纯化水微生物限度检查法验证方案和验证报告

.*******验证文件颁发部门：质量部颁发部门：质量部生效日期：分发部门：工程设备部、质量部编号：VDP-JY-010-01-1共页第页起草：日期：日期：日期：..纯化水微生物限度检查法验证方案起草、审核、起草人：审核人：批准人：起草日期：审核日期：批准日期：颁发部门：质量部分发部门：质量部验证小组名称：纯化水微生物限度检查法验证方案验证小组验证组织：验证小组名称：纯化水微生物限度检查法验证方案验证小组组长质量部经理负责组织、实施组员1QC负责出具检验报告2QA负责验证方案确实认负责方法评价3微生物限度检验员负责测试操作和操作原始记录..名目验证目的验证人员职责参照标准验证工程内容评价合格标准验证试验材料验证明施打算菌液制备供试液制备计数方法验证掌握菌检查方法验证验证结论和评价..纯化水微生物限度检查法验证方案验证目的：及酵母菌数测定，掌握菌的测定。验证人员职责验证领导小组：、1、1、1、2、1、3工程验证小组长负责验证方案的起草负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺当实施。负责验证报告的起草。负责再验证周期确实认。质量部负责验证方案审核负责取样及对样品的检验负责收集验证记录，并加以分析后，帮助工程验证小组长起草验证报告。负责验证数据及结果的审核参照标准：2023XIII验证工程内容：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，掌握菌检查方法验证。评价合格标准：试验组的菌回收率和稀释剂比照组的菌回收率均不得低于70%。验证试验材料：被验证产品：〔1〕4T/h;(2)4T/h水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3)4T/h..检验量 5ml /次仪器设备：YX.400AYS－840101SPX-250BPYX-DUS-X303A-4天平PH7.0；0.9%的无菌氯化钠溶液验证用培育基名称改进马丁培育基改进马丁琼脂培育基验证用菌株：

批号 生产厂家代号代号来源培育时间验证菌株 培育基 培育温度〔代数〕 〔小时〕大肠埃希菌养分肉汤30—35℃金黄色葡萄养分肉汤30—35℃球菌养分肉汤30—35℃杆菌改进马丁培育基23—28℃改进马丁琼脂黑曲霉菌23—28℃培育基..序号1序号1工程确认名称实施负责人起始和完成日期2验证结果评定、验证周期确认、验证报告和发放验证证书菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备110ml35℃18~241ml9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，1010-6~10-7约为8.2110ml25℃培育24~481ml，参加9%9ml，混匀，1010-5~10-6细菌50~100cfu∕ml②接种黑曲霉的颖培育物于改进马丁琼脂斜面培育基上，25℃5~71ml9ml0.9%1010-550~100cfu∕ml供试品制备供试品名称及取样点：纯化水取样点〔1〕4T/h；(3)4T/h三楼固体制剂纯水箱总回水口。20230.45um50mm,规定每片滤膜上的菌1005ml。计数方法验证..试验组5mlPH7.0草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液〔50～100cfu/ml〕1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培育基上培育。菌液组 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml面液分别注入琼脂培育基，每个面液分别制备二个平皿，置35～36℃培育24小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml面液分别注入平皿中，并马上倾注玫瑰红钠琼脂制备二个平皿，24～25℃培育48小时。菌落计数结果〔2个平皿计数取平均值〕见下表10-510-5稀释10-6稀释10-7稀释试验次数12122大肠埃希菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉供试品比照组5ml0.9%无菌氯化钠溶液3100ml，平行两张滤膜，过滤后，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培育2稀释剂试验组0.9%300ml，以无菌操作参加过滤器内，每次在最终一次的冲洗液中分别参加上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液〔50～100cfu/ml〕1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培育基上培育。稀释剂比照组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml248～72h，观看结果，测定菌数。结果见附表..11、掌握菌检查方法验证〔常规法〕11.1试验组5mlPH7.0菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液各平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，接入胆盐乳糖培育基100ml中，按相应掌握菌检查法进展检查。故可按常规法进展掌握菌检查。122023XIII生物限度检查法检验，细菌、霉菌及酵母菌计数可承受薄膜过滤法检查。..附表1： 独立试验一：各试验组菌落计数〔回收率%〕取样点：试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株 平皿号 (cfu)

数(cfu)

落数(cfu)

数(cfu)

率(%)

收率(%)大肠埃希小时计数)金黄色葡萄球菌(培育计数)枯草芽孢杆菌(培育48小时计数)白色念珠小时计数)黑曲霉(培育计数)

12平均值12平均值12平均值12平均值12平均值结论：70%,按标准规定,本次试验结果符合规定。复核人(签名)： 试验人(签名)：..附表2：独立试验二：各试验组菌落计数〔回收率%〕试验时间年 月日 完成时间 年 月 日验证菌株 平皿号 (cfu)

数(cfu)

落数(cfu)

数(cfu)

率(%)

收率(%)大肠埃希小时计数)金黄色葡萄球菌(培育计数)枯草芽孢杆菌(培育48小时计数)白色念珠小时计数)黑曲霉(培育计数)

12平均值12平均值12平均值12平均值12平均值结论：70%,按标准规定,本次试验结果符合规定。复核人(签名)： 试验人(签名)：..附表3：独立试验三：各试验组菌落计数〔回收率%〕试验时间 年 月 日 完成时间年 月 日验证菌株 平皿号 (cfu)

数(cfu)

落数(cfu)

数(cfu)

率(%)

收率(%)大肠埃希小时计数)金黄色葡萄球菌(培育计数)枯草芽孢杆菌(培育48小时计数)白色念珠小时计数)黑曲霉(培育计数)

12平均值12平均值12平均值12平均值12平均值结论：霉菌及酵母菌数测定。复核人(签名)： 试验人(签名)：..******验证文件质量部纯化水微生物限度检查法验证报告质量部编号：VDP-JY-010-01-2共页第页起草：日期：日期：日期：颁发部门： 生效日期：分发部门：..目 录1、验证目的2、参照标准3、验证工程内容4、评价标准5、验证明施时间6、验证方法7、验证结论和评价..一、验证目的确认该方法适合于本公司纯化水细菌、霉菌及酵母菌数计数测定，掌握菌的测定。特对此检测方法进展验证。二、参照标准三、验证工程内容四、评价标准70%。五、验证明施(微生物限度检验室完成验证时间开头)开头，进展各种菌液、供试液的制备，开头验证工作。1、菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备110ml35℃18~241ml9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，1010-6~10-7约为白色念珠菌、黑曲霉菌悬液的制备110ml25℃培育24~481ml，参加9%9ml，混匀，1010-5~10-6细菌50~100cfu∕ml②接种黑曲霉的颖培育物于改进马丁琼脂斜面培育基上，25℃5~71ml9ml0.9%1010-550~100cfu∕ml..2.供试品制备供试品名称及取样点：纯化水。取样点箱口;(2)4T/h(3)4T/h纯水箱总回水口。5ml。六、验证方法〔一、细菌、霉菌及酵母菌计数方法1、试验组5ml，以无菌操作参加过滤器内，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3100ml，在最终一次的冲洗液中分别参加上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液各1ml，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培育基上培育。计数。2、菌液组 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml面液分别注入平皿中，并马上倾注养分琼脂培育基，每个面液分别制备二个平皿，置35～36℃培育24小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml面液分别注入平皿中，并马上倾注玫瑰红钠琼脂制备二个平皿，24～25℃培育48小时。菌落计数结果〔2个平皿计数取平均值〕见下表菌落计数结果〔cfu∕ml〕试验次数大肠埃希菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉

10-5稀释1 2

10-6稀释1

10-7稀释1 23供试品比照组5ml，0.9%无菌氯化钠溶液冲洗3100ml，平行两张滤膜，过滤后，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培育基平2稀释剂试验组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作参加过滤器内，每次..在最终一次的冲洗液中分别参加上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液〔50～100cfu/ml〕1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培育基上培育。稀释剂比照组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作参加过滤器内，平行两张248～72h，观看结果，测定菌数。附表〔二〕掌握菌检查方法验证〔常规法〕试验组5mlPH7.03枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液〔50～100cfu/ml〕1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，接入胆盐乳糖培育基100ml中，按相应掌握菌检查法进展检查。的该掌握菌检查。故可按常规法进展掌握菌检查。七、验证结论和评价通过三次独立试验,证明所承受的供试液制备方法及薄膜过滤法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。掌握菌可按常规法进展检查。70%,按标准规定,本次试验结果符合规定。2023XIII生物限度检查法检验，细菌、霉菌及酵母菌计数承受平皿法检查，符合规定。..附表1： 独立试验一：各试验组菌落计数〔回收率%〕取样点：试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株 平皿号 (cfu)

数(cfu)

落数(cfu)

数(cfu)

率(%)

收率(%)大肠埃希小时计数)金黄色葡萄球菌(培育计数)枯草芽孢杆菌(培育48小时计数)白色念珠小时计数)黑曲霉(培育计数)

12平均值12平均值12平均值12平均值12平均值结论：70%,按标准规定,本次试验结果符合规定。复核人(签名)： 试验人(签名)：..附表2：独立试验二：各试验组菌落计数〔回收率%〕试验时间年 月日 完成时间 年 月 日验证菌株 平皿号 (cfu)

数(cfu)

落数(cfu)

数(cfu)

率(%)

收率(%)大肠埃希小时计数)金黄色葡萄球菌(培育计数)枯草芽孢杆菌(培育48小时计数)白色念珠小时计数)黑曲霉(培育计数)

12平均值12平均值12平均值12平均值12平均值结论：70%,按标准规定,本次试验结果符合规定。复核人(签名)： 试验人(签名)：..附表3：独立试验三：各试验组菌落计数〔回收率