乙肝定量检测的临床应用详解演示文稿

乙肝定量检测的临床应用详解演示文稿现在是1页\一共有60页\编辑于星期一（优选）乙肝定量检测的临床应用现在是2页\一共有60页\编辑于星期一

亚洲是乙肝病毒肆虐的重灾区，全球2/3以上的慢性乙肝患者生活在亚洲。而根据1992年全国乙肝血清流行病学调查的结果，中国的乙肝病毒携带者近1.3亿人，平均每10个人中有一个，感染率更高达57.6%。现在是3页\一共有60页\编辑于星期一慢性乙型肝炎的治疗药物通用名商品名

生产商上市时间重组干扰素ɑ-2b甘乐能®

Schering1992拉米夫定贺普丁®GlaxoSmithKline1999阿德福韦酯贺维力™GileadSciences2005聚乙二醇化干扰素α-2a干扰素®HoffmannLa-RocheInc.2005恩替卡韦博路定™Bristol-MyersSquibb2006聚乙二醇化干扰素α-2b佩乐能Schering-Plough

2007替比夫定素比伏™Idenix/Novartis2007替诺福韦VireadGileadSciences2008现在是4页\一共有60页\编辑于星期一慢性乙肝治疗总体目标最大限度地长期抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。现在是5页\一共有60页\编辑于星期一ALTNormalizationHBsAglossHBV-DNASuppressionHBeAg-anti-HBeSeroconversion

Therapeuticendpointsovertime现在是6页\一共有60页\编辑于星期一312HBsAg转阴或血清转换HBeAg转阴或血清转换HBVDNA下降HBsAg(-)现在是7页\一共有60页\编辑于星期一

HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc结果分析＋－－－－HBV感染或无症状携带＋－＋－＋大三阳，急性或慢性乙肝＋－－＋＋

小三阳，趋于恢复－＋－＋＋乙肝恢复期－＋－－－有免疫力HBV检测结果的临床分析

为了更好地提高乙肝疗效，慢乙肝治疗过程中需要多指标进行疗效监测，尤其HBeAg和HBsAg等量化指标。现在是8页\一共有60页\编辑于星期一HBeAg定量监测更能有效预测远期的HBeAg转换率HBsAg定量监测更有效指导HBeAg转换的发生根据HBeAg和HBsAg定量制定个体化治疗策略可显著提高疗效HBeAg定量和HBsAg定量可指导临床用药HBsAb定量检测用于评价疫苗接种后监测乙肝定量检测的临床价值现在是9页\一共有60页\编辑于星期一一、HBeAg定量检测的临床应用乙肝治疗期间，24周HBeAg水平可指导HBeAg血清转换的发生定量HBeAg检测是指导乙肝治疗后发生HBeAg血清转换的有用指标。现在是10页\一共有60页\编辑于星期一ITT人群:n=814拉米夫定100mgqd派罗欣180gqw+拉米夫定100mgqd派罗欣180gqw+安慰剂qd02448随访24周72周随机化EOT48周EOF72周派罗欣对于HBeAg阳性CHB的研究现在是11页\一共有60页\编辑于星期一PEGIFN-2a单药治疗24周HBeAg定量的指导价值所有患者(n=263)52%(n=137)21%(n=54)27%(n=72)72周时HBeAg血清转换24周时HBeAg(PEIU/ml)52%(71/137)20%(11/54)>100<1010-1004%(3/72)NPV=96%Friedetal.Hepatology2008.现在是12页\一共有60页\编辑于星期一对干扰素应答的指导价值:HBeAgvsHBVDNA

HBeAg均值(IU/ml)HBVDNA均值(logcp/ml)第24周时:HBeAg>100IU/mL:NPV96%HBVDNA>9log:NPV86%第24周HBeAg比HBVDNA能更好地指导远期HBeAg血清转换率现在是13页\一共有60页\编辑于星期一二、HBsAg定量监测的临床意义血清HBsAg水平与肝内乙肝病毒cccDNA有很好的相关性，定量测定HBsAg滴度代表了肝内病毒数量。血清HBsAg含量水平预示乙肝患者所处疾病状态HBsAg定量水平可以指导干扰素的治疗应答，预测抗病毒治疗的疗效及预后。HBsAg定量检测－有望成为慢性HBV感染者进行干扰素治疗过程中，监测病毒复制的简单有效、经济的方法评估拉米夫定治疗的应答情况，有助于早期发现耐药突变现在是14页\一共有60页\编辑于星期一

HBsAg

&CCC-DNACCC-DNA-----HBV复制最特异的指标之一，是HBV前基因组RNA转录产物最原始的模板，HBV持续复制并感染的关键因素.现在是15页\一共有60页\编辑于星期一RelationshipbetweenHBsAgserumlevels(bytheLaurelltest)andintrahepaticcccDNAamounts(medianvalues0.07,0.3and1.8cccDNAcopies/cell)DifferencesbetweengroupswerehighlysignificantbyMann-WhitneytestWerle-LapostolleetalGastro2004;Volzetal,Gastro2007IntrahepaticcccDNAisamarkerofinfectedcell:

recentreportsshowacorrelationbetweencccDNAlevelsandHBsAgserumlevels现在是16页\一共有60页\编辑于星期一定量测定HBsAg滴度代表了肝内病毒数量血清HBsAg水平与肝内HBVcccDNA有较好的相关性，定量测定HBsAg滴度代表了肝内病毒数量。血清HBsAg水平与肝内HBV-DNA水平也有显著相关ABChanetal.ClinGastroHepatol2007A现在是17页\一共有60页\编辑于星期一血清HBsAg含量水平预示乙肝患者所处疾病状态

Rodellaetal.JClinVirol200610,0001000100.1AcuteConvalescentHBeAg+CHBHBeAg-CHBHBsAglog10IU/mL现在是18页\一共有60页\编辑于星期一派罗欣治疗24周HBsAg定量的指导价值32%52%16%停药1年后的HBeAg转换

24周HBsAg(IU/mL)51%(66/129)32%(53/166)>20,000<1,5001,500-20,00019%(8/43)Lauetal.APASL2009Poster083在24周时HBsAg<1500IU/mL的病人，51%获得治疗后1年的HBeAg血清转换，其中20%获得HBsAg清除对于部分应答的患者能否通过延长疗程或联合治疗提高疗效？所有患者现在是19页\一共有60页\编辑于星期一派罗欣治疗乙肝的新理念：个体化治疗快速HBeAg和HBsAg应答派罗欣180μg/周缓慢HBeAg和HBsAg应答周02448HBeAg和HBsAg抗原定量检测Brunetto,EASL-AASLD2008

48周标准治疗延长治疗(>48周)派罗欣180μg/周联合治疗(>48周)现在是20页\一共有60页\编辑于星期一派罗欣延长疗程治疗HBeAg阳性乙肝的研究Wuetal.APASL2008派罗欣180gqw治疗48周49例中国HBeAg阳性乙肝患者延长治疗72-96周18例HBeAg转换的患者继续治疗监测HBsAg定量情况31例HBeAg未转换的患者继续治疗监测HBeAg定量情况延长治疗72-96周现在是21页\一共有60页\编辑于星期一延长疗程可提高HBeAg和HBsAg清除率累积HBeAg消失率(%)派罗欣治疗周18%30%35%015456037%30Wu.APASL20081251%2436487253%9696周累积HBsAg清除率=27％

(13/49)48周累积HBsAg清除率=10％

(5/49)现在是22页\一共有60页\编辑于星期一延长治疗使HBeAg保持在低水平010020030040050060070080090010001100基线12周24周48周72周延长治疗组

–72周治疗(n=16)48周治疗

(n=15)定量HBeAg水平(PEIU/mL)Jiangetal.2009EASLposter现在是23页\一共有60页\编辑于星期一延长治疗使HBsAg进一步下降04080120160200240280基线12周24周48周72周延长治疗组

–72周治疗(n=16)48周治疗

(n=15)定量HBsAg水平(IU/mL)Jiangetal.2009EASLposter现在是24页\一共有60页\编辑于星期一可见：HBsAg定量检测可预测抗病毒治疗的疗效及预后。

CHB患者经过抗病毒治疗，HBsAg下降速度和幅度不同。HBsAg水平下降速度快、幅度大预示其治疗效果好。治疗结束时HBsAg水平越低，停药后随访的HBsAg清除率越高，患者预后越好。现在是25页\一共有60页\编辑于星期一HBsAg定量检测的临床应用

--用来监测经α干扰素治疗患者的HBV复制情况HBsAg定量检测－有望成为慢性HBV感染者进行干扰素治疗过程中，监测病毒复制的简单有效、经济的方法。AntiviralRes.1994Apr;23(3-4):251-7.现在是26页\一共有60页\编辑于星期一HBsAg定量检测的临床应用

---评估拉米夫定治疗的应答情况，有助于早期发现耐药突变。Kohmotoetal.JournalofMedicalVirology75:235–239(2005)现在是27页\一共有60页\编辑于星期一HBsAg定量作为临床监测指标的重要性

—专家共识HBsAg的消失是CHB患者可能达到的最佳治疗效果HBsAg的血清转换是CHB患者达到的最佳治疗效果完全免疫应答应定义为持续的HBsAg消失HBsAg的显著降低预示病人预后良好通过HBsAg定量检测可以预测那些患者最可能发生免疫应答，并指导治疗方案的制定现在是28页\一共有60页\编辑于星期一

三、表面抗体定量检测，

用于评价疫苗接种后监测

现在是29页\一共有60页\编辑于星期一

表面抗体(anti-HBs)监控具有重要意义

>10被视为阳性,但是>100才具备保护意义

现在是30页\一共有60页\编辑于星期一定量检测HBsAb指示免疫应答

HBsAb(IU/l) 接种的要求

<10 立即

11-100 3-6月后

101－1000 1年后

1001－10000 2-3年后

>10000 7年后提供准确可靠的疫苗接种前和接种后的保护性抗体量化指标国际标准阳性>10U/l；通常认为>100U/l才具备保护能力。现在是31页\一共有60页\编辑于星期一乙肝定量检测的临床价值乙肝定量检测的临床应用乙肝检测面临的挑战和应对HBsAg/Anti-HBs同时阳性的解读------让疗效看得见，增强治疗信心现在是32页\一共有60页\编辑于星期一在中国：HBsAg携带者超过1.2亿！慢性乙肝患者约3000万！每年报告乙肝新发病例数约50万！传统乙肝2对半检测都是ELISA方法完成，只能定性判定阴阳性。两对半最先进的检测技术是全自动化学发光技术，可以实现定量检测，更好辅助乙肝诊断与治疗中的疗效追踪。乙型肝炎检测现状现在是33页\一共有60页\编辑于星期一低浓度HBsAg的准确检测对于临床确诊和流行病学监控具有重要意义血清HBsAg是诊断HBV感染的直接证据所谓“HBsAg阴性”的HBV感染者中，有相当一部分为血清HBsAg呈低水平而被漏检的假阴性对于输血安全、院感控制具有重要意义对于流行病学、病原学研究具有重要意义现在是34页\一共有60页\编辑于星期一8089例非肝炎病区住院患者血清共检出HBsAg阳性816例（10.09%)HBsAg浓度在5ng/mL以下的有189例，占总数的2.34%，占HBsAg阳性人群的23.16%

1ng/mL以下的有84例(44.40%)1－2ng/mL的有33例(17.5%)2－5ng/mL的有72例(38.10%)低浓度HBsAg不容忽视1ng/mL以下者：占总数的1.04%

占HBsAg阳性人群的10.3%0.5ng/mL以下者占HBsAg阳性人群的约5%陈瑜等，中华检验医学杂志，2001，第3期楼滨等，中华临床感染病杂志，2009，第3期现在是35页\一共有60页\编辑于星期一但，HBsAg测定中可能存在的挑战：

假阴性HBsAg含量低于所用方法的测定下限之下。比如ELISA、试纸条等

如感染的“窗口期”、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等编码HBsAg的HBVS基因的突变HCV/HDV重叠感染对HBV复制和/或HBsAg的表达的抑制作用测定方法所用抗体对HBV不同基因型检测敏感性的不同现在是36页\一共有60页\编辑于星期一突变原因：自发突变（HBV聚合酶链反应的高出错率）选择性压力下的突变治疗抑制（拉米夫定）疫苗接种/高效价免疫球蛋白的应用疫苗的广泛应用，促使HBV发生变异的免疫压力逐渐增大，变异的机会增加。

突变的重要原因现在是37页\一共有60页\编辑于星期一99121124107137138139147149GDED164RE145144FY158s-s-s-s--s-s---s--s-MI195SWMI196198210Loop1of‘a’determinantLoop2of‘a’determinant(Carman,W.JViralHepatitis19974:11-20,modified)疫苗逃逸突变株:

T126S T131N M133L K141E D144E G145R126141131133诊断逃逸突变株:

P120T/A/Q D144A

T131K G145R抗病毒耐药突变株I195M W196SM198I120现在是38页\一共有60页\编辑于星期一

基因变异所致HBsAg假阴性的最大问题医学安全性尤其是逃逸突变株流行较广的地区，在HBV高流行区域，突变株的流行率也高导致疫苗免疫的失败要在进行人群HBV分子流行病学的基础上，研制针对主要流行HBsAg变异株的乙肝疫苗，保证免疫的有效性。临床检测中“两对半”异常模式的出现现在是39页\一共有60页\编辑于星期一最常见的HBsAg突变位点现在是40页\一共有60页\编辑于星期一对于ELISA检测，变异株的检出能力面临挑战现在是41页\一共有60页\编辑于星期一

变异株的检出能力与试剂的设计模式有关

检测模式

假阴性风险

（捕捉抗体/信号抗体）

单克隆/单克隆

单克隆/多克隆

双单克隆/多克隆

威高全自动微粒子化学发光法乙肝试剂通过使用多克隆抗体和多种单克隆抗体夹心法来提高变异株的检出能力，降低假阴性风险。现在是42页\一共有60页\编辑于星期一

化学发光法检测乙肝获得极高灵敏度，有效避免低浓度HBsAg漏检2010年版慢性乙型肝炎防治指南中明确指出：对于因其他疾病而接受化疗、免疫抑制剂治疗的患者，应常规筛查HBsAg；若为阳性，即使HBVDNA阴性和ALT正常，也应在治疗前1周开始服用拉米夫定或其他核苷(酸)类似物。对HBsAg阴性、抗HBc阳性患者，在给予长期或大剂量免疫抑制剂或细胞毒药物（特别是针对B或T淋巴细胞单克隆抗体）治疗时，应密切监测HBVDNA和HBsAg，若出现阳转则应及时加用抗病毒治疗。

现在是43页\一共有60页\编辑于星期一HBsAg定量检测试剂的特征方法学:

微粒子化学发光免疫分析技术(CMIA)高灵敏度高灵敏度≤0.05IU/ml(大约0.2ng/ml)高特异性:99.87%标准品溯源性:W.H.O国际标准(80/549)，具有WHO标准的定量检测试剂现在是44页\一共有60页\编辑于星期一临床特异性越高，假阳性率越低。在多个医院临床评估中对5892个标本的检测中，HBsAg显示出优异的99.94%的临床特异性1：HBsAg高灵敏度与高特异性的完美结合现在是45页\一共有60页\编辑于星期一“全自动化学发光定量检测HBsAg完美结合了高灵敏度（100％）与高特异性（100％），尽管这两者的判断标准是相互对立的。”

NPV：阴性预测值PPV：阳性预测值1：HBsAg高灵敏度与高特异性的完美结合TestResultNoofsamplespositivenegativeSensitivity%Specificity%NPV%PPV%HBsAgWEGOpositivenegative702002611100100100100AssayA2positivenegative589121103696.699.998.099.8AssayA3positiveNegative2665132211289.397.698.584.2和市场主流同类产品测试结果相比，全自动化学发光法测试结果具有更优异的特异性和灵敏度。现在是46页\一共有60页\编辑于星期一AssayI1:进口试剂AAssayI2:进口试剂BAssayA1:酶促发光试剂AssayA2:酶免试剂AAssayA3:酶免试剂B1：HBsAg高灵敏度与高特异性的完美结合高灵敏度可用于感染的早期检测临床灵敏度即阳性检出率；临床灵敏度越高，假阴性率越低。相比于同类产品检测结果，全自动化学发光检测乙肝具有更优异的灵敏度现在是47页\一共有60页\编辑于星期一COI:CutOffIndexAssayA1:酶免定性试剂1：HBsAg高灵敏度与高特异性的完美结合高灵敏度可用于感染的早期检测全自动化学发光定量检测HBsAg相对酶免定性试剂显示出更优异的血清转化灵敏度，能更早地检测出被感染的病人。威高内部实验结果。Cut-off现在是48页\一共有60页\编辑于星期一1：全自动化学发光法定量检测HBsAg

高灵敏度与高特异性的完美结合（1）优异的血清转化灵敏度保证感染的早期诊断（2）高度的特异性赢得最佳治疗时间现在是49页\一共有60页\编辑于星期一2：威高全自动化学发光

检测乙肝病毒突变的能力HBsAg抗原决定簇发生的突变可导致试剂漏检。HBsAg“a”决定簇上最主要的突变：（*WeberB.ExpertRevMolDiagn2005,5:75-91.）氨基酸的替换：G145R,K141E,T131I122和123之间的插入Subtypealleles:亚型等位基因aainsertion:氨基酸插入aasubstitutionsassociatedwithimmuneescape:与免疫漏检相关的氨基酸替换现在是50页\一共有60页\编辑于星期一威高全自动化学发光HBsAg能检测出所有的7个突变标本，而Assay1,2和3都有部分样本漏检威高全自动化学发光检测HBsAg突变样本现在是51页\一共有60页\编辑于星期一威高全自动化学发光法能检测乙肝突变样品，然而有些厂家的试剂则不能检测123、143位点的突变。不同的HBsAg免疫检测方法对检测不同HBsAg突变的能力及灵敏度不同。威高全自动化学发光法具有更全面的检测能力,灵敏地识别病毒变异2：威高全自动化学发光

检测乙肝病毒突变的能力现在是52页\一共有60页\编辑于星期一3：全自动化学发光定量检测HBsAb

用于监测免疫应答的疗