分析化学试验指导书

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分析化学试验

指导书

（供全日制本科中药学、药学类专业用）

甘肃中医学院《分析化学试验》课程组编

（2023年10月）

前言

《分析化学》是关于研究物质的组成、含量、结构、和形态等化学信息的分析方法及理论的一门科学，即是一门独立的化学信息科学。分析化学试验是分析化学课程的重要组成部分。它是通过试验的方法，使学生加深理解和稳定在分析化学课堂中所学的理论知识，并使学生正确熟练地把握化学分析和仪器分析的基本操作和技能。通过试验可使学生学会正确合理地选择试验条件和试验仪器，擅长观测试验现象和进行试验记录，正确处理数据和表达试验结果；培养学生良好的试验习惯、实事求是的科学态度和严谨细致的工作作风，以及独立思考、分析问题、解决问题的能力；以使学生逐步地把握科学研究的技能和方法，为学习后续课程和将来工作奠定良好的实践基础。

本课程试验内容包括分析天平的称量练习、重量分析试验、滴定分析试验、电化学试验、高效液相色谱、气相色谱、薄层色谱、紫外分光光度法试验，还包括自拟和自选试验。

试验内容总表：

一、化学分析试验：序号试验项目名称学时数项目类别试验一试验二试验三试验四试验五试验六试验七试验八分析天平的称量练习器皿的洗涤，使用，容器的校准（3学时）（6学时）基础基础基础基础基础基础基础基础项目类型必做选做必做必做选做选做必做必做氢氧化钠标准溶液（0.1mol/L）的配制与标定（3学时）草酸含量测定混合酸的测定（3学时）（3学时）EDTA标准溶液（0.05mol/L）的配制与标定（3学时）水的硬度测定硫代硫酸钠标准溶液的配制与标定、碘标准溶液的配制与标定和维生素C片的含量测定（3学时）（6学时）试验九试验十0.02mol/LKMnO4标准溶液的配制与标定H2O2含量的测定（3学时）（3学时）基础基础必做必做总学时

二、仪器分析试验：

序号选六个18试验项目名称学时数项目类别项目类型选做必做试验十一试验十二饮用水中氟含量的测定可见分光光度计性能检验药物中铁含量的测定（4学时）（5学时）基础基础试验十三双波长分光光度法测定安钠咖注射液中的咖啡因（3学时）基础必做试验十四导数光谱法测定安钠咖注射液中的咖啡因（3学时）基础选做试验十五维生素B12吸收光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定（3学时）基础选做试验十六试验十七试验十八试验十九系数倍率法测定槐米中芦丁含量生物碱成分薄层层析菠菜叶色素的分开(综合性试验)荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸（3学时）（3学时）（3学时）（3学时）基础基础基础基础选做必做选做必做试验二十原子吸收法测定感冒冲剂中的铜（3学时）（4学时）基础基础选做必做试验二十一气相色谱的载气流速与理论塔板高度的关系试验二十二苯甲酸、山梨酸的酯化衍生物及高相液相色谱测定总学时（4学时）基础必做选30学时这些试验的安排为学生将来参与药物新品种、新工艺、新技术的研究与开发及中药质量控制等打下坚实基础，为将来从事药学研究提供一个实践基础。

试验时数：

按2023年制订的本科专业学分制教学计划要求，规定中药学本科“分析分析试验〞的计划学时数为48学时，可选做试验目录中的16个试验；药物制剂与中草药栽培与鉴定本科“分析化学试验〞的计划学时数为66学时，可选做试验目录中的22个试验。

试验要求：

分析化学试验是一门实践性很强的学科，试验教学最重要的任务是发展学生查阅、动手、思维、想象和表达能力，重点是培养学生观测问题、分析问题和解决问题的能力，加强学生对“量〞的概念的认识。是在老师指导下所进行的一种特别形式的科学实践活动，是学生走向社会独立进行科学实践的预演。通过分析化学试验课的学习，学生应对具体的试验过程首先应当有一个直观、感性的认识，在此基础上再通过认真、严格、细致的操作练习，在获取试验数据的过程中培养良好的科学作风和独立从事科学实践的能力。具体要求如下：

1.开设试验课前，由指导老师制定试验教学进度，每个试验提前一周备课，明确试验的目的、要求和有关本卷须知，做好记录。

2.每次试验，指导老师提前10—15分钟进入试验室，检查试验设施，熟悉药品摆放状况准备试剂、试样。

3．试验过程中，教师不得擅自离开试验室。注意巡查观测，认真辅导，随时改正个别学生不规范的操作。试验终止后，检查学生的数据记录和试验台卫生状况，提醒学生检查水、电、气、门窗、钥匙柜是否关好。然后告知试验室值班人员，经检查合格后方可允许学生离开。

4.要求学生课前必需认真预习。理解试验原理，了解试验步骤，探寻影响试验结果的关键环节，做好必要的预习笔记。未预习者不得进行试验。

5．教师在试验前先检查学生的预习报告，结合当次试验内容中涉及的操作要点进行简要讲解，然后指导学生做好试验准备工作。

6．学生试验开始后，要求学生细心观测和详细、忠实记录试验中发生的各种试验现象，记录的原始数据不能删改（不能用铅笔记）。数据记录在专用的、预先编好页码的试验记录本上。如有疑问可与同组学生进行现场探讨，也可与指导老师探讨，必要时可重做试验，最终经指导老师认可，方能终止试验。

7．认真、及时写好试验报告。撰写试验报告是仪器分析试验的重要环节，试验数据的处理与分析都要在报告中表达出来。报告的内容除了试验名称、试验日期、试验仪器型号、试验操作条件等常规内容外，还要包括对该试验的总结与探讨，对少数试验异常现象进行解释分析，老师将批改试验报告并给出报告成绩。

8．所有试验终止后，要以口试、操作技能考核等多种方式进行期末考核，考核结果计入总成绩。

9.要求学生遵守试验室的各项规章制度。了解“消防设施〞和“安全通道〞的位置。树立环境保护意识，尽量降低化学物质（特别是有毒有害试剂以及洗液、洗衣粉等）的消耗。

10.要求学生保持室内恬静，保持试验台面清洁整齐。爱护仪器和公共设施，树立良好的公共道德。目录化学分析部分

试验1分析天平与称量

试验2滴定分析器皿及其使用试验3容量器皿的校准试验40.1mol/L氢氧化钠标准溶液的配制与标定试验5草酸含量测定

试验6混合酸（碱）测定方法的设计(设计性试验)试验70.05mol/LEDTA标准溶液的配制与标定试验8水硬度测定

试验9硫代硫酸钠标准溶液的配制与标定、

碘标准溶液的配制与标定和维生素C片的含量测定

试验100.02mol/LKMnO4标准溶液的配制与标定试验11H2O2含量的测定

试验12饮用水中氟含量的测定试验13分光光度计的性能检验试验14药物中微量铁的测定

试验15吸收曲线的测绘及吸收系数的测定试验16标准曲线法测定芦丁含量

试验17维生素B12注射液的定性鉴别、定量分析

试验18双波长分光光度法测定安钠咖注射液中咖啡因的含量试验19导数光谱法测定安钠咖注射液中咖啡因的含量试验20银黄口服液中黄芩苷和绿原酸的含量测定试验21原子吸收法测定感冒冲剂中的铜

试验22气相色谱的载气流速与理论塔板高度的关系试验23气相色谱法测定醇的同系物

试验24苯甲酸、山梨酸的酯化衍生物及高相液相色谱测定试验25荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸

试验26柱色谱法测定氧化铝活度试验27纸色谱法分开氨基酸试验28薄层色谱法测定甜叶菊苷含量试验29双波长薄层色谱扫描法测定甲基红含量试验30菠菜叶色素的分开(综合性试验)

试验31槐花米中芦丁的色谱分开和鉴定（综合性试验）试验32金银花中绿原酸的TLC鉴别(设计性试验)附录

试验1分析天平与称量

一、试验目的

1．了解分析天平的结构，熟悉砝码的组合；

2．学会正确使用天平；3．把握直接称量和递减称量法。

二、基本原理

分析天平是定量分析中最重要的仪器之一，每一项定量分析工作都直接或间接地需要

使用天平，常用的分析天平有阻尼天平、半自动电光天平、全自动电光天平、单盘电光天平和电子天平等。这些天平的构造和使用方法虽有些不同，但基本原理是一致的。(一)分析天平的原理

各类分析天平都是根据杠杆原理设计制造的。下图为半自动电光分析天平的结构示意图。

1．天平梁：是天平的主要部件。多用质轻稳固、膨胀系数小的铝铜合金制成，起平衡和承载物体的作用。梁上装有三个棱形的玛瑙刀，其中一个装在正中的称为支点刀，刀口向下；另外两个与支点刀等距离的分别安装在梁的两端，称为承重刀，刀口向下。三个刀口必需完全平行且位于同一水平面上。

2．支柱与水平泡：支柱是金属做的中空金属圆柱，下端固定在天平底座中央，支撑着天平梁。在支柱上装有水平泡，借螺旋垫脚调理天平放置水平。

3．指针和感量螺丝：指针固定在梁的正中，下端的后面有一块刻有分度的标牌，借以观测天平梁的倾斜程度。指针上装有感量螺丝，用来调理梁的重心，以改变天平的灵敏度。

4．吊耳和称量盘：吊耳挂在两个边刀上，下面挂有称量盘。寻常左盘放称量物，右盘放砝码。

5．空气阻尼器：由两个特制的金属圆筒构成，外筒固定在支柱上，内筒比外筒略小，悬于吊耳钩下，两筒间隙均匀，没有摩擦。当梁摇摆时，左右阻尼器的内筒也随之上下移动，使筒内外的空气压力一致，便产生抵制膨胀和压缩的力。这样利用筒内空气的阻力使之很快停摆达到平衡，以加快称量速度。

1—升降旋钮；2—称量盘；3—投影屏；4—空气阻尼器；5—玛瑙刀；

6—天平梁；7—平衡螺丝；8—机械加码器；9—指针；10—立柱；11—金属拉杆；

6．平衡螺丝：在梁的上部左右两端各装有一个螺丝，用来调理天平的零点。7．升降枢：

8．天平箱：起保护天平的作用，在称量时，减少外界温度、空气滚动、人的呼吸等的影响。

9．砝码：每台天平均附有一套砝码。1g以上的砝码用铜合金或不锈钢制成；1g以下的称为圈码。

(二)天平的灵敏度

天平的灵敏度是指天平盘上增加1mg所引起的指针在读数标牌上偏移的格数，灵敏度(E)的单位为分度/mg，在实际工作中，常用灵敏度的倒数来表示天平的灵敏程度，即

S?1(mg/分度)ES称为天平的分度值，也称为感量。分度值越小的天平，其灵敏度越高。(三)称量的一般程序和方法

1．取下天平罩，叠好后放在天平箱后面或天平箱顶上。检查天平是否处于水平状态，盘上有无污垢，用软毛刷拭去灰尘。

2．检查、调整日平的零点：接通电源，渐渐开启天平，在不载重的状况下，检查投影屏

上的标尺的位置，若零点与投影屏上的标线不重合，可拨动升降旋钮下的扳手，挪动投影屏的位置，使其重合；若相差较大，可借平衡螺丝调整使其重合，即为天平的零点。3．在台秤上粗称被称量物的质量。

4．将被称量物放入称量盘并关好侧门，在砝码盘上放置粗称得到的相应质量的砝码，开启天平，试称。根据砝码与称量物的质量关系，依照“由大到小，减半参与〞的原则增减砝码，直至天平平衡。(四)称量方法

1．固定质量称量法要求试样本身不吸水并在空气中性质稳定。

先称量容器(如表面皿)的质量，并记录平衡点。再称试样，如指定称取0.3000g时，在砝码盘上增加0.3000g砝码，在称量盘上参与略少于0.3g的试样，然后用药匙轻轻振动，使试样渐渐落入容器中，直至平衡点与称量容器时的平衡点刚好一致。

这种方法的优点是称量计算简便，结果计算便利。

2．递减称量法这种方法称出的样品的质量不要求固定的数值，只需在一定范围内即

可。适应于易吸水、易氧化或易与CO2反应的物质。将此类物质盛在带盖的称量瓶中进行称量，既可以防止吸潮，又便于称量操作。

先在称量瓶中装入适量的试样(假使试样曾经烘干，应放在枯燥器内冷却到室温)，用清白的小纸条套在称量瓶上，先在台秤上粗称其质量，再将称量瓶放在分析天平上确切称出其质量，设为m1g。将称量瓶取出，用称量瓶盖轻轻敲瓶的上部，使试样渐渐落在容器内，然后渐渐将瓶竖起，用瓶盖敲瓶口上部，使粘在瓶口的试样落回瓶中，盖好瓶盖。再将称量瓶放回天平盘上称量，如此重复操作，直到倾出的试样质量达到要求为止。设倒出第一份试样后称量瓶与试样的质量为m2g，则第一份试样的质量为(m1?m2)g。同上操作，逐次称量，即可称出多份样品。例如：

称量瓶＋样品(1)称量瓶＋样品(2)称量瓶＋样品(3)(4)称量瓶＋样品21.2350g0.2222g21.0128g0.2212g20.7916g20.5701g0.2215g

三、仪器、试剂及其他(一)仪器

分析天平称量瓶小烧杯(50mL)(二)试剂

氯化钠

四、试验内容

采用递减称量法称取两份氯化钠试样。每份0.2~0.3g。

五、本卷须知

1．旋转升降柄时必需缓慢，轻开轻关。取放物体、增减砝码时，必需关闭天平，以免损

坏，玛瑙刀口。

2．称量时，应关好两个侧门。化学试剂和试样不能直接放在天平盘上称量，而应放在清白的称量瓶或坩锅内；具有腐蚀性的气体或吸湿性物质，必需放在称量瓶内或其它适当的密闭的容器内称量；称量的物体必需与天平箱内温度一致，不得把热的或冷的物体放进天平箱内称量。

3．绝不能使天平载重超过最大负载。为了减小称量误差，在作同一试验时，应使用同一台天平和配套的砝码，并注意一致面值的两个砝码的区别，确定其中一个是优先使用的。4．天平的各部件尽可能不要用手接触，如必需接触时(调理调平螺丝)，必需将手指擦清白，最好是带手套或手指套。

5．称量的数据应及时写在笔记本上，不得记录在纸片上。

6．称量完毕，取出物体，检查天平内外清洁，关好天平门，将指数盘拨回零位，切断电源，最终，罩上天平罩。

六、思考题

1．为什么不允许在开启天平的状态下增减砝码或取放称量物？2．什么是天平的零点和停点？

试验2滴定分析器皿及其使用

一.预习。学习如何为酸式滴定管的旋塞涂抹凡士林和试漏；学习如何为碱式滴定管排气泡和试漏。学习如何用所配的溶液润洗滴定管和移液管，如何调零和读数。

二．试验目的要求

1．滴定操作是容量分析的重要基本功之一。要求把握邻近终点时，参与半滴滴定剂即可使指示剂改变颜色，到达终点。

2．逐个检查学生的预习报告和迟到状况。三．本次试验的内容：

1．总结上一次试验的状况（包括纪律、卫生等）。再次强调天平的操作规程和操作中出现的问题。

2．介绍化学试剂级别和中英文缩写名。3．提问式演示讲解滴定分析操作的以下环节：（1）配制0．1mol/LNaOH和0．1mol/LHCl溶液。

告诫：永远是将相对较浓的NaOH和HCl溶液倒入水中，特别不能将水倒入酸中！NaOH和HCl溶液稀释后一定要摇匀；试剂瓶磨口处不能沾有浓溶液！

（2）演示如何用所配的溶液倒入、润洗滴定管和移液管的方法（不允许学生通过烧杯二次转移倒入）；如何调零和读数（要读准0。01ml的方法）。每次润洗滴定管的溶液体积应在10mL左右。

（3）滴定神态要站正。

（4）左手五个手指把握酸式滴定管、碱式滴定管的方法。（5）摇瓶操作和边滴边摇操作。（6）酸、碱管气泡排除的方法。

（7）滴定速度的控制和“见滴成线〞的滴定方法。（8）半滴的控制和吹洗的方法。

（9）终点颜色变化的观测，主要对甲基橙的“红—橙—黄〞颜色要很明白的能够区别。（10）交待用移液管移取溶液的操作，润洗移液管的溶液，每次为3mL左右。移液管取放溶液时，注意尖部紧贴盛放溶液的器皿壁，且呈一定角度。溶液放完后，等候15秒方可取

出移液管。若用滤纸片擦去移液管外壁的溶液，则必需先擦，再调零。

（11）要求每位学生独立完成0．1mol/LHC1溶液的配制（根据稀释前后物质的量相等的原则：C1V1=C2V2）；0．1mol/LNaOH溶液的配制（按公式m=CVM计算应取的NaOH质量）。并用酸滴碱或碱滴酸各做三份。

（12）滴定过程中，注意逐个检查滴定操作的把握状况，有无错误操作、滴定记录中有效数字的表达以及相对标准偏差的计算等。

（13）试验完成后，教师应全面检查试验室卫生，包括窗台、试验台、清扫擦洗地面，检查开关、水、电、门窗是否关好。分析天平应逐台检查，毛刷、手套、记录本有无丢失，应对试验室安全进行检查。最终须经老师允许后方能离开。

滴定操作是容量分析的重要基本功之一。要求同学们利用一切可能的机遇练习滴定操作。（14）按要求正确填写滴定记录表格。

试验3容量仪器的校准

一．预习相关资料。二．试验目的要求

学习了解试验仪器校准的意义、容量仪器校准的方法，初步把握滴定管的校准、容量瓶的校准及移液管和容量瓶的相对校准。

三．本次试验的内容：

1．本次试验因时间关系，只对25mL移液管做绝对校准以及25mL移液管与100m量瓶之间的相对校准（不必做标记）。

2．提醒学生首先检查100mL容量瓶是否枯燥，否则用4－5ml乙醇润洗后，晾干。3．称量校准时应使用万分之一分析天平，可连续称量两次25mL。注意磨口处如不慎沾水，一定要用滤纸擦干，且根据具体状况考虑是否重新移取溶液。

问题：具塞磨口锥形瓶是否要枯燥？为什么具塞磨口锥形瓶必需盖盖儿，才能称量？在移液管的校准中，需要测量水温。这一过程是在试验室进行，还是在天平室进行？

注：寻常试验1.2与试验1.3节合为一个试验。滴定练习的“体积比〞数据通过后，进行玻璃仪器的校准。请教师安排好时间。

提醒：此后次试验开始，每次试验终止前，将称量瓶和100mL烧杯及表皿洗清白、晾干（称量瓶开盖放在培养皿中晾干），为下次试验做准备。

试验40.1mol/L氢氧化钠标准溶液的配制与标定

一、试验目的

1．学会配制标准溶液和基准物质标定标准溶液浓度的方法。

2．基本把握滴定操作和滴定终点的判断。

二、试验原理

氢氧化钠简单吸收空气中的CO2而使配得的溶液中含有少量碳酸钠，经过标

定的含碳酸盐的标准碱溶液用来测定酸含量时，若使用与标定时一致的指示剂，则对测量结果无影响；若标定与测定不是用一致的指示剂，则将发生一定的误差。因此，应配制不含碳酸盐的标准碱溶液进行滴定。

配制不含碳酸钠的标准氢氧化钠溶液的方法好多，最常见的是用氢氧化钠饱和水溶液（120：100）配制。碳酸钠在饱和氢氧化钠溶液中不溶解，待碳酸钠沉淀后，量取上层澄清液，再稀释至所需浓度，即得到不含碳酸钠的氢氧化钠溶液。

饱和氢氧化钠溶液含量约为52%（g/g），比重约为1.56。用来配制氢氧化钠溶液的水应加热煮沸，放冷除取其中的CO2。

标定碱溶液用的基准物质好多，如：草酸、苯甲酸、氨基磺酸、邻苯二甲酸氢钾等，目前常用的是邻苯二甲酸氢钾，其滴定反应如下：

COOHCOOK+COONaNaOHCOOK+H2O

计量点时由于弱酸盐的水解，溶液呈微碱性，应用酚酞为指示剂。

三、试剂

氢氧化钠：A.R.或C.P.；邻苯二甲酸氢钾：基准试剂，于105～110℃枯燥至恒重；

酚酞指示剂：1%

四、试验内容

(一)氢氧化钠溶液的配制量取氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新煮沸过的冷蒸馏水至1000ml，摇匀，即得0.1M氢氧化钠溶液。

(二)0.1M氢氧化钠溶液的标定缜密称取枯燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾4.5～5.0g，置小烧杯中溶解后定量转移至250ml容量瓶，稀释至刻度。缜密量取25ml溶液，置250ml容量瓶中，加25ml水，酚酞1滴，用0.1M氢氧化钠溶液滴定至溶液呈淡粉红色保持30s不褪即为终点。记录所耗用的氢氧化钠溶液的体积，作三次平行测定。

c邻?W邻?1000M邻?250.0M邻=204.2

c氢氧化钠?c邻?V邻V氢氧化钠

五、思考题

1．本试验中，氢氧化钠和邻苯二甲酸氢钾两种标准溶液的配制方法有何不同？为什么？

2．本试验中哪些数据需要确切测定？各用什么仪器？

试验5草酸含量测定

一、试验目的

1．把握用中和法测定草酸含量的原理和操作。

2．把握指示剂的滴定终点。

二、试验原理

草酸是无色透明的白色粉末，由水中结晶获得的试剂含2分子结晶水。草酸易溶于水，

在水中可解离出H，其离解常数为Ka1=5.4×10,Ka2=5.4×10,因此，可用标准碱溶液直接滴定。由于Ka1和Ka2比较接近，引而并不出现两个突跃而被一次滴定。

+

－2

－5

H2C2O4+NaOHNa2C2O4+H2O

计量点时由于弱酸盐的水解，溶液呈微碱性，应用酚酞为指示剂。

三、试剂

0.1mol/LNaOH标准溶液0.2%酚酞乙醇溶液四、试验内容

缜密称取草酸样品0.15g，置于250mL锥形瓶中，加50mL水使完全溶解，加酚酞指示

液3滴，用0.1mol/L的NaOH标准溶液滴定至溶液呈淡粉红色，经振荡不再消失即为终点。作三次平行测定。五、思考题

1．为什么草酸可用NaOH直接滴定？

2．操作步骤中，每份样品中约0.15g是怎样求得的？

试验6混合酸（碱）测定方法的设计

试验设计是一项带创造性的工作，需以有关的基础理论知识为指导，并再通过试验来

验证理论。试验方案的设计，为今后开展科学研究和从事实际工作打下良好的基础。在设计试验时，可能会遇到大量问题，其中有些问题是可以通过查阅文献资料解决的，

有些则需要在实践中摸索。我们介绍的混合酸（碱）测定方法的设计，为学生独立地完成混合物分析的试验设计提供了一些思路。

一、摘要

给出了若干种混合酸（碱）体系，让学生选择其中一种，进行滴定分析。要求学生自己独立完成从设计分析方案，到通过实际测定给出定量分析结果的全过程。

二、讨论

在实际工作中，往往会遇到混合酸（碱）体系的测定问题。如何才能设计出一个既确凿又简便的分析方案来呢？

例如，要用滴定分析的方法，测定磷酸二氢钠和磷酸氢二钠混合体系中各组分的含量，涉及分析方案时要如何入手？要考虑些什么问题呢？

首先，必需判断各组分能否用酸（或碱）标准溶液进行滴定。根据磷酸的离解平衡，查出三级离解平衡酸（或碱）常数（pKa1=2.12，pKa2=7.20，pKa3=12.36；pKb1=1.64，pKb2=6.80，pKb3=11.88）。应用弱酸、弱碱能否被确凿滴定的判式：cK≥10判断。显然，磷酸二氢钠可用氢氧化钠标准溶液直接滴定到HPO4。而HPO4继续用氢氧化钠滴定则不可能，但是可用盐酸标准溶液来直接滴定它；也可以先参与适量氯化钙固体，定量置换出氢离子，再用氢氧化钠标准溶液滴定：

2Na2HPO4+3CaCl2===Ca3(PO4)2↓+4NaCl+2HCl

假使要采用直接滴定的方式，滴定的方法也不是唯一的。例如，可用上述方法，在同一份试液中分别用NaOH和HCl标准溶液进行两次滴定；也可以取两分等量的试液，分别用NaOH和HCl标准溶液进行滴定。

至于指示剂，一般是根据滴定反应达计量点时产物溶液的pH值来选择的。假使等量点时产物为HPO4，其溶液的pH=9.7，则可选用酚酞（变色范围为pH=8.2～10.0）或百里酚酞（变色范围为pH=9.4～10.6）为指示剂；当产物为H2PO4时，其溶液的pH=4.7，则可选用甲基红（变色范围为pH=4.2～6.2）或溴甲酚绿（变色范围为pH=3.8～5.4）为指示剂。

总之，设计混合酸（碱）组分的测定方法时，应本着求实的精神，去比较、研究试验中的问题。例如，所选用的方法有什么优点？滴定的误差是多少？哪种指示剂较好？等等。下面给出设计时主要应考虑的几个问题：1）各组分能否被确凿滴定？

2）设计方法的原理是什么？可用哪几种方法进行测定？3）采用什么滴定剂？如何配制和标定？

-2－

2-2--8

4）等量点时产物是什么？这时溶液的pH值是多少？可供选择的指示剂有哪些？哪种最

好？

5）滴定终点一般采用指示剂法检测。不过在滴定较弱的酸（碱）组分时，用电位法指示滴

定终点则较为确凿。理论证明，当两组分终点的?pH≤3时，用电位法指示终点尤为重要，例如对HAc—NaHSO4体系滴定终点的测定。

6）酸碱滴定中，滴定剂和被滴物质的浓度一般设计为0.1mol/L，据此可确定各有关组分的

取用量。

7）被测组分和标准物质之间的计量关系如何表述？各组分含量的计算公式是什么？含量

以什么单位表示？计算用的有关常数是否齐备？

在酸碱滴定法理论课学完后，下面体系例如可让学生选择进行设计，并测定各组分含量：磷酸氢二钾--磷酸二氢钾混合液；硫酸--磷酸混合液；盐酸--氯化铵混合液（氯化铵可用甲醛加强）；氨水--氯化铵混合液；盐酸—硼酸混合液（硼酸可用甘油或甘露醇加强）；氢氧化钠--磷酸钠混合液；醋酸--硫酸混合液；混合碱固体试样。

本试验要求学生按给定的酸（碱）混合样先自行查阅有关资料，并设计好试验程序，经试验指导老师审阅后再进行试验。

一、试验设计的主要内容

1）试验原理。应将方法、原理和有关计算公式详细写出。2）试验用品。

3）试验步骤。包括溶液的标定和各组分含量测定的步骤。

4）试验结果。包括测得的数据及数据处理结果（分析结果和偏差）的表格。5）问题探讨。包括分析误差和总结心得体会等。

二、问题与探讨

1）对于有色溶液的酸碱滴定，应选用何种方法指示等量点？

2）对磷酸氢二钾--磷酸二氢钾混合体系，可看作是混合碱，又可看作混合酸，还可看作是

酸、碱混合物，为什么？

试验70.05mol/LEDTA标准溶液的配制与标定

一、试验目的

1．把握EDTA标准溶液配制和标定的方法；

2．了解金属指示剂变色原理及使用本卷须知。

二、试验原理

EDTA标准溶液常用乙二酸四乙酸二钠(EDTA－2Na·2H2O)配制。EDTA－2Na·2H2O为白

色结晶粉末，因不易制得纯品，标准溶液常用间接法配制，以ZnO为基准物质标定其浓度。滴定条件：pH＝10，以铬黑T为指示剂，终点由紫红色变为纯蓝色。滴定过程中的反应为：滴定前：Zn终点时：

2++HIn2?ZnHIn2?+2?H+

2?ZnHIn+H2YZnY+HIn+H+

纯蓝色

三、试剂

EDTA－2Na·2H2O：A.R.

ZnO：基准试剂

铬黑T指示剂：铬黑T0.1g与研细的NaCl10g混匀

氨－氯化铵缓冲溶液(pH＝10)：取20gNH4Cl溶于少量水中，参与100mL浓氨水，用水稀释至1000mL。

氨试液：取浓氨水400mL，加水使成1000mL。

四、试验内容

(一)0.05mol/LEDTA溶液的配制取EDTA－2Na·2H2O9.5g，加100mL蒸馏水温热使溶

液，稀释至500mL，摇匀，贮存于聚乙烯瓶中。

(二)0.05mol/LEDTA溶液的标定缜密称取已在800℃灼烧至恒重的基准ZnO约0.12g，加稀HCl3mL使之溶解，加蒸馏水25mL，甲基红指示剂的乙醇溶液溶液(0.025→100)1滴，滴加氨试液至溶液呈微黄色。再加蒸馏水25mL，氨－氯化铵缓冲溶液10mL，铬黑T指示剂适量，用EDTA溶液滴定至溶液由紫红色变为纯蓝色即为滴定终点。作三次平行测定。

五、本卷须知

1．甲基红的乙醇溶液只需加1滴，如多加了几滴，在滴加氨试液后溶液呈较深的黄色，

致使终点颜色发绿。

2．滴加氨试液至溶液呈微黄色，应边加边摇，若出现Zn(OH)2↓。遇此状况，可用稀HCl调回，使沉淀溶解。

3．配位反应为分子反应，反应速度不如离子反应快，近终点时，滴定速度不宜太快。

六、思考题

1．酸度对配位反应有何影响？为什么要加氨－氯化铵缓冲溶液？

2．选择金属指示剂的原则是什么？

试验8水硬度的测定

一、试验目的

1．了解配位滴定法测定水硬度的原理和方法。

2．把握水硬度的计算。

二、试验原理

常水中较多的钙盐和镁盐，所以称为硬水，其中钙、镁离子含量用硬度表示。水的硬度包括永久硬度和暂时硬度。在水中以碳酸氢盐存在的钙、镁盐，加热后被分解，析出沉淀而除去。这类盐形成的硬度成为暂时硬度。

Ca(HCO3)2加热CaCO3+H2O+CO2

而钙镁的硫酸盐或氯化物等所形成的硬度称为永久硬度。

常水用作锅炉用水，经常要进行硬度分析，测定水的总度就是测定水中钙镁的总量。在pH=10时，以铬黑T为指示剂，用0.01mol/L的EDTA标准溶液直接滴定水中的Ca、Mg。

2+

2+

Ca滴定前

2+Mg终点时+HIn2+CaInMgIn2?+2?H+

MgIn+H2YMgY+HIn2?+H+

表示硬度常用两种方法：

(1)将测得的Ca、Mg以每升溶液中含CaO的毫克数表示硬度，1mgCaO/L可写作1ppm。(2)将测得的Ca、Mg折算为CaO的质量。以每升水中含10mgCaO为1?(德国度)表示

2+

2+

2+

2+

硬度。

三、试剂

0.05mol/LEDTA溶液的配制：缜密移取0.05mol/LEDTA标准溶液20mL，稀释至100mL

容量瓶中，摇匀。

铬黑T指示剂氨－氯化铵缓冲溶液

四、试验内容

量取水样100mL于锥形瓶中，加氨－氯化铵缓冲溶液5mL，铬黑T指示剂少许(约0.1g)，

用0.01mol/LEDTA标准溶液滴定至溶液由紫红色变为纯蓝色，即为终点。作为三次平行测定。

五、本卷须知

滴定时，因反应速度较慢，在接近终点时，标准溶液渐渐参与，并充分摇动。六、思考题

1．什么叫水的硬度？硬度有哪几种表示方法？

2．为什么测定水的硬度时，要用0.01mol/L的EDTA溶液？

试验9硫代硫酸钠标准溶液的配制与标定、碘标准溶液的配制与标定和维生素C片的含量测定

一、试验目的：①把握直接碘量法测定维生素C的原理和方法；②把握Na2S2O3

标准溶液的配制和标定方法；③把握I2标准溶液的配制和标定方法④熟悉淀粉指示剂的应用和终点判断。

二、内容提要：在酸性条件下，维生素C被碘氧化。一分子的维生素C与一分

子的I2相当，一个I2分子得到两个电子，所以一个维生素C相当于失去两个电子。用基准物质重铬酸钾标定硫代硫酸钠，用标定的硫代硫酸钠标定碘。以此测定维生素C的含量。

三、试验关键：①注意防止I2挥发损失和I—被空气氧化；②控制滴定速度，

把握参与淀粉指示剂的时间。

四、思考题：

①标定碘溶液时可以用硫代硫酸钠，标定硫代硫酸钠溶液时是否可以用碘液，指示剂应何时参与？为什么？

②测定维生素C含量时，维生素C本身就是一个酸，为什么测定时还要加酸？③配制碘液时为什么要加KI和少量的水充分搅拌？

请认真阅读试验教材的预备知识、测定原理和试验步骤，作好预习报告。

试验100.02mol/LKMnO4标准溶液的配制与标定

一、试验目的

1．把握KMnO4标准溶液的配制方法和保存方法。

2．把握用Na2C2O4标定KMnO4标准溶液浓度的方法和本卷须知。

二、试验原理

KMnO4是一强氧化剂，在酸性溶液中半电池反应为：

MnO4?8H+?5eMn2+?4H2O

寻常滴定溶液的酸度要保持在1～2mol/L。

市售KMnO4中常含少量MnO2杂质，在配成溶液后，有MnO2混在里面起催化剂作用，使KMnO4逐渐分解，所以必需过滤除去。配制溶液的水，也不应含有有机还原剂。

光照促使KMnO4逐渐分解。在空气中KMnO4简单还原，故配好的溶液应放在棕色玻璃瓶中，密闭保存。

Na2C2O4与KMnO4反应方程式为：

2?+?5MnO4C2O4?16H2Mn2+?10CO2?8H2O

由于Na2C2O4与KMnO4的反应较慢，开始滴定时参与的KMnO4不会马上褪色，但一经反应生成Mn后，Mn对反应有催化作用，反应速度加快，在滴定时加热溶液也可以加快反应速度。

2＋

2＋

三、试剂

KMnO4：AR

Na2C2O4：基准试剂浓硫酸

四、试验内容

(一)0.02mol/LKMnO4标准溶液的配制称取KMnO41.6～1.9g，溶于500mL新煮沸并放冷的蒸馏水中，混匀，置于棕色玻璃瓶中，于暗处放置7～10天，用玻璃垂熔漏斗过滤，存于另一棕色玻璃瓶中，密塞。

(二)0.02mol/LKMnO4标准溶液的标定缜密称取于105℃枯燥至恒重的Na2C2O4基准试剂0.18～0.2g，置于锥形瓶中，加新蒸馏水100mL、浓H2SO43～5mL，搅拌使溶解。迅速自滴定

管中参与0.02mol/LKMnO4标准溶液20mL待褪色后，加热至65℃继续滴定至溶液呈淡粉红色并保持30s不褪即为滴定终点。平行测定三次。

五、本卷须知

1．当滴定完成时，溶液的温度不低于55℃。

2．加热可以使反应速度加快，但不能加热至沸腾，否则可能引起部分H2C2O4分解。

六、思考题

1．为什么用硫酸使溶液呈酸性？能不能用盐酸或硝酸？

2．用KMnO4滴定时滴定速度应如何控制？为什么？

试验11H2O2含量的测定

一、试验目的

1．把握KMnO4法测定H2O2含量的方法。

2．进一步把握KMnO4法的操作。

二、试验原理

在酸性溶液中H2O2遇到氧化性更强的KMnO4，发生如下反应：

2MnO4?5H2O2?6H+2＋

2Mn2+?5O2?8H2O

滴定开始时反应较慢，一经反应生成Mn后，反应速度加快。

三、试剂

3%(V/V)H2O2样品溶液

1mol/L的H2SO4溶液

四、试验内容

缜密量取3%(V/V)H2O2样品1mL于锥形瓶中，置于贮有20mL蒸馏水的锥形瓶中，加

1mol/L的H2SO4溶液20mL，用0.02mol/LKMnO4标准溶液滴定至溶液呈淡粉红色30s不褪，即为终点。作为三次平行测定。

五、思考题

除KMnO4法外，还有什么方法能测定H2O2含量？应注意哪些事项？

试验12饮用水中氟含量的测定

一．试验目的和要求：

1．把握直接电位法测定离子活度的原理与方法，学会正确使用数字式离子计。2．测定氟离子选择电极的检测下限和实际斜率，了解氟离子选择电极的性能。

二．试验原理：

饮用水中氟含量的高低，对人体健康有一定影响，含量太低时易得龋齿病，含量高时又产生氟中毒现象，一般比较适合的含量为0.5~1mg/ml，离子选择电极电位法测定氟含量操作简便，干扰少，不必进行预处理，故而已成为氟的常规分析方法。

氟离子选择电极是一种均相晶体膜电极，当它与甘汞参比电极组成电池：

HgHgCl2,KCl(饱和)LaF3单晶膜NaF,NaCl,AgClAg试液氟电极甘汞电极时整个电池的电动势为：E电池=EFˉE参(1)

甘汞电极电位在测定中保持不变，氟离子选择电极在测定中要随氟离子活度的变化而变化，参与TISAB后：

EFˉ=φ-(2.303RT/F)㏑aFˉ（2）将（2）代入(1)，并将常数项合并，可得：

E电池=EFˉE参=K-(2.303RT/F)㏑aFˉ（K为常数）（3）

由（3）可见，在一定条件下，电池电动势与试液中的氟离子活度的对数呈线性关系。氟离子选择电极可测定溶液中1~10mol/L的F。

测定氟含量时，温度、pH值、离子强度、共存离子均要影响测定的确凿度。因此，需向标准溶液和待测试样中参与TISAB。其中含柠檬酸/柠檬酸钠盐离子强度以缓冲pH值于6.5。柠檬酸盐还可以消除等对F干扰。KNO3保持离子强度不变。本试验采用标准曲线法。

--6

-

三，仪器与试剂：

PXJ-2离子计、氟离子选择电极、甘汞电极、电磁搅拌器、容量瓶、移液管、吸耳球、小烧杯

氟化钠标准溶液：0.1000mol/L；TISAB：即总离子强度调理缓冲溶液（溶解58.8g柠檬酸钠和20.2gKNO3于少量水中，加水800mL，用HCl或NaOH调理pH值至6.5，稀释至1L。）；自来水样。

四、试验内容与步骤：

1.氟离子选择电极的准备：氟离子选择电极在使用前于10mol/L的NaF溶液中浸泡活化1

—2小时，用蒸馏水清洗电极（其在蒸馏水中的电位值约-300mV）。2.预热仪器20分钟，置离子计于mV档，接入氟离子选择电极与参比电极。

-3

3.标准曲线的绘制：由10mol/L标准NaF溶液配制一系列NaF标准溶液各25mL，其中各

含12.5mLTISAB溶液和10mol/L；10mol/L；10mol/L；10mol/L；10mol/L；10mol/L的F；将上述溶液分别倒入一个50mL的烧杯中，放入清白的搅拌子，插入事先擦干的电极，在离子计上按由稀到浓的顺序依次测定其电位值，记录下来读数（每次先搅拌2分钟，再静置2分钟，待读数稳定后记录）。一测得的电位值为纵坐标，以F浓度为横坐标作标准曲线。

4.自来水中F活度的测定：于清白的烧杯中确凿移取12.5mL自来水样，参与12.5mLTISAB

溶液，在离子计上测定其电位值，重复三次。

5.清洗电极：测定终止后，用蒸馏水清洗电极屡屡，收入电极盒保存。五，数据处理：

1.在标准曲线的线性区间，计算其斜率k,截距b,相关系数r。2.计算自来水中F活度的平均值xmol/L，及标准偏差。

3.常可利用氟离子选择电极测定不含F溶液中的La、Al的浓度，试分析其原因，并导出

电极对La的电位响应公式。

试验

一、目的要求

1．把握分光光度计的重现性、波长精度检查等性能检验方法。2．熟悉分光光度计的使用方法。二、试验原理

1．分光光度计的性能好坏，直接影响到测定结果的确凿性，因此新购仪器及使用一定时间后，均需进行检验调整。

2．利用镨钕滤光片的特征吸收峰值检验波长精度。

3．同种厚度的吸收池，由于材料及工艺等原因，往往造成透光率的不一致，从而影响测定结果，故在使用时需加以选择配对。

三、仪器与试剂

1．仪器：紫外-可见分光光度计（配镨钕滤光片）2.试剂：K2Cr2O7

3．试液：0.02mol/LK2Cr2O7溶液。四、试验内容与步骤

1．吸收池的配对性同种厚度的吸收池之间，透光率误差应小于0.5﹪。检查方法如

3+

-3+

3+

1

-2

-3

-4

-5

-6

-3

13分光光度计的性能检验

下：将蒸馏水分别注入厚度一致的几个吸收池中。以其中任一个吸收池的溶液做空白，在440nm波优点分别测定其它各吸收池中溶液的透光率，然后选择相差小于0.5﹪的吸收池使用。

2．重现性仪器在同一工作条件下，用同种溶液连续测定7次，其透光率最大读数与最小读数之差（极差）应小于0.5﹪。检查方法如下：以蒸馏水的透光率为100﹪，用同一K2Cr2O7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5﹪，则符合要求。

3．波长精度的检查为了检查分光系统的质量，可用仪器自带的镨钕滤光片在529nm和808nm处测定其特征吸收峰。检查方法如下：在透光率状态下，将镨钕滤光片（吸收池盒中，蓝色）放置在吸收池架中，移入光路，将波长调至约500nm（或780nm）处，一边缓缓转动波长旋钮，一边观测数字显示器，当显示读数为最小值时，即为镨钕滤光片的吸收峰，此时读出波长值，波长值应等于529±2nm（或808±2nm），说明该仪器符合使用要求。

五、本卷须知

1．仪器预热时必需开启样品室盖，因样品室盖是光闸门的开关，开启时，光闸门处于关的位置，可避免光电倍增管照光，延长光电倍增管的使用寿命。

2．假使大幅度改变测试波长时，需要等数分钟后，才能正常工作。（因波长大幅移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一移光响应平衡时间。）

3．每台仪器所配套的吸收池不能与其它仪器上的吸收池单个调换。

4．仪器使用完毕后，用随机提供的塑料套罩住，在套子内应放数袋硅胶，以免灯室受潮。反射镜发霉或玷污会影响仪器能量。

5．吸收池每次使用完毕后，应马上用蒸馏水洗净，用吸水纸揩干，存于吸收池的盒内。6．仪器工作一月左右或搬动后，要重新进行波长确切性等方面的检查，以确保仪器的使用和测定的确切。

六、数据处理

1.根据测得的透光率计算极差，判断仪器的重现性是否符合要求。

2.根据测得的透光率画出吸收曲线，找出特征吸收峰，判断仪器是否符合使用要求。七、思考题

1．同种吸收池透光度的差异对测定有何影响？

2．检查分光光度计的波长精度及重现性对测定有什么实际意义？3．使用紫外-可见分光光度计时，应注意哪些问题？

试验14药物中微量铁的测定

一、目的要求

1.把握紫外-可见分光光度计的使用。

2．了解分光光度法测定药物及水中铁含量的操作方法及原理。二、基本原理

铁是药物和水中常见的一种杂质，含量大时易产生特别气味，因此对药物和饮水中的铁要进行检查和测定。亚铁离子与邻二氮菲生成稳定的橙红色协同物。应用此反应可测定铁，当铁以Fe离子形式存在于溶液中时，可预先用还原剂（盐酸羟胺或对苯二酚等）将其还原为Fe离子。显色时溶液pH值应为2～9，若酸度过高（pH＜2）显色缓慢而色浅；若酸度过低，二价铁离子易水解。最大吸收波长为508nm，ε＝11000。

三、仪器及试剂

1.仪器：紫外-可见分光光度计石英吸收池量瓶：50ml、100ml移液管：5ml、2ml量筒

2.试剂与试液：学生自拟四、试验内容与步骤1.标准曲线的制备。2.水样测定。五、本卷须知

1.吸收池应配对校正。

2.吸收池内外应清洁透明，如有气泡或颗粒，应重新装液。3.吸收池用毕应充分洗净保存，关闭仪器，检查枯燥剂及防尘措施。六、数据处理

根据测得数据计算水中铁含量。七、思考题

1.标准曲线和标准对照法分别适用于何种状况？

2.显色反应操作中，参与的各标准溶液与样品液的含酸量不同，对显色反应有无影响？

2＋

3＋

试验15吸收曲线的测绘及吸收系数的测定

一、目的要求

1．把握测定及绘制药物吸收曲线的方法。2．了解吸收系数的测定。二、试验原理

在紫外-可见光区，物质对光的吸收主要是分子中电子能级跃迁所致，同时伴随着分子的转动和振动能级的变化，因此电子吸收光谱一般比较简单、平缓。

紫外吸收光谱能表征化合物的显色基团和显色分子母核，作为化合物的定性依据，一致的化合物其紫外吸收光谱一定一致。

试验证明，若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λ它们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的依据。

根据药典规定，吸收系数是指当溶液浓度为1％，液层厚度为1cm时，指定波长的吸收度。

化合物对光的选择吸收的波长以及相应的吸收系数，是该化合物的物理常数，当已知某纯化合物在一定条件下的吸收系数后，即可由上式计算出该化合物的含量。

三、仪器及试剂

1．仪器：紫外-可见分光光度计量瓶：100ml，10ml吸量管：5ml，1ml

2．试剂：丹皮酚、乙醇（分析纯）3．试液：95％乙醇四、试验内容与步骤

取丹皮酚纯品0.1g，缜密称定至100.0ml量瓶，加95％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。缜密吸取5.00ml于100ml量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，制成丹皮酚储存液备用。

1．吸收曲线的绘制吸取丹皮酚储存液1.00ml于10ml量瓶内，加95％乙醇稀释至刻度。将此溶液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个一致的吸收池盛装后，放置在仪器的比色架上，按仪器使用方法进行操作。从仪器波长范围的上限（或下限）开始，每隔10nm测量一次，在吸收峰和吸收谷处，每隔1nm测量一次，每次测量均需用空白调理100％透光率，

max

、λ

min

或λ

sh

为一定值，且

然后读取测定溶液的透光率（或吸收度），记录不同波优点的测得值。

2．吸收系数的测定利用上述溶液，在274nm波优点测定其吸收度。五、本卷须知

1.严格按仪器的操作要求进行。

2.每调整一次波长均需用空白重新调理100％透光率。

六、数据处理

1．以波长为横坐标，以吸收度为纵坐标绘制吸收曲线。2．依照公式E1cm?七、思考题

1．单色光不纯对于测得的吸收曲线有什么影响？

2．利用测定的百分吸收系数与药典比较，探讨产生误差的原因？

1%A，计算百分吸收系数。C?b试验16标准曲线法测定芦丁含量

一、目的要求

1．把握标准曲线制备的方法。

2．把握标准曲线法测定中药有效成分的方法。二、试验原理

显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性,因此必需控制反应的条件,主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时间等。芦丁为黄酮苷,能与Al生成黄色协同物,在NaNO2的碱性溶液中呈红色,在510nm波优点有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁,应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量。

3＋

OHHOOOHOgluOrha2+

OAl

O

显色法的定量方法可采用标准曲线法。三、仪器与试剂

1．仪器：紫外-可见分光光度计量瓶：100ml、50ml、10ml移液管：10ml吸量管：1ml、5ml2．试剂：

亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇（均为分析纯），芦丁3．试液：

5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，1mol/L氢氧化钠溶液，30%乙醇溶液，0.1mg/ml芦丁对照品，芦丁样品。

四、试验内容与步骤

1．对照品溶液的制备缜密称取在120℃减压枯燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100ml量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。缜密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水芦丁0.1mg）。

2．标准曲线的制备缜密量取对照品溶液（0.1mg/ml）0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置于10ml量瓶中，各加30﹪乙醇使成5.0ml，各缜密参与5﹪亚硝酸钠溶液0.3ml，充分摇匀，放置6min。各缜密参与10﹪硝酸铝溶液0.3ml，充分摇匀，放置6min。各加1mol/L氢氧化钠溶液4.0ml，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15min，于分光光度计上，在510nm波长下测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3．样品测定缜密量取芦丁样品液（0.1mg/ml）3.0ml，置10ml量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30﹪乙醇使成5.0ml，??〞起依法操作直至测定出样品的吸收度。

五、本卷须知

1．参与各种试剂的顺序应按操作方法进行。

2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每参与一种试剂后应充分振摇，以利反应完全。

六、数据处理

1．根据测得的对照品的数据，绘制A～C标准曲线或计算回归方程。

2．根据测得的样品的数据，从标准曲线上读出或由回归方程计算出样品溶液中芦丁的

重量(mg)，按下式计算：

无水芦丁（﹪）＝七、思考题

1．试述标准曲线法的优点。2．影响显色反应有哪些因素？

标准曲线上读出的浓度(mg/ml)?10ml?100%

取样量(ml)?样品的标示浓度（mg/ml）试验17维生素B12注射液的定性鉴别、定量分析

一、目的要求

1．熟悉紫外分光光度计的操作方法

2．把握定性鉴别的方法和吸收系数法的定量方法。3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。二、试验原理

维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。寻常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液的标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500?g等规格。

维生素B12的水溶液在278±1nm、361±1nm与550±1nm三波优点有最大吸收。药典规定在361nm波优点的吸收度与550nm波优点的吸收度比值在3.15～3.45范围内为定性鉴别

1%的依据。361nm处的吸收峰干扰因素少，药典规定以361±1nm处吸收峰的百分吸收系数E1cm值（207）为测定注射液实际含量的依据。

三、仪器与试剂

1．仪器：紫外-可见分光光度计石英吸收池吸量管：5ml量瓶：10ml

2．试剂：维生素B12注射液

3．试液：100?g/ml维生素B12注射液四、试验内容与步骤

1．维生素B12注射液供试品溶液制备缜密吸取维生素B12注射液样品（100?g/ml）3.0ml，置于10ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得供试品溶液。

2．测定将样品稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在361nm波优点与550nm波优点分别测定吸收度。

五、本卷须知

1.在使用紫外-可见分光光度计前，应熟悉本仪器的结构、功能和操作本卷须知。2.吸收池的光学面，必需清洁清白，不准用手触摸，只可用擦镜纸擦拭。六、数据处理

1.定性鉴别根据测得的361nm波优点的吸收度与550nm波优点的吸收度数据，计算该两波优点的吸收度比值，并与标准值3.15～3.45相比较，进行维生素B12的鉴别。

2．吸收系数法将361nm波优点测得的吸收度A值与48.31相乘，即得样品稀释液中每毫升含维生素B12的μg数。

依照百分吸收系数的定义，每100ml含1g维生素B12的溶液（1﹪）在361nm处的吸收度应为207。即：

á1cm（361nm）＝207（100ml/g﹒cm）＝207×10(ml/μg﹒cm)

－4

%C样＝A样/b﹒E11cm＝A样×48.31(μg/ml)

维生素B12标示量（％）＝七、思考题

C样(?g/ml)?样品稀释倍数标示量(100?g/ml)×100％

试比较用标准曲线法及吸收系数法定量的优缺点。

试验18双波长分光光度法测定安钠咖注射液中

咖啡因的含量

一、目的要求

1．把握双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法。2．把握选择测定波长（λ1）和参比波长（λ2）的方法。3．把握在单波长分光光度计上进行双波长法的测定。二、试验原理

安钠咖注射液由无水咖啡因和苯甲酸钠组成，其紫外吸收光谱如下：

吸收光谱说明咖啡因的吸收峰在272nm处，苯甲酸钠的吸收峰在230nm处。若测定咖啡因，从光谱上可知干扰组分苯甲酸钠272nm和253nm处的吸收度相等，则

咖?苯咖?苯△A＝A272?Anm253nm

咖苯咖苯＝A272nm?A272nm?A253nm?A253nm

咖咖苯苯＝A272nm?A253nm(?A272nm?A253nm)咖咖＝E272nmC咖b?E253nmC咖b

咖咖＝(E272nm?E253nm)C咖b

＝?E咖C咖b

式中：ΔA：混合物在272nm和253nm波优点的吸收度之差。272nm和253nm为干扰组分苯甲酸钠的等吸收波长。

咖咖。E272nm、E253nm为被测组分在272nm和253nm波优点的吸收系数（用标准品测得）

C咖为被测组分的浓度；b为吸收池厚度。

ΔA仅与咖啡因浓度成正比,而与苯甲酸钠浓度无关，从而测得咖啡因的浓度。三、仪器与试剂

1．仪器：紫外-可见分光光度计石英吸收池量瓶：100ml吸量管：10ml、1ml

2．试剂：咖啡因、苯甲酸钠、安钠咖

3．试液：安钠咖注射液（每1ml中含无水咖啡因0.12g、苯甲酸钠0.13g）四、试验内容与步骤

1．标准贮备液的制备：缜密称取咖啡因和苯甲酸钠各0.1g，分别用蒸馏水溶解，定量转移至100ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.0mg/ml的贮备液，置于冰箱中保存。

2．咖啡因标准溶液的制备：缜密量取咖啡因贮备液1.0ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

3．苯甲酸钠标准溶液的制备：缜密量取苯甲酸钠贮备液1.0ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度。

4．供试品溶液的制备：缜密量取安钠咖注射液（浓度为每1ml中含无水咖啡因0.012g，苯甲酸钠0.013g）1.0ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。从中缜密量取10.0ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

5．咖啡因和苯甲酸钠标准溶液紫外吸收光谱的测定：在紫外-可见分光光度计上，分别取咖啡因和苯甲酸钠标准溶液于1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在200～400nm范围内，扫描出紫外吸收光谱。

6．干扰组分等吸收波长的选择：从苯甲酸钠吸收光谱图上找出等吸收波长λ其中λ1尽量与咖啡因的最大吸收波长一致。

7．咖啡因标准溶液的△A值测定：在紫外-可见分光光度计上，取咖啡因标准溶液于1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在λ1和λ2处分别测其吸收度。

8．安钠咖样品液的△A值测定：在紫外-可见分光光度计上，取安钠咖样品液于1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在λ1和λ2处分别测其吸收度。

五、本卷须知

1.在使用紫外-可见分光光度计前，应熟悉本仪器的结构、功能和操作本卷须知。2.在仪器扫描过程中，不要按动任何键，不要任意开启样品室盖子。六、数据处理

ΔA＝?ECb

1

和λ2，

?A样?A标??EC样b?EC标b?C样C标

咖啡因标示量%＝

C样?稀释倍数标示量?100%

咖啡因标示量%应在95%~105%之间。七、思考题

1．为什么双波长分光光度法可以不经分开直接测定二元混合物中待测组分的含量？2．选择等吸收波长的原则是什么？怎样从吸收光谱图上选择等吸收波长？

试验19导数光谱法测定安钠咖注射液中咖啡因的含量

一、目的

1．学习导数吸收光谱的绘制。

2．利用导数光谱法直接测定二元混合物中组分的含量。

二、提要

1．一阶导数光谱是?A????图谱，??一般在1～4nm之间。

2．当二元组分各自零阶光谱完全重迭时，可选择一组分的一阶导数等于0处波长作为另一组分的测定波长，因导数具加和性，故在此波长下测定混合物的导数值?A??，即为另一组分的导数值。

3．导数值与浓度成正比

??????c?L????三、仪器与试剂

1．可见—紫外分光光度计：

2．容量瓶：100ml3个、250mL1个、50ml6个、500ml1个；3．刻度吸管；10ml3支；

4．咖啡因标准液：缜密称取咖啡因标准品0.1g，置于100ml容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，再量取此液10ml于100ml容量瓶中用水稀释至刻度；

苯甲酸钠标准液：缜密称取苯甲酸钠0.1g,置于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，再缜密量取此液5mI于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度；

安钠咖注射液样品：每1ml中含无水咖啡因0.12g、苯甲酸钠0.13g,药典规定均应为标示量的93～107.0%。

四、步骤

(一)样品液的制备缜密量取安钠咖注射液2.5ml于250ml容量瓶中，加水稀释至

刻度，缜密量取此液5ml于50m1容量瓶中，加水至刻度。(二)测定

1．苯甲酸钠一阶导数吸收光谱的绘制：取苯甲酸钠待测液于1cm石英吸收池中，以水为空白，在250—320nm波长范围内，每隔2nm测定一次吸光度，以相邻波长△A对波长平均值作图，得一阶导数光谱，求出?A???0对应的波长。

2．咖啡因一阶导数工作曲线的绘制：缜密量取待测溶液3、4、5、6、7ml分别置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，以1cm石英吸收池，用水作为空白，在苯甲酸钠?A制?A?????0波优点，分别测定各溶液的导数值?A?c工作曲线。

??(以??＝2nm为单位)，并绘

3．样品安钠咖注射液中咖啡因测定：将上述配制的安钠咖待测液，以1cm石英吸收池用水为空白，在上述波长下测定导数值?A工作曲线上求出待测液中咖啡因的浓度。

??(以??＝2nm为单位)，然后从

五、思考题

应用导数光谱进行定量测定的特点是什么?

试验20银黄口服液中黄芩苷和绿原酸的含量测定

一、目的要求

1．把握紫外-可见分光光度计的定量操作方法。

2．把握银黄口服液中黄芩苷和绿原酸含量测定的基本原理和定量计算方法。二、试验原理

本品为金银花提取物与黄芩提取物制成的口服液，规格为每支10ml。按我国药典(2000版一部)规定，该口服液每支含金银花提取物以绿原酸计不得少于0.108g，含黄芩提取物以黄芩苷计不得少于0.216g。

三、仪器及试剂

1．仪器：紫外-可见分光光度计量瓶：100ml移液管：2ml，1ml吸耳球

2．试剂：银黄口服液HCl（分析纯）

3．试液：0.2mol/mlHCl溶液四、试验内容与步骤

缜密量取本品1ml置50ml量瓶中，加0.2mol/mlHCl溶液稀释至刻度，摇匀。缜密量取稀释液1ml，置于50ml量瓶中，加上述HCl溶液稀释至刻度，用1.0cm的石英吸收池，在278±2nm与318±2nm波优点分别测定吸收度。

五、本卷须知1．取样要确凿。

2．仪器操作时应严格依照操作规程进行。六、数据处理

根据测得的数据计算口服液中绿原酸和黄芩苷的含量

绿绿绿原酸E318＝515.2，E278＝222.7

黄黄黄芩苷E318＝369.5，E278＝631.2

按下式计算供试液中绿原酸和黄芩苷的浓度（mg/100ml）

C绿＝2.599A324－1.522A276C黄＝2.121A276－0.9169A324

七、思考题

1．银黄口服液的质量控制都可以采用哪些方法？各有何特点？2．欲将吸收系数作定量依据，需要哪些试验条件？

试验21原子吸收法测定感冒冲剂中的铜

一、

目的要求

1．学习原子吸收光谱法的基本原理。

2．了解原子吸收光谱仪的基本结构及其使用方法。3．把握以标准曲线法测定感冒冲剂中的铜元素的方法。二、

试验原理

原子吸收光谱法是基于被测元素的基态原子在蒸气状态下对特征电磁辐射吸收进行元素定量分析的方法。当光源发射的某一特征波长的光穿过一定厚度的原子蒸气时，被测元素