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免疫组化技术概述2012.10纲要免疫组化基础抗原修复一、免疫组化基础免疫组化原理抗原、抗体免疫组化检测的意义免疫组化原理抗原在机体内引起体液免疫和(或)细胞免疫反应的物质。免疫原性：引起机体产生抗体和(或)致敏淋细胞的特性；反应原性：抗原能与相应的抗体及致敏淋巴细胞发生特异的结合或反应的特性。

抗体机体受到抗原刺激后，由浆细胞合成并分泌出一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白。五种亚型：IgAIgEIgMIgGIgD实验中常用抗体：单克隆抗体、多克隆抗体。二、抗原修复原因常规的石蜡切片标本大多用10%中性福尔马林固定，结果使得：

（1）抗原性物质形成醛键、羧甲键而使部分抗原决定簇被封闭了；

（2）蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。抗原修复种类热修复（HIER）蛋白酶修复（PIER）双修复（特殊抗原和双染）不修复热修复(HIER)的原理（主流为四个学说）“石善溶说”：固定通过改变蛋白结构降低免疫反应性，热修复逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰，冷却后，会重建“近天然”的结构，免疫反应的恢复是通过蛋白表位的复性。学说一热修复逆转福尔马林造成的交联，进而去除抗体渗透的阻碍，使其接近蛋白的表位。提出交联蛋白经高温处理后展开，并在冷却中得到保持，因抗原的蛋白表位大都是线性的（5~7个氨基酸残基），一级结构是重要的，二级结构和三级结构无关。学说三福尔马林导致蛋白修饰通过使蛋白的静电荷中和，造成免疫反应性降低。该中和作用主要是动力学效果。因此热修复的作用是重建蛋白的静电荷。学说四蛋白酶修复(PIER)原理蛋白酶的消化通过破坏福尔马林造成的蛋白交联，实现抗原的修复。该方法的缺点是：破坏组织的完整性，会破坏抗原，而且酶的浓度，反应时间，反应温度造成很大的差异，标准化难度较大。热修复（HIER）高压修复煮沸法修复微波修复水浴加热……高压修复切片先脱蜡水化将修复液注入高压锅，将液体煮沸放入切片（甩开水分）盖上盖子，等喷气，计时1.5~2分钟（800W~1000W）冷却，冲洗玻片上的修复液1.5-2min10min热修复的特点易于实行易于标准化蛋白酶修复（PIER）切片脱蜡水化切片上滴加酶，放入孵育盒，于37℃处理一定时间时间到，取出切片，冲洗。抗原修复操作的注意点时间温度冷却不同的修复方法对实验结果的影响

不修复柠檬酸高温高压EDTA水煮胰酶消化胃酶消化一抗：RCC（PN-15）60分钟检测系统：MaxVision15分钟显色试剂：DAB5分钟结论正确的修复对抗体的表达十分重要抗原修复是一个个性化的方法，由抗体的克隆号，病理标本的类型等决定。合适的修复方

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