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文档简介

生物化学期末成绩计算方法生物化学期末成绩分为2部分(期末考试、实验)。成绩计算方式:期末考试70%实验平时成绩30%

现在是1页\一共有138页\编辑于星期五实验要求:1、每个班级在实验课开课以前按照老师的要求进行分组,分组以后每位同学要严格按照自己被分配的实验室和小组进行实验,在没有征得老师同意得情况下,不得自行调换实验室。2、实验周(第6周开始)及地点现在是2页\一共有138页\编辑于星期五第一篇

生物大分子的结构与功能本篇主要内容蛋白质的结构与功能核酸的结构与功能酶现在是3页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质的结构与功能第一章StructureandFunctionofProtein现在是4页\一共有138页\编辑于星期五

蛋白质的分子组成蛋白质的分子结构蛋白质结构与功能的关系蛋白质的理化性质蛋白质的分离、纯化与结构分析本章主要内容现在是5页\一共有138页\编辑于星期五一、什么是蛋白质?蛋白质(protein)是由许多氨基酸(aminoacids)通过肽键(peptidebond)相连形成的高分子含氮化合物。现在是6页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质研究的历史1833年,从麦芽中分离淀粉酶;随后从胃液中分离到类似胃蛋白酶的物质。1864年,血红蛋白被分离并结晶。19世纪末,证明蛋白质由氨基酸组成,并合成了多种短肽。20世纪初,发现蛋白质的二级结构;完成胰岛素一级结构测定。现在是7页\一共有138页\编辑于星期五20世纪中叶,各种蛋白质分析技术相继建立,促进了蛋白质研究迅速发展;1962年,确定了血红蛋白的四级结构。20世纪90年代,功能基因组与蛋白质组研究展开。现在是8页\一共有138页\编辑于星期五二、蛋白质的生物学重要性1.蛋白质是生物体重要组成成分分布广:所有器官、组织都含有蛋白质;细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高:蛋白质是细胞内最丰富的有机分子,占人体干重的45%,某些组织含量更高,例如脾、肺及横纹肌等高达80%。现在是9页\一共有138页\编辑于星期五1)作为生物催化剂(酶)2)代谢调节作用3)免疫保护作用4)物质的转运和存储5)运动与支持作用6)参与细胞间信息传递2.蛋白质具有重要的生物学功能3.氧化供能现在是10页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质的分子组成

TheMolecularComponentofProtein第一节现在是11页\一共有138页\编辑于星期五组成蛋白质的元素主要有C、H、O、N和S。

有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼,个别蛋白质还含有碘。现在是12页\一共有138页\编辑于星期五各种蛋白质的含氮量很接近,平均为16%。由于体内的含氮物质以蛋白质为主,因此,只要测定生物样品中的含氮量,就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量:100克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数×6.25×100?蛋白质元素组成的特点现在是13页\一共有138页\编辑于星期五一、氨基酸

——组成蛋白质的基本单位存在自然界中的氨基酸有300余种,但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种,且均属L-α-氨基酸(Gly、Pro除外)。现在是14页\一共有138页\编辑于星期五H甘氨酸CH3丙氨酸L-α氨基酸的通式R现在是15页\一共有138页\编辑于星期五脯氨酸(亚氨基酸)现在是16页\一共有138页\编辑于星期五(一)氨基酸的分类*20种氨基酸的英文名称、缩写符号及分类如下:非极性脂肪族氨基酸极性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸现在是17页\一共有138页\编辑于星期五1.非极性脂肪族氨基酸现在是18页\一共有138页\编辑于星期五2.极性中性氨基酸现在是19页\一共有138页\编辑于星期五3.芳香族氨基酸现在是20页\一共有138页\编辑于星期五天冬氨酸

asparticacidAspD

2.97谷氨酸

glutamicacidGluE

3.22赖氨酸

lysineLysK

9.74精氨酸

arginineArgR

10.76组氨酸

histidineHisH

7.594.酸性氨基酸5.碱性氨基酸目录现在是21页\一共有138页\编辑于星期五

必需氨基酸(essentialaminoacid)指体内需要而又不能自身合成,必须由食物供给的氨基酸,共有8种:Ile、Met、Val、Leu、Trp、Phe、Thr、Lys。其余12种氨基酸体内可以合成,称非必需氨基酸。“一家写两三本书来”现在是22页\一共有138页\编辑于星期五

半胱氨酸+胱氨酸二硫键-HH特殊氨基酸现在是23页\一共有138页\编辑于星期五(二)氨基酸的理化性质1.两性解离及等电点氨基酸是两性电解质,其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。等电点(isoelectricpoint,pI)

在某一pH的溶液中,氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等,成为兼性离子,呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。现在是24页\一共有138页\编辑于星期五pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸的兼性离子阳离子阴离子现在是25页\一共有138页\编辑于星期五氨基酸等电点(pI)的计算pI=1/2(pkn+pKn+1)

pI等于兼性离子两边的pk值的平均值

现在是26页\一共有138页\编辑于星期五pI计算举例:AsppK1=1.58,pK2=3.56,pK3=9.6其pI=1/2(pK1+pK2)=1/2(1.58+3.56)=2.97LyspK1=2.18,pK2=8.95,pK3=10.53其pI=1/2(pK2+pK3)=1/2(8.95+10.53)=9.74现在是27页\一共有138页\编辑于星期五2.紫外吸收色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280nm附近。大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基,所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收现在是28页\一共有138页\编辑于星期五3.茚三酮反应氨基酸与茚三酮水合物共热,可生成蓝紫色化合物,其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系,因此可作为氨基酸定量分析方法。注意:Pro与茚三酮反应后显黄色,其最大吸收峰在440nm处。

现在是29页\一共有138页\编辑于星期五二、蛋白质是由许多氨基酸残基组成的多肽链*肽键(peptidebond)是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。(一)肽(peptide)现在是30页\一共有138页\编辑于星期五+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键现在是31页\一共有138页\编辑于星期五*肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物*两分子氨基酸缩合形成二肽,三分子氨基酸缩合则形成三肽……*肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全,被称为氨基酸残基(residue)。*由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide),由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。(多肽与蛋白质有何区别?)。现在是32页\一共有138页\编辑于星期五N末端:多肽链中有自由氨基的一端C末端:多肽链中有自由羧基的一端多肽链有两端*多肽链(polypeptidechain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。现在是33页\一共有138页\编辑于星期五N末端C末端牛核糖核酸酶现在是34页\一共有138页\编辑于星期五(二)几种生物活性肽1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)现在是35页\一共有138页\编辑于星期五GSH过氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSG

GSH还原酶NADPH+H+NADP+现在是36页\一共有138页\编辑于星期五

体内许多激素属寡肽或多肽神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素及神经肽现在是37页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质的分子结构

TheMolecularStructureofProtein

第二节现在是38页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质的分子结构包括

一级结构(primarystructure)二级结构(secondarystructure)三级结构(tertiarystructure)四级结构(quaternarystructure)高级结构现在是39页\一共有138页\编辑于星期五定义蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构主要的化学键肽键,有些蛋白质还包括二硫键。现在是40页\一共有138页\编辑于星期五N末端C末端牛核糖核酸酶现在是41页\一共有138页\编辑于星期五一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。一级结构特点?目录(1953年Sanger提出)现在是42页\一共有138页\编辑于星期五

维持蛋白质高级的化学键1.氢键

氢键(hydrogenbond)的形成常见于连接在一电负性很强的原子上的氢原子,与另一电负性很强的原子之间。2.疏水键

非极性物质(非极性氨基酸残基侧链)在含水的极性环境中存在时,会产生一种相互聚集的力,这种力称为疏水键或疏水作用力。现在是43页\一共有138页\编辑于星期五3.离子键(盐键)

离子键(saltbond)是由带正电荷基团与带负电荷基团之间相互吸引而形成的化学键。

4.范德华氏(vanderWaals)引力

原子、分子、基团之间存在的一种弱的相互作用力。5.配位键

6.二硫键

现在是44页\一共有138页\编辑于星期五目录ddd范德华力二硫键现在是45页\一共有138页\编辑于星期五二、蛋白质的二级结构蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构,即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置,并不涉及氨基酸残基侧链的构象

。定义

主要的化学键:

氢键

现在是46页\一共有138页\编辑于星期五(一)肽单元参与肽键的6个原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面,C1和C2在平面上所处的位置为反式(trans)构型,此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元(peptideunit)

。现在是47页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质二级结构的主要形式

-螺旋(-helix)

-折叠(-pleatedsheet)

-转角(-turn)无规卷曲(randomcoil)

现在是48页\一共有138页\编辑于星期五(二)-螺旋目录现在是49页\一共有138页\编辑于星期五左手/右手α-螺旋现在是50页\一共有138页\编辑于星期五α-螺旋的横截面现在是51页\一共有138页\编辑于星期五结构特点:右手螺旋每螺旋圈包含3.6个氨基酸残基,每个残基跨距0.15nm,螺旋上升一圈0.54nm。相邻螺旋之间通过肽键上的酰基氧与亚氨基氢间形成氢键保持螺旋结构稳定。氢键方向与螺旋长轴基本平行。氨基酸侧链伸向螺旋外侧,对-螺旋的形成有一定影响。举例:角蛋白现在是52页\一共有138页\编辑于星期五(三)-折叠(-片层/-折叠层)现在是53页\一共有138页\编辑于星期五现在是54页\一共有138页\编辑于星期五β-折迭:平行式和反平行式现在是55页\一共有138页\编辑于星期五肽键平面折叠成锯齿状(折纸状)R-基团交错位于齿状结构上下方氢键维持稳定与主链长轴垂直两条以上肽链并列时,-片层有结构特点:顺向反向平行举例:蚕丝蛋白现在是56页\一共有138页\编辑于星期五(四)-转角和无规卷曲-转角(第2位常见Pro)无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。现在是57页\一共有138页\编辑于星期五RNase的分子结构小结:二级结构特点现在是58页\一共有138页\编辑于星期五(五)超二级结构及模体在许多蛋白质分子中,可发现二个或两个以上具有二级结构的肽段,在空间上相互接近,形成一个有规则的二级结构组合,被称为超二级结构。二个或三个具有二级结构的肽段,在空间上相互接近,形成一个特殊的空间构象,具有特殊的功能,被称为模体(motif)。现在是59页\一共有138页\编辑于星期五钙结合蛋白中结合钙离子的模体锌指结构α-螺旋-β转角(或环)-α-螺旋模体链-β转角-链模体链-β转角-α-螺旋-β转角-链模体模体常见的形式现在是60页\一共有138页\编辑于星期五(六)氨基酸残基的侧链对二级结构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成-螺旋或β-折叠,它就会出现相应的二级结构。现在是61页\一共有138页\编辑于星期五三、蛋白质的三级结构疏水键、离子键、氢键和VanderWaals力等。主要的化学键整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。(一)定义现在是62页\一共有138页\编辑于星期五肌红蛋白(Mb)N端C端现在是63页\一共有138页\编辑于星期五胰岛素分子的三级结构现在是64页\一共有138页\编辑于星期五三级结构特点:单肽链蛋白质构成的最高级结构,包括主链和侧链构象,所有原子呈区域化分布,从伸展程度上讲紧密性更强三级结构已经形成功能区现在是65页\一共有138页\编辑于星期五纤连蛋白分子的结构域(二)结构域大分子蛋白质的三级结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域,折叠得较为紧密,各行使其功能,称为结构域(domain)。现在是66页\一共有138页\编辑于星期五(三)分子伴侣分子伴侣(chaperon)通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构的一类蛋白质。*分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开,如此重复进行可防止错误的聚集发生,使肽链正确折叠。*分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合,使之解聚后,再诱导其正确折叠。*分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成起了重要的作用。现在是67页\一共有138页\编辑于星期五王志珍院士“漫画”

现在是68页\一共有138页\编辑于星期五亚基之间的结合力主要是疏水键、氢键、离子键等。四、蛋白质的四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用,称为蛋白质的四级结构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链,每一条多肽链都有完整的三级结构,称为蛋白质的亚基(subunit)。现在是69页\一共有138页\编辑于星期五

HbA

天冬氨酸乳酸大肠杆菌谷氨酸转甲酰酶脱氢酶RNA聚合酶脱氢酶亚基数412456代号

22C6R6MnH4-n2’亚基相同分子量6.431.015.050.033.5一些具有四级结构的蛋白质的亚基组成现在是70页\一共有138页\编辑于星期五血红蛋白的四级结构

现在是71页\一共有138页\编辑于星期五血红蛋白的四级结构现在是72页\一共有138页\编辑于星期五

小结现在是73页\一共有138页\编辑于星期五现在是74页\一共有138页\编辑于星期五五、蛋白质的分类*根据蛋白质组成成分单纯蛋白质结合蛋白质=蛋白质部分+非蛋白质部分*根据蛋白质形状纤维状蛋白质球状蛋白质现在是75页\一共有138页\编辑于星期五六、蛋白质组学(一)蛋白质组学基本概念蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质,即“一种基因组所表达的全套蛋白质”。现在是76页\一共有138页\编辑于星期五(二)蛋白质组学研究技术平台蛋白质组学是高通量,高效率的研究:双向电泳分离样品蛋白质蛋白质点的定位、切取蛋白质点的质谱分析(三)蛋白质组学研究的科学意义现在是77页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质结构与功能的关系TheRelationofStructureandFunctionofProtein第三节现在是78页\一共有138页\编辑于星期五(一)一级结构是空间构象的基础一、蛋白质一级结构是高级结构与功能的基础牛核糖核酸酶的一级结构二硫键现在是79页\一共有138页\编辑于星期五天然状态,有催化活性尿素、β-巯基乙醇去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态,无活性现在是80页\一共有138页\编辑于星期五(二)一级结构不同,功能不同

现在是81页\一共有138页\编辑于星期五剩2-10%丧失活性

活性仍100%

(三)一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能现在是82页\一共有138页\编辑于星期五(四)氨基酸序列提供重要的生物化学信息现在是83页\一共有138页\编辑于星期五(五)一级结构中“关键”部位不同,其生物学活性也改变,有时可能导致疾病的发生现在是84页\一共有138页\编辑于星期五例:镰刀形红细胞贫血N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSβ肽链HbAβ肽链N-val·his·leu·thr·pro·val·glu·····C(146)这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病,称为“分子病”。现在是85页\一共有138页\编辑于星期五(一)肌红蛋白与血红蛋白的结构二、蛋白质空间结构与功能的关系目录现在是86页\一共有138页\编辑于星期五血红素结构现在是87页\一共有138页\编辑于星期五Hb与Mb一样能可逆地与O2结合,Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数(称百分饱和度)随O2浓度变化而改变。(二)血红蛋白的构象变化与结合氧现在是88页\一共有138页\编辑于星期五肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线现在是89页\一共有138页\编辑于星期五现在是90页\一共有138页\编辑于星期五O2血红素与氧结合后,铁原子半径变小,就能进入卟啉环的小孔中,继而引起肽链位置的变动。现在是91页\一共有138页\编辑于星期五变构效应(allostericeffect)蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化,称为变构效应。现在是92页\一共有138页\编辑于星期五*协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后,能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象,称为协同效应。如果是促进作用则称为正协同效应(positivecooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应

(negativecooperativity)现在是93页\一共有138页\编辑于星期五(三)蛋白质构象改变与疾病蛋白质构象疾病:若蛋白质的折叠发生错误,尽管其一级结构不变,但蛋白质的构象发生改变,仍可影响其功能,严重时可导致疾病发生。现在是94页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质构象改变导致疾病的机理:有些蛋白质错误折叠后相互聚集,常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀,产生毒性而致病,表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括:人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨丁顿舞蹈病、疯牛病等。现在是95页\一共有138页\编辑于星期五疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrP富含α-螺旋,称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成含β-折叠的PrPsc,从而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折叠正常疯牛病现在是96页\一共有138页\编辑于星期五第四节蛋白质的理化性质ThePhysicalandChemicalCharactersofProtein现在是97页\一共有138页\编辑于星期五(一)蛋白质的两性电离蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外,氨基酸残基侧链中某些基团,在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。现在是98页\一共有138页\编辑于星期五(二)蛋白质的胶体性质蛋白质属于生物大分子之一,分子量可自1万至100万之巨,其分子的直径可达1~100nm,为胶粒范围之内。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜现在是99页\一共有138页\编辑于星期五+++++++带正电荷的蛋白质--------带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质--------带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉现在是100页\一共有138页\编辑于星期五(三)蛋白质的变性、沉淀和凝固*蛋白质的变性(denaturation)在某些物理和化学因素作用下,其特定的空间构象被破坏,也即有序的空间结构变成无序的空间结构,从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。现在是101页\一共有138页\编辑于星期五造成变性的因素如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等。

变性的本质——破坏非共价键和二硫键,不改变蛋白质的一级结构。现在是102页\一共有138页\编辑于星期五变性蛋白的特征理化性质的改变如:溶解度降低,黏度增加,失去结晶能力,易被蛋白酶水解等生物活性的丧失如:酶的催化活性;激素的调节作用;抗原-抗体的特异性反应;血红蛋白的运氧能力等现在是103页\一共有138页\编辑于星期五应用举例临床医学上,变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂(如疫苗等)的必要条件。

现在是104页\一共有138页\编辑于星期五若蛋白质变性程度较轻,去除变性因素后,蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能,称为复性(renaturation)。现在是105页\一共有138页\编辑于星期五天然状态,有催化活性尿素、β-巯基乙醇去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态,无活性现在是106页\一共有138页\编辑于星期五*蛋白质沉淀在一定条件下,蛋白疏水侧链暴露在外,肽链融会相互缠绕继而聚集,因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀,有时蛋白质发生沉淀,但并不变性。变性的蛋白质不一定沉淀:变性的蛋白质仍可溶于强酸或强碱溶液。现在是107页\一共有138页\编辑于星期五*蛋白质的凝固作用(proteinoagulation)

蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块,此凝块不易再溶于强酸和强碱中。

现在是108页\一共有138页\编辑于星期五(四)蛋白质的紫外吸收由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系,因此可作蛋白质定量测定。现在是109页\一共有138页\编辑于星期五(五)蛋白质的呈色反应⒈茚三酮反应(ninhydrinreaction)

蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。⒉双缩脲反应(biuretreaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热,呈现紫色或红色,此反应称为双缩脲反应,双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。现在是110页\一共有138页\编辑于星期五第五节蛋白质的分离纯化与结构分析TheSeparationandPurificationandStructureAnalysisofProtein现在是111页\一共有138页\编辑于星期五(一)透析及超滤法*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。*超滤法

应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜,达到浓缩蛋白质溶液的目的。现在是112页\一共有138页\编辑于星期五(二)丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀*使用丙酮沉淀时,必须在0~4℃低温下进行,丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后,应立即分离。除了丙酮以外,也可用乙醇沉淀。*盐析(saltprecipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质沉淀。现在是113页\一共有138页\编辑于星期五*免疫沉淀法:将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白,并形成抗原抗体复合物的性质,可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。现在是114页\一共有138页\编辑于星期五(三)电泳蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒,在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳(elctrophoresis)。根据支撑物的不同,可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。现在是115页\一共有138页\编辑于星期五几种重要的蛋白质电泳*SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于蛋白质分子量的测定。*等电聚焦电泳,通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。*双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。现在是116页\一共有138页\编辑于星期五

等电聚胶电泳(isoelectricfocusinggelIEF)现在是117页\一共有138页\编辑于星期五SDS电泳现在是118页\一共有138页\编辑于星期五(四)层析层析(chromatography)分离蛋白质的原理待分离蛋白质溶液(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等,使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配,并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。现在是119页\一共有138页\编辑于星期五蛋白质分离常用的层析方法*离子交换层析:利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。*凝胶过滤(gelfiltration)又称分子筛层析,利用各蛋白质分子大小不同分离。现在是120页\一共有138页\编辑于星期五目录现在是121页\一共有138页\编辑于星期五目录现在是122页\一共有138页\编辑于星期五*亲和层析法:生物体内有许多高分子化合物,具有和某些对应的专一分子可逆结合的特性。例如,酶蛋白和辅酶、抗原和抗体、激素与其受体等都具有这种特性。这种生物大分子和配基之间形成专一的可解离的络合物的能力称为亲和力。现在是123页\一共有138页\编辑于星期五现在是124页\一共有138页\编辑于星期五(五)超速离心*超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。*蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentationcoefficient,S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关。现在是125页\一共有138页\编辑于星期五因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系,故可应用超速离心法测定蛋白质分子量,但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。现在是126页\一共有138页\编辑于星期五FrederickSanger1958年1980年两次获诺贝尔化学奖

(六)多肽链中氨基酸序列分析现在是127页\一共有138页\编辑于星期五分析已纯化蛋白质的多肽链数目和每条肽链的氨基酸残基组成测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基把肽链水解成片段

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