏差不大于0.48％,说明线性电位滴定法分析维生素C片中的抗坏血酸含量是可行的.

十、二甲苯－二氯靛酚比色法1、适用范围

测定深色样品中还原型抗坏血酸。

2、测定原理

用定量的2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应,多余的染料在酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。

十一、荧光分析法原理：

用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸，然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物。样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中参与硼酸，使脱氢抗坏铁酸形成硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物，它不与邻二苯胺生成荧光化合物。这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正。

十二、库仑滴定法1、原理

库仑滴定法属于恒电流库仑分析。是在特定的电解液中，以电极反应产物为滴定剂（电生滴定剂，相当于化学滴定中的标准浓液）与待测物质定量作用，借助指示剂或电位法确定滴定终点。

基本依据－－法拉第电解定律：电解时，电极上发身化学反应的物质质量与通过电解池的电量Q成正比

即：

m=MQ/zF=MIt/zF

计算式：Wvc=MvcQ/zFm

样式中：F法拉第常数（96487C）

Z电极反应中转移的电子数注意：使电解效率100％

2、优点：

1）无需标准化的试剂溶液，免去了大量的标准物质的准备工作（配制，标定）；2）只需要一个高质量的供电器，计时器，小铂丝电极，且易于实现自动化控制；3）若电流维持一个定值，可大大缩短了电解时间；

4）电量简单控制及确凿测量；方法灵敏度，确凿度较高；

5）滴定剂来自电解时的电极产物，可实现容量分析中不易实现的滴定过程，如Cu＋,Br2,Cl2产生后马上与待测物反应。

3、缺点

要求电解过程没有副反应和漏电现象，即使电解电极上只进行生成滴定剂的反应，且电流的效率是100％

十三、L-抗坏血酸(维生素C)测定试剂盒（酶学方法）1.适用范围：

应用于食品、饮料及生物制品检测

2.比色方法

此方法用于检测水果和蔬菜（如马铃薯），水果和蔬菜产品（如西红柿酱、泡菜、果酱、果汁），婴儿食品，啤酒，饮料，流食，粉状和烘烤剂，肉产品，奶制品，葡萄酒，还有动物饲料，医药品（如维生素配制、阵痛药、退烧药）和生物样品中的L-抗坏血酸(维生素C)，

3、原理

L-抗坏血酸(x-H2)+MTT+PMS—>dehydroascorbate(x)+MTT-formazan+H+X

L-抗坏血酸+?O2AAO——>dehydroascorbate+H2OX

十四、光电比浊法原理：

在酸性介质中，抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进行氧化还原反应。1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒。在一定条件下，生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液。当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内，该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比。将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸。

十五、近红外漫反射光谱分析法(NIRDRSA)1、原理：

自1965年首次应用于繁杂农业样品分析后，因其具有样品处理简单、分析速度快等优点，逐渐受到分析界的重视。此法已广泛应用于石油、纺织、农业、食品、药物分析等领域。在药物分析中，NIRDRSA可以进行定性鉴别、定量分析等工作。

近红外谱区光的频率与有机分子中C-H，O-H，N-H等振动的合频与各级倍频的频率一致，因此通过有机物的近红外光谱可以取得分子中C-H，O-H，N-H的特征振动信息。由于近红外光谱的谱带较宽，谱图重叠严重，不能用特征峰等简单方法分析，需要运用计算机技术与化学计量学方法。本试验应用的是偏最小二乘法(PLS)，首先利用定标集建立预计模型，然后将预计集作为未知样本，根据预计模型进行预计。

对所选择的谱区范围，采用对反射吸光度的MSC(散射校正)预处理，对25个

样品进行交织验证，即选择一个样品，从校正集中除去该样品对应的光谱和浓度数据，并设光谱主成分数为1，循环迭代样品数和主成分数，计算预计残差平方和,确定所需主成分数。若主成分选择过小，会丢失样品信息，过大会造成过度拟合。当主因子为2时，预计残差平方和值最小，为2.029，应选择主因子数为2，建立最正确PLS校正数学模型。

2、优点：

维生素C是一种不稳定的二烯醇化合物，其药典含量测定方法为碘量法。我们采用近红外漫反射光谱技术直接测定维生素C含量，样品无需预处理，方法简便，结果可靠。

十六、原子吸收间接测定法1、原理：

这是最近报导的一种Vc测定法，其原理是在酸性介质中还原型Vc可将Cu2+定量地还原为Cu+并与SCN—反应生成CuSCN沉淀，在高速离心机下有效地分开出沉淀，防备洗涤后再经浓硝酸溶解，用原子吸收法测定铜含量，即可推知样品中维生素C的含量。2、优点：

能不受果蔬自身颜色的干扰，有一定的发展前景。根据试验，发现此法结果偏低，还有待于进一步优化改善。3、缺点：

该法试验仪器较昂贵，主要问题是操作过程中反应完全与否，沉淀物洗涤、离心反复屡屡，极简单带来误差

十七、金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法1、原理：

本发明公开了一种用金纳米微粒分光光度法测定维生素Ｃ的方法。于５ｍＬ比色管中，依次参与０．１－２．０ｍＬ浓度为９５．６４μｇ／ｍＬ的ＨＡｕＣｌ↓［４］溶液，０．０２－０．５０ｍＬ浓度为１％的柠檬酸三钠溶液，再参与０．００１－２．０ｍＬ浓度为０．３８ｍｇ／ｍＬ的维生素Ｃ溶液，混匀，加二次蒸馏水定容至刻度，再充分混匀，在分光光度计上，于５２０ｎｍ处测定吸收值，同时作空白试验。

2、优点

本发明测定方法简单、快捷，所用仪器价廉，试剂易得。

十八、L-半胱氨酸修饰电极测定维生素C的方法

本法研究了L-半胱氨酸修饰电极的制备方法和其电化学行为，并用于维生素C的测定，发现该电极对VC有明显的电催化作用，在pH=10.0的NH4Cl-NH3·H2O缓冲溶液中，VC在L-半胱氨酸修饰电极上产生一灵敏的氧化峰，峰电流与VＣ

的浓度在1.0×10-3~1.0×10-6mol/L的范围内呈良好的线形关系，相关系数为0.9962，其最低检测限可达1.0×10-6mol/L，与紫外光谱法测定