气相色谱分析法在药物分析中的应用

气相色谱分析法在药物分析中的应用2023/4/11第1页，共35页，2023年，2月20日，星期五一、如何判断待测物是否可以直接进行GC分析GC法广泛应用于气体、挥发性物质、高温下可气化的化合物，或经过化学衍生后可转化为高温下可气化的衍生物的液体或固体样品的定性和定量分析。2023/4/11第2页，共35页，2023年，2月20日，星期五（一）经验一对于分子量小于500的化合物，若分子结构中不含活泼氢的-OH，-NH2，-NH-，-COOH，-SO3H,-SH,—CONH2,-CONH-,-SO2NH2,-SO2NH-等极性官能团，且对热稳定，一般均可采用GC法直接分析。如：维生素E、维生素K1、四烯基萘醌、替补瑞酮、丁咯地尔等。2023/4/11第3页，共35页，2023年，2月20日，星期五（二）经验二对于分子量小于200的化合物，若分子结构中含有-OH，-NH2，-NHR，-SH,-CONH2极性官能团，但分子结构中的极性官能团总数不超过2个，且对热稳定，则一般可采用GC法直接分析。如：伪麻黄碱、苯丙醇胺、丁香酚、薄荷醇、龙脑、异龙脑等。2023/4/11第4页，共35页，2023年，2月20日，星期五（三）经验三1.糖类、氨基酸类、肽类、核酸类、蛋白质类等强化极性化合物或者生物大分子肯定不能直接进行GC分析。2.不符合经验一和二中很多分子量小于500的中等极性化合物往往可以直接进行GC分析。如：硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、尼索地平等地平类降血药，地西泮、硝西泮等西泮类安眠药。2023/4/11第5页，共35页，2023年，2月20日，星期五二、哪些化合物经过衍生化后可以进行GC分析对于分子量小于500，但由于分子结构中含有-OH，-NH2，-NH-，-COOH，-SH,-CONH2,-CONH-七钟活泼氢的极性官能团，且难以气化，无法直接进行GC分析的化合物，一般需经过衍生化后进行GC分析。实际上药物中直接进行GC分析的不到15%，但经过衍生化处理后70~80%的药物可进行GC分析。2023/4/11第6页，共35页，2023年，2月20日，星期五三、当待测物用GC法和HPLC法均可分析时应如何选择情况1：常规药物制剂主成分分析时，一般选用进样准确度和精密度高的HPLC法进行分析。如测定没有紫外吸收或紫外吸收很弱的挥发性油类成分的主成分或辅料的药物制剂，则采用GC法进行分析。2023/4/11第7页，共35页，2023年，2月20日，星期五情况2：化学药品、中成药、中药中间体和中药制品中残留溶剂检测一般采用GC法。原因：GC的FID和ECD检测残留溶剂的灵敏度高于HPLC的检测器。2023/4/11第8页，共35页，2023年，2月20日，星期五情况3：中药中农药残留检测要根据农药的种类、实验室的条件、实验成本综合考虑作出选择。GC-ECD：有机氯类农药GC-NPD：有机磷类农药GC-MS和HPLC-MS：测定农药残留有优势高的专属性和灵敏度情况4：体内药物分析方面，要根据方法的专属性、灵敏度、方便程度三个方面来考虑。2023/4/11第9页，共35页，2023年，2月20日，星期五第六章

气相色谱法在药物分析中的应用第二节

气相色谱法在中药分析中的应用一、中药材分析三、中药中农药残留的分析二、中成药和中药制品的分析2023/4/11第10页，共35页，2023年，2月20日，星期五一、中药材分析GC在中药材分析中主要用于药材中挥发性油类有效成分或指标性成分，以及测定药材中农药的残留量。如：薄荷药材中薄荷醇和薄荷酮，丁香药材中丁香酚，石菖蒲药材中的α-细辛醚和β-细辛醚挥发性成分等，以及残留的有机氯、磷、拟除虫菊类农药。药材中不易气化的组分可以衍生后进行GC分析。2023/4/11第11页，共35页，2023年，2月20日，星期五二、中成药和中药制品的分析GC在中成药和中药制品分析中主要用于药材中挥发性油类有效成分或指标性成分，以及测定药材中农药的残留量。还用于测定中成药和中药制品中有机溶剂的残留量。2023/4/11第12页，共35页，2023年，2月20日，星期五三、中药中农药残留的分析农药残留分析特点：样品中农药残留量很低，属痕量分析（fg/kg~mg/Kg)；常用的农药有数百种，各类农药性质差异大，分析方法需根据各类农药的特点而定；样品种类多，组成各异、各类样品的农药残留检测的钱处理方法差异较大；测定样品中农药残留量时，对方法的灵敏度要求高，而准确度和精密度要求不高。2023/4/11第13页，共35页，2023年，2月20日，星期五农药残留分析主要采用毛细管柱气相色谱法进行分析，配以高灵敏度和专属性的检测优势。器在农药残留分析中具有很大的农药残留分析前处理——对农药提取、并对提取液净化、浓缩。检测2023/4/11第14页，共35页，2023年，2月20日，星期五（一）样品的前处理技术——检测的关键环节作用萃取及浓缩被测痕量农药，提高方法灵敏度消除样品基质对测定的干扰，通过样品提取液进行净化，除去提取时的共萃取物。2023/4/11第15页，共35页，2023年，2月20日，星期五1.提取提取方法要根据待测农药的性质、检测方法和样本决定，遵循尽量完全提取出待测农药，且共萃取物尽量少原则。提取溶剂的选择原则：相似相溶原理注意：所用溶剂对气相色谱检验应无干扰2023/4/11第16页，共35页，2023年，2月20日，星期五提取技术液液萃取振荡萃取索氏萃取超声波萃取微波萃取加速溶剂提取超临界流体提取固相微萃取2023/4/11第17页，共35页，2023年，2月20日，星期五2.提取液的净化和浓缩由于萃取过程中不可避免将样品中的油脂、蜡质、叶绿素及胺类、糖类、酚类等可溶于提取溶剂的物质一起被萃取出来，严重影星残留量大的分析。净化——将被测农药与干扰物质的分离2023/4/11第18页，共35页，2023年，2月20日，星期五净化要求与方法：主要取决于农药和样本的性质以及最终的检测方法，并保证具有一定的回收率。净化方法：液-液分配法、吸附柱色谱法、固相萃取法、凝胶色谱法。2023/4/11第19页，共35页，2023年，2月20日，星期五（二）气相色谱分离与分析目前农药残留分析向着多类型、多残留检测方法发展，同一方法中同时要求检查几种。几十种甚至上百种农药的残留量。——采用大口径毛细管柱、大体积进样技术的气相色谱分析法。2023/4/11第20页，共35页，2023年，2月20日，星期五农药残留分析常用固定液：非极性的HP-1，HP-5或同级品中等极性的HP-1701，HP-50或同级品。有机氯农药和多氯联苯：OV-17,OV-1701氨基甲酸酯杀虫剂：SE-54有机磷农药：OV-1012023/4/11第21页，共35页，2023年，2月20日，星期五农药残留分析常用检测器：ECDFPDNPDMSD常用检测器通用检测器2023/4/11第22页，共35页，2023年，2月20日，星期五（三）农药鉴定方法单一以保留时间定性鉴定残留农药并不十分可靠。往往在第一根色谱柱上所得的阳性鉴别结果应在第二根色谱质作进一步确认或至少以另一种其他方法技术作为支持。2023/4/11第23页，共35页，2023年，2月20日，星期五常用确证方法质谱法——可准确鉴定化合物结构，用于实验结果的确证。双柱法——采用不同的色谱柱再次进行分析。衍生化法——采用小规模的化学反应，反应产物再通过色谱技术进行复验。2023/4/11第24页，共35页，2023年，2月20日，星期五（四）应用实例2023/4/11第25页，共35页，2023年，2月20日，星期五第六章

气相色谱法在药物分析中的应用第三节

气相色谱法在化学药物分析中的应用一、化学药物的鉴别三、有机溶剂残留测定二、化学药物有关物质的鉴别与检查四、含量测定2023/4/11第26页，共35页，2023年，2月20日，星期五一、化学药物的鉴别药物分析中色谱法鉴别实验常采用对照品法。一般很少单独采用GC法进行鉴别，除有机溶剂残留测定外，含量或有关物质项下才采用GC法的化学药品常同时进行GC法鉴别。2023/4/11第27页，共35页，2023年，2月20日，星期五二、化学药物有关物质的鉴别与检查对已知有关物质的检查，最常用的GC检测器为FID。对未知有关物质的检查，最常用的GC检测器为MSD

GC对有关物质的分析，最关键的是方法的耐用性和粗放度。不同实验室对同一样品的检测结果应一致，如有偏差也应在允许的范围内。2023/4/11第28页，共35页，2023年，2月20日，星期五建立有关物质的分析方法时，除了检出限和定量限的考察，最好在色谱系统的系统适用性中提供杂质对照、杂质混合样品，建立色谱系统的评价体系。GC中对色谱参数调整范围均有规定2023/4/11第29页，共35页，2023年，2月20日，星期五三、有机溶剂残留测定有机溶剂毒性避免使用的溶剂——为已知的致癌物质或较强潜在致癌作用的物质，对人体具有不可接受的毒性和对环境造成毒害的有毒试剂限制使用的溶剂——为已知的致癌物质或较强潜在致癌作用的物质，和对环境造成毒害的有毒试剂一般量存在对人体无害的溶剂——日摄入量低于50mg时，不需任说明溶剂限度定为5mg/L。2023/4/11第30页，共35页，2023年，2月20日，星期五对没有足够毒理学数据的有机溶剂，人三氟乙酸、三氯乙酸、石油醚、异丙醚、异辛烷、甲基四氢呋喃、甲基异丙酮、1,1-二甲氧基甲烷、1,1-二乙氧基丙烷、2,2-二乙氧基丙烷等制定残留水平限度时给出合理解释。测定溶剂残留可以选择填充柱或毛细管柱，进样方式可以自由选择。顶空进样和毛细管柱成为目前溶剂残留溶剂控制的趋势。2023/4/11第31页，共35页，2023年，2月20日，星期五

《中国药典》（2005年版）规定测定溶剂残留方法:

1.毛细管柱顶空进样等温法柱温：40~100C载气：氮气，1.0~1.2mL/min顶空瓶温度（水位溶剂）：75~85C进样口温度：200C检测器：FID，250C顶空瓶平衡时间：30~60min2023/4/11第32页，共35页，2023年，2月20日，星期五

2.毛细管柱顶空进样程序升温法柱温：30C维持7min，升温速率8C/min升至120C，维持15min非极性色谱系统:极性色谱系统:柱温：60C维持6min，升温速率8C/min升至100C，维持20min2023/4/11第33页，共35页，2023年，2月20日，星期五载气：氮气，2.0mL/min进样口温度：200C检测器：FID，250C顶空瓶温度（水位溶