自然药物系统预试验操作方法总结

本文格式为Word版，下载可任意编辑——自然药物系统预试验操作方法总结Anastasia.HanOct.19th,2023自然药物系统预试验操作方法总结

中草药主要来源于植物。植物的化学成分较繁杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、苷类、挥发油、有机酸、鞣质等。

各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特别气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜味者多含糖类；味苦者大多含生物碱、苷类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。

中草药所含化学成分均为多类的混合物，分析时往往相互干扰，不易得到正确结果。因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。对未知成分的中草药，在分开其有效成分之前，作初步检查，籍及了解其中所含成分的概貌是很有必要的。

预试验主要有两类方法：一类是单项试验法即根据工作需要，有重点地检查其某类成分；另一类是系统预试法，应用一些简单的定性试验，即对中草药中各类成分进行比较全面的定性检查。

方法：试管反应+色谱鉴别（纸色谱+薄层层析）

1预试溶液的制备

系统预试方法好多，常采用的为递增极性溶剂法，就是根据中草药成分亲脂性强弱，选用各种极性不同的溶剂，依次进行提取，使其分为若干部分，并按其可能存在的成分选择适当的鉴别反应。最终做出较合理的判断。

方法一：将药材直接放入连续加热回流提取器中，依次用石油醚、乙醚或氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇或甲醇、水回流提取，将药材依照极性的大小由小至大分成（Ⅰ～Ⅶ），加压回收溶剂，浓缩枯燥，即得。这七部分所含化学成分大体如下：

Ι石油醚部分——挥发油、萜类、甾体、脂肪油等；

Ⅱ氯仿部分——生物碱（叔胺碱、仲胺碱）、黄酮类、游离香豆素和内酯、游离木质素、游离醌类、萜类、甾体皂苷元、脂肪酸、

环肽等；

Ⅲ乙酸乙酯部分——游离醌类、黄酮、少量强心苷等；Ⅳ水饱和正丁醇部分——多数苷类；Ⅴ丙酮部分——强心苷等；

Ⅵ95%乙醇部分——多数苷类（醌苷、香豆素苷）、游离木质素、黄酮及其苷、萜及萜苷、强心苷、甾体皂苷及皂苷元、鞣质、氨基

酸、环肽、生物碱（季铵碱、碱盐、某些含N-O结构生物碱）等；

Ⅶ水部分——黄酮、三帖皂苷、强心苷、甾体皂苷、生物碱（季铵碱、碱盐、某些含N-O结构生物碱）、鞣质、氨基酸、环肽、蛋

白质、多糖。

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方法二：将药材样品先用70-95%的乙醇进行回流提取，然后回收乙醇补加水至1：1体积，再分别用石油醚、氯仿或乙醚、乙酸乙酯、正丁醇，分取有机层；其药渣再以水煎煮，便可得到五部分（Ⅰ～Ⅴ），大体成分如下：

Ι石油醚层——油脂、叶绿素、亲脂苷元、甾醇等；Ⅱ氯仿层——生物碱、脂肪酸、多数苷元等；

Ⅲ乙酸乙酯层——亲脂性单糖苷、酚性物、极性大的苷元等；Ⅳ正丁醇层——多数苷类、水溶性生物碱；Ⅴ水层——糖、氨基酸、可水解性鞣质等。Ⅵ水煎液——大分子蛋白质、粘液质、多糖等。

方案三：先用甲醇、丙酮等弱亲脂性溶剂提出绝大多数成分，然后用酸性水溶液温浸提出多糖、蛋白质等，总提取物再进一步用溶剂提取，分出酸性、碱性、中性成分、水蒸汽蒸馏分出挥发性成分。

方案四：将药材样品先用水煎煮法进行提取，滤液浓缩成1：1或1：2体积后，分别以氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得四部分。减压回收溶剂，浓缩成浸膏，即得。由于中药复方多为汤剂有效，所以这种提取分开方法适合于中药复方有效部位的筛选。

2鉴别本卷须知

2.1根据各灰成分不同性质，选用适合的溶剂提取，以保证等成分能被提取出来。2.2检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。

2.3检品提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。相差甚大时应事先调理。2.4提取液较深时，常易影响观测鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。

2.5鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等状况。最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。

2.6在鉴别试验中，假使某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。首先应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应，否则应检查其他类成分能否产生该反应，从多方面加以判断。但也应注意，某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应，如检查黄酮类的盐酸――镁粉试验，它只对黄酮类中的羟基黄酮类（黄酮醇类）反应明显，其余类的黄酮类则不甚明显，但也不能轻易否定不是黄酮类，为了避免孤立和片面的下结论，一定要全面考虑综合分析。

中草药化学成分一般鉴别试验只是一个初步判断，最终确证尚需进一步提纯，以鉴定后才能予以确定。

3鉴别方法

3.1挥发油、油脂

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挥发油——主要溶于石油醚、乙醚、二硫化碳、油脂等；在高浓度乙醇中能全部溶解，在低浓度乙醇中只能溶解一部分。油脂——易溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿、汽油等有机溶剂。

3.1.1油斑试验：将石油醚提取液滴于滤纸上，室内挥发。能自然挥发或加热后挥发者可能为挥发油；假使出现持久性的透明斑点，可能为油脂或类脂。

3.1.2香草醛-60%浓硫酸试验：将石油醚提取液滴于滤纸或薄层板上，喷洒试剂，如显紫、蓝、黄、红色可能含挥发油(对某些酚类、萜类、甾体和甾醇等皆可显色)。

3.1.3磷钼酸试验：将石油醚提取液滴于滤纸上，喷洒25%磷钼酸试液，放入115-118℃烘箱中2min，如浮现黄色，背景为黄绿色或藏青色，说明可能含有还原性物质、甾体、类脂；若喷洒5%磷钼酸试液→蓝色（油脂、三萜、甾醇）

3.1.4丙烯醛试验：将试液3滴和倍量无水NaSO4固体置于试管中，直火加热，甘油和甘油脂类能生成有刺激臭味的丙烯醛。(可用斐林试剂检查)3.1.5显色反应：挥发油中

3.1.5.1若含有酚类成分，参与三氯化铁的乙醇溶液，可产生蓝色、蓝紫色或绿色反应；3.1.5.2若含有羰基化合物，参与苯肼或苯肼衍生物、羟胺等试剂，可生成结晶性的衍生物；3.1.5.3若含有醛类化合物，参与硝酸银氨试液，可发生银镜反应；

3.1.5.4若含有内酯类化合物，于样品的吡啶溶液中参与亚硝酰铁氰化钠及氢氧化钠溶液，出现红色并逐渐消失；3.1.5.5若含有不饱和化合物，于样品中参与溴，红棕色褪去；3.1.5.6若含有奥类衍生物，参与浓硫酸，可产生蓝色或紫色反应。3.1.6薄层色谱法

挥发油成分薄层色谱的条件主要是根据极性大小加以分开的。油中所含各类化合物的极性顺序为：烃（萜）＜醚＜酯＜醛、酮

＜醇、酚＜酸,因此,可试用不同极性的展开剂进行分开。

吸附剂——硅胶、氧化铝，其中以硅胶常用。展开剂——不含氧的烃类成分——石油醚或正己烷

含氧化合物——石油醚或正己烷：乙酸乙酯（85：15）

显色剂——①香草醛-浓硫酸试剂：与挥发油中各成分产生多种娇艳的颜色。

②2%高锰酸钾水溶液：在粉红色背景产生黄色斑点时说明含不饱和化合物。

③荧光素-溴试剂：在长波长的紫外光灯下观测，如薄层斑点显黄色荧光，则说明含乙烯基化合物。④2.4-二硝基苯肼试剂：喷试剂后如产生黄色斑点说明可能含有醛或酮类化合物。⑤异羟肟酸铁试剂：喷试剂后如产生淡红色斑点说明含有内酯类化合物。⑥三氯化铁试剂：斑点显蓝色或绿色，含有酚性物质。⑦0.05%溴酚蓝乙醇溶液：斑点显黄色说明含酸类物质。

⑧硝酸铈铵试剂：在黄色背景上显棕色斑点，说明含有醇类物质。

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⑨对二甲氨基苯甲醛试剂：在80℃加热10分钟，显深蓝色，可能含类物质。⑩碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂：斑点显蓝色说明含过氧化物。

3.2萜类

萜类——难溶于水，溶于甲醇、乙醇，易溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、苯等亲脂性有机溶剂。具有羧基、酚羟基及内酯结构的萜还

可以分别溶于碳酸氢钠或氢氧化钠水溶液，加酸之后使之游离或环合，又可以从水中析出或转溶于亲脂性有机溶剂。

萜苷——一般能溶于热水，易溶于甲醇及乙醇，不溶于或难溶于亲脂性有机溶剂。

3.2.1卓酚酮类

3.2.1.1三氯化铁反应：与1%的三氯化铁溶液反应生成赤色络合物。

3.2.1.2硫酸铜反应：与稀硫酸铜溶液反应生成稳定的绿色结晶。此结晶可用氯仿重结晶，并具有高熔点。3.2.2环烯醚萜类

3.2.2.1Weiggering反应：取新鲜药材1g，适当切碎，参与1%盐酸5ml，浸渍3-6小时，取此浸渍液（上清液）0.1ml转移至装有Trim-Hill试剂（乙酸10ml、0.2%硫酸铜水溶液1ml、浓硫酸0.5ml混合液）试管内，混匀，加热至产生不同颜色。

3.2.2.2Shear反应：Shear试剂（浓盐酸：苯胺=1：15）多能与吡喃衍生物产生特有的颜色。3.2.3奥类化合物

3.2.3.1Sabety反应：取挥发油1滴溶于1ml氯仿溶液中，参与5%溴的氯仿溶液数滴，若产生绿、紫或绿色，说明含有奥类衍生物。

3.2.3.2Ehrlich试剂反应：取挥发油适量与Ehrlich试剂（对-二甲胺基苯甲醛-浓硫酸试剂）反应，若产生紫色或红色，说明含有奥类衍生物。

3.2.3.3对-二甲胺基苯甲醛显色反应：挥发油经薄层色谱展开后，再喷以由对-二甲胺基苯甲醛0.25g、乙酸50g、85%磷酸5g和水20ml混匀后组成的显色剂（避光可保存数月），室温显蓝色，示有奥类衍生物；氢化奥80℃加热10min显蓝色。蓝色随后减弱转为绿色，最终转为黄色，将薄层放在水蒸气上则蓝色可现。3.2.3.4色谱检识

吸附剂：硅胶G、氧化铝G及此二种吸附剂与硝酸银组成的络合吸附剂

展开剂：石油醚（30-60℃）、乙烷、苯，分别参与不同比例的乙酸乙酯或乙醚，极性大的萜醇或萜酸类可参与氯仿或甲

酸、乙酸展开分开。

显色剂：通用显色剂——硫酸、香兰素-浓硫酸、茴香醛-浓硫酸、五氯化锑、三氯化锑、碘蒸气、磷钼酸；

专属显色剂——2，4-二硝基本肼（检识醛、酮类化合物）、邻联茴香胺。

3.2.4三萜及三萜皂苷

游离三萜类——溶于石油醚、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，而不溶于水。

三萜皂苷——可溶于水，易溶于热水、稀醇、热甲醇、热乙醇中，几乎难溶于或不溶于丙酮、乙醚及石油醚等极性小的有机溶剂；在含水正丁醇或戊醇中溶解度较好。

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3.2.4.1泡沫试验：取检品的水溶液2ml于带塞试管中，用力振摇3分钟，即产生持久性蜂窝状泡沫（维持10分钟以上），且泡沫量不少于液体体积的1／3。

①常用的增溶剂吐温、司盘，振摇时均能产生持久性泡沫，要注意区别。

②另取两支试管，各加试品热水溶液1ml，一管内加5％NaOH液2ml溶液。另一管加人5％盐酸溶液2m1，将两试管用力振摇一分钟观测两管出现泡沫状况，如两管的泡沫高度相像，说明为三萜皂甙，如含碱液管比含酸液管的泡沫高达数倍，说明有甾体皂甙。三萜皂甙为酸性皂甙在酸性水溶液中形成较稳定的泡沫；甾体皂甙为中性皂甙在碱性溶液中能形成较稳定的泡沫。

3.2.4.2显色反应

3.2.4.2.1醋酐-浓硫酸试验（Liebrmann-Burchard反应）：取检品的水溶液置蒸发皿中，于水浴上蒸干，残渣参与少量冰醋酸使溶解，再参与醋酐-浓硫酸（19：1）试液，浮现红紫色并变成污色绿色（甾类、三萜类成分或皂苷）。

黄-红-紫红色-蓝-褪色（三萜皂苷）黄-红-紫-污绿（甾体皂苷）

3.2.4.2.2三氯醋酸反应(Rosen-Heimer反应)：将样品液滴加在滤纸上，喷25%的三氯乙酸乙醇溶液，加热至100℃；加热至60℃猩红色逐渐变成紫色，为甾体皂苷。

3.2.4.2.3冰醋酸-乙酰氯反应(Tschugaeff反应)：将样品溶解于冰醋酸中，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈淡红色或紫红色。

3.2.4.2.4氯仿-浓硫酸反应(Salkowski反应)：将样品溶于氯仿，参与浓硫酸后，在浓硫酸层浮现红色或蓝色，氯仿层有绿色荧光出现。

3.2.4.2.5Kahlenberg反应将样品的氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷20%五氯化锑或三氯化锑的氯仿溶液，枯燥后，60-70℃加热，显蓝色、灰蓝色、灰紫色等多种颜色。

3.2.4.3溶血试验：取试管4支，分别参与滤液0.25、0.5、0.75ml，然后依次分别参与生理盐水2.25、2.0、1.75、1.5ml，使每一个试管中的溶液都成为2.5ml,再将各试管参与2％的血细胞悬液2.5ml，振摇均匀后，同置于370水浴或25－270的室温中注意观测溶血状况，一般观测3小时即可，或先滴红细胞于显微镜下，然后滴加检液看血细胞是否消失。如有溶血现象示正反应。

①鞣质对血红细胞有凝集作用，干扰溶血试验的观测，应事先除去（可用取胜酰胺粉吸附或用明胶沉淀）。

②检液应为中性溶液。

③浓硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、浓硫酸-香草醛等的显色原理主要是使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色

3.2.4.4色谱检识3.2.4.4.1色谱检识：

薄层色谱——吸附剂——硅胶

展开剂——游离三萜化合物——环己烷：乙酸乙酯（1：1）、氯仿：乙酸乙酯（1：1）、苯：丙酮（1：1）、氯仿：

丙酮（1：1）等亲脂性有机溶剂。

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纸色谱——展开剂——游离蒽醌——一般在中性溶剂系统中进行，常用水或甲醇饱和的石油醚，如石油醚-丙酮-水（1∶1∶3上层）、

97％甲醇饱和的石油醚；也可用酸性溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上层）；非水溶剂系统，如以10％甲酰胺的乙醇液处理滤纸，石油醚-氯仿（94∶6）为展开剂，羟基蒽醌苷元可获得较好的色谱效果。显色方法可参照薄层色谱法。

蒽醌苷类——极性较强，需要选用极性较大的溶剂系统，如正丁醇-醋酸乙酯-水（4∶3∶3上层），氯仿-甲醇-水（2∶1∶1下层）、

苯：丙酮：水（4：1：2）。

3.9苯丙素类化合物

香豆素类——游离的香豆素易溶于乙醚、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇，能溶于沸水，难溶于冷水；香豆素苷类易溶于甲醇和乙醇，可溶于水，而难溶于乙醚、氯仿等极性小的有机溶剂。

木质素类——游离木脂素多具亲脂性，易溶于苯、乙醚、氯仿、乙醇等有机溶剂，难溶于水，具酚羟基的木脂素可溶于碱水液中；木脂素苷水溶性增大。

3.9.1香豆素类3.9.1.1显色反应

3.9.1.1.1异羟肟酸铁反应：取1N盐酸羟胺甲醇液0.5m1，置于小试管中，加试液数滴，加2N氢氧化钾甲醇液使溶液呈碱性，在水浴上煮沸2分钟，冷却后滴加5％HCI使溶液呈酸性，加1％FeCL3溶液l—2滴，若出现紫红色，表现有香豆素或其他酯类，内酯化合物。3.9.1.1.2酚羟基反应：+三氯化铁溶液

3.9.1.1.3Gibb’s反应：pH为9-10条件下，与2，6-二氯苯醌氯亚胺反应，显蓝色。说明香豆素分子中C6位有取代基存在。

3.9.1.1.4Emerson反应：pH为9-10条件下，与Emerson试剂（4-氨基安替比林和铁氰化钾）反应，呈红色。说明香豆素分子中C6位有取代基存在。

3.9.1.2荧光试验：香豆素类化合物在紫外光（365nm）下，一般显蓝色或紫色荧光，加氨后呈黄色荧光。7-羟基香豆素类往往具有较强的蓝色荧光，加碱后，其荧光更强，颜色变为绿色；多烷氧基取代的呋喃香豆素类一般呈黄绿色或褐色荧光。

3.9.1.3开闭环反应：取试品的乙醇液2m1，加1％NaOH液1m1，于沸水浴上加热10分钟(若有沉淀过滤除去)，于澄明液中加2％HCI液酸化后，溶液变混浊，为内酯、香豆素类反应。

可同时取醇浸液2m1，不加试剂对照观测。

3.9.1.4色谱检识

薄层检识——吸附剂——酸性硅胶G、硅胶G、酸性氧化铝

展开剂——游离香豆素类——环己烷(石油醚)：乙酸乙酯（5：1-1：1）、氯仿：丙酮（9：1-5：1）等香豆素苷——不同比例的氯仿：甲醇

显色剂——UV→蓝色荧光；异羟污酸铁试液→红色

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还可有纸色谱、聚酰胺色谱。

3.9.2木质素类化合物

木脂素没有特征性的理化检识方法，常用的检识方法主要是针对木脂素结构中的功能基检识：

3.9.2.1三氯化铁反应——检查酚羟基

3.9.2.2Labat反应（没食子酸、浓硫酸）——检查亚甲二氧基（阳性呈蓝绿色）3.9.2.3Ecgrine反应（变色酸、浓硫酸）——检查亚甲二氧基（阳性呈蓝紫色）3.9.2.4色谱检识

吸附薄层检识——吸附剂——硅胶

展开剂——一般以亲脂性的溶剂如苯、氯仿、氯仿-甲醇（9:1）、氯仿-二氯甲烷（1:1）、氯仿-乙酸乙酯（9:1）和乙

酸乙酯-甲醇（95:5）等系统。

显色剂——茴香醛浓硫酸试剂①110℃加热5min；②5％或10％磷钼酸乙醇溶液120℃加热至斑点明显出现；③10％硫酸110℃

加热5min；④三氯化锑试剂100℃加热10min，在紫外光下观测；⑤碘蒸气，熏后观测应呈黄棕色或置紫外灯下观测荧光。

3.10鞣质、酚类

鞣质的极性较强，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等亲水性溶剂，可溶于乙酸乙酯、丙酮和乙醇的混合液，难溶或不溶于乙醚、苯、氯仿、石油醚及二硫化碳等亲脂性溶剂。少量水的存在能够增加鞣质在有机溶剂中的溶解性。

3.10.1三氯化铁试验：取检品的水溶液1ml，加三氯化铁试液1－2滴，浮现绿色、污绿色、蓝黑色或暗紫色（可水解鞣质显蓝-蓝黑色，缩合鞣质显绿色-污绿色）。

①鞣质均是多羟基酚的衍生物，即多元酚，能和三价铁离子发生颜色反应生成繁杂的络盐。②此反应如遇有矿酸或有机酸、醋酸盐等存在，能阻碍颜色的生成。③硝基酚类对