分析性能评估资料

分析性能评估资料（四）4.HPV各亚型的符合性研究4.1HPV各亚型的符合性研究4.1.1实验的基本参数文件号 BMT-TF-SFDA-01-R0实验名称HPV各亚型的符合性研究实验目的用于评价分析BMTHPV分型9G膜试剂盒的符合性试验操作者（签名）确认人（签名）开始日期（年/月/日） 结束日期（年/月/日）试验地点BMT2-2-2 温度 湿度使用的材料/样本使用HPV16,18,31,33,45,26,35,39,51,52,53,56,58,59,66,68,69,70,73,6,10的标准物质和10mMTris缓冲液（阴性）产品编号产品名称质控号BMTHPV1分型9G膜试纸条BMTHPV2分型9G膜试纸条杂交缓冲液HCCy5-DNA冲洗缓冲液10mMTris缓冲液（pH8.O）PCR预混合物BMTHPV引物组保存原始文档的文件夹名称\HPV各型的符合性研究①②保存原始文档的文件夹名称原始文件名4.1.2实验方法1）材料准备在设定的有效期内使用已经过Nanodrop定量检测的确定浓度的DNA作为测试标本。该测试样本是由韩国食品与药品管理局分配的国家标准品HPVL1DNA（人乳头瘤病毒L1DNA,代码08/023）。使用的标本见下表。

样本：HPVL1DNA（人乳头瘤病毒L1DNA，代码08/023）HPV亚型管理编号标准物质的浓度HPV亚型管理编号标准物质的浓度HPV16HPV-16-KFDA1.0x102拷贝HPV56HPV-56-KFDA1.0x103拷贝HPV18HPV-18-KFDA1.0x102拷贝HPV58HPV-58-KFDA1.0x103拷贝HPV31HPV-31-KFDA1.0x102拷贝HPV59HPV-59-KFDA1.0x103拷贝使用的材料/样本HPV33HPV-33-KFDA1.0x102拷贝HPV66HPV-66-KFDA1.0x103拷贝HPV45HPV-45-KFDA1.0x103拷贝HPV68HPV-68-KFDA1.0x103拷贝HPV26HPV-26-KFDA1.0x103拷贝HPV69HPV-69-KFDA1.0x103拷贝HPV35HPV-35-KFDA1.0x103拷贝HPV70HPV-70-KFDA1.0x103拷贝HPV39HPV-39-KFDA1.0x103拷贝HPV73HPV-73-KFDA1.0x103拷贝HPV51HPV-51-KFDA1.0x103拷贝HPV06HPV-06-KFDA1.0x103拷贝HPV52HPV-52-KFDA1.0x103拷贝HPV10HPV-11-KFDA1.0x103拷贝HPV53HPV-53-KFDA1.0x103拷贝阴性对照10mMtrisbuffer2）实验过程BMTHPV9G膜试剂盒对HPV各亚型符合性实验操作步骤如下。a）准备好HPV16,1&31,33,45,26,35,39,51,52,53,56,5&59,66,68,69,70,73,6,10的标准物质和10mMtris缓冲液（阴性）；b） 按照用户手册中PCR法（2-2）操作，以上述DNA为模板进行PCR扩增；c） 然后，按照用户手册中杂交法（2-3）步骤在试纸条上进行杂交，再按照用户手册中的冲洗方法（2-4）进行冲洗；d） 使用BMT1D扫描仪T扫描试纸条并分析结果；e） 若HPV检测显示“HPVPositive”,同时HPV16,18,45,31,33低于300时,将剩下的第一次杂交溶液（110ul）加至HPV2试纸条（可选）的“样本端口”,以取得进一步的基因分型结果。4.1.3结论HPV亚型实验次数第一次第二次第三次HPV16HPV16HPV16HPV16HPV18HPV18HPV18HPV18HPV31HPV31HPV31HPV31HPV33HPV33HPV33HPV33HPV45HPV45HPV45HPV45HPV26HPVtypeEHPVtypeEHPVtypeEHPV35HPVtypeCHPVtypeCHPVtypeCHPV39HPVtypeDHPVtypeDHPVtypeDHPV51HPVtypeCHPVtypeCHPVtypeCHPV52HPVtypeAHPVtypeAHPVtypeAHPV53HPVtypeEHPVtypeEHPVtypeEHPV56HPVtypeBHPVtypeBHPVtypeBHPV58HPVtypeCHPVtypeCHPVtypeCHPV59HPVtypeBHPVtypeBHPVtypeBHPV66HPVtypeAHPVtypeAHPVtypeAHPV68HPVtypeCHPVtypeCHPVtypeCHPV69HPVtypeCHPVtypeCHPVtypeCHPV70HPVtypeDHPVtypeDHPVtypeDHPV73HPVtypeEHPVtypeEHPVtypeEHPV06+(PCRline)+(PCRline)+(PCRline)HPV10+(PCRline)+(PCRline)+(PCRline)Tris缓冲液---注释：“+”代表阳性，“-”代表阴性4.1.4实验结果4.141HPV16的测试结果这个结果是通过以下的步骤获得的：将浓度为1.0x102拷贝的HPV16DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪tm进行扫描。这个测试重复做三次。Dataintensity1sttest2ndtestDataintensity1sttest2ndtest3rdtestHC239819412418HPV16348534223404HPV18531221HPV45261648HPV31541251HPV33595419PCR321332152510PC1130846922将通过分析HPV16符合的结果而得出的数值归纳到上述三次试验结果的表格中。根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV16的所有扫描结果在HPV16位置上的荧光灵敏度达到3,404或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,510或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。除HPV16外其他亚型HPV位置上的荧光强度数值低于59,所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,941或更高，PC的荧光强度检出值为846或更高。HPV18测试结果这个结果是通过以下的步骤获得的：将浓度为1.0x102拷贝的HPV18DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪tm进行扫描。这个测试重复做三次。

Dataintensity1sttest2Dataintensity1sttest2ndtest3rdtestHC162414041792HPV16657175HPV18329729593183HPV4510691132HPV31755649HPV3352106139PCR321133823368PC512727896将通过分析HPV18符合的结果而得出的数值归纳到上述三次试验结果的表格中。根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV18的所有扫描结果在HPV18位置上的荧光灵敏度达到2,959或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,211或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。除HPV18外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于139，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,404或以上，PC的荧光强度检出值为512或以上。HPV45的测试结果这个结果是通过以下的步骤获得的：将浓度为1.0x103拷贝的HPV45DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪tm进行扫描。这个测试重复做三次。<HPV45测试结果>Dataintensity1sttestDataintensity1sttest2ndtest3rdtestHC137916291950HPV161455639HPV18266447HPV45317331033068HPV31478949HPV33116114PCR325633603317PC809867796分析HPV45的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV45的所有扫描结果在HPV45位置上的荧光灵敏度达到3,068或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,256或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV45外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于145，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,379或以上，PC的荧光强度检出值为796或以上。HPV31的测试结果这个结果是通过以下的步骤获得的：将浓度为1.0x102拷贝的HPV31DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪tm进行扫描。这个测试重复做三次。<HPV31测试结果>Data1 1(lbidS313417bai贮h7iSB同33710411 1(15iOB315417Data1 1(lbidS313417bai贮h7iSB同33710411 1(15iOB3154177S9B35B571(141intensity1sttest2ndtest3rdtestHC195218811906HPV16668267HPV181821537HPV45363056HPV31332735133571HPV33182326PCR384534793615PC751706671分析HPV31的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV31的所有扫描结果在HPV31位置上的荧光灵敏度达到3,327或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,479或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。除HPV31外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于182，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,881或以上，PC的荧光强度检出值为671或以上。HPV33的测试结果这个结果是通过以下的步骤获得的：将浓度为1.0x102拷贝的HPV33DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪tm进行扫描。这个测试重复做三次。

Dataintensity1sttest2Dataintensity1sttest2ndtest3rdtestHC280118962130HPV16522933HPV18846924HPV45803137HPV31632229HPV33287832403474PCR321433733337PC610628684分析HPV33的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV33的所有扫描结果在HPV33位置上的荧光灵敏度达到2,878或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,214或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。除HPV33外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于84,所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,896或以上，PC的荧光强度检出值为610或以上。HPV26107copies2ndtest3rdtestHCTypeE102918intensity183462521仃587262PC1stteststtest2ndtest3rdtest1504197817743369HPV26107copies2ndtest3rdtestHCTypeE102918intensity183462521仃587262PC1stteststtest2ndtest3rdtest150419781774336933283619TypeDTypeCTypeBTypeAPCR249425213524463640898根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV26的所有扫描结果在HPV26位置上的荧光灵敏度达到3,328或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,494或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV26外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于72,所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,504或以上，PC的荧光强度检出值为463或以上。4.1.4.7HPV35的测试结果这个结果是通过以下的步骤获得的：将浓度为1.0x103拷贝的HPV35DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪tm进行扫描。这个测试重复做三次。<HPV35测试结果>

HPV35107copies2ndtest3rdtestHCTypeE316824236882intensity4256412445414PC1stteststtest2ndtest3rdtest291417702846TypeDTypeCHPV35107copies2ndtest3rdtestHCTypeE316824236882intensity4256412445414PC1stteststtest2ndtest3rdtest291417702846TypeDTypeC186227642814TypeBTypeAPCR280428313465992971890根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV35的所有扫描结果在HPV35位置上的荧光灵敏度达到1,862或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,804或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV35外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于244,所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,770或以上，PC的荧光强度检出值为890或以上。

HPV39107copies2ndtest3rdtestHC1380TypeE9835157TypeD2548intensityTypeC29545TypeB282566TypeA9557PCR3288PC9471stteststtest2ndtestHPV39107copies2ndtest3rdtestHC1380TypeE9835157TypeD2548intensityTypeC29545TypeB282566TypeA9557PCR3288PC9471stteststtest2ndtest3rdtest172225032228319516531623361591666根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV39的所有扫描结果在HPV39位置上的荧光灵敏度达到2,228或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,162或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV39外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于165，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,380或以上，PC的荧光强度检出值为591或以上。HPV51 1sttest 2ndtest 3rdtest1sttest2ndtest3rdtestHC175216072662TypeE204090TypeD633166intensityTypeC184616611756TypeB464313TypeA2139143PCR308928992500PC12651023949——分析hPV51的符合性测■试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结!电表格中：根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV51的所有扫描结果在HPV51位置上的荧光灵敏度达到1,661或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,500或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV51外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于143，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,607或以上，PC的荧光强度检出值为949或以上。

HPV52107copies2ndtest3rdtestHC82TypeE4853244686intensity5747256289PC7681stteststtest2ndtest3rdtest233721832667TypeDTypeCHPV52107copies2ndtest3rdtestHC82TypeE4853244686intensity5747256289PC7681stteststtest2ndtest3rdtest233721832667TypeDTypeC169TypeB2947TypeA322331103444PCR32153270873535根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV52的所有扫描结果在HPV52位置上的荧光灵敏度达到2,947或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,215或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV52外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于169，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为2,183或以上，PC的荧光强度检出值为535或以上。

HPV53107copies2ndtest3rdtestHC1022TypeE3339TypeD82117intensityTypeC242290TypeB2721仃TypeA3837PCR3378PC7584741stteststtest2HPV53107copies2ndtest3rdtestHC1022TypeE3339TypeD82117intensityTypeC242290TypeB2721仃TypeA3837PCR3378PC7584741stteststtest2ndtest3rdtest244428302943346115327693241504根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV53的所有扫描结果在HPV53位置上的荧光灵敏度达到2,943或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,769或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV53外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于153，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,022或以上，PC的荧光强度检出值为504或以上。

2ndtest3rdtestHCTypeE129384883735378647523298PC7589641stteststtest2ndtest3rdtestHPV56107copies2ndtest3rdtestHCTypeE129384883735378647523298PC7589641stteststtest2ndtest3rdtestHPV56107copies194119961940TypeDintensityTypeCTypeB344036143681TypeA105PCR323034353172885根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV56的所有扫描结果在HPV56位置上的荧光灵敏度达到3,440或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,172或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV56外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于232，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,940或以上，PC的荧光强度检出值为758或以上。

2ndtest3rdtestHC41TypeE43642381572920163648496779761stteststtest2ndtest3rdtestHPV58107copies1271231212859TypeD2ndtest3rdtestHC41TypeE43642381572920163648496779761stteststtest2ndtest3rdtestHPV58107copies1271231212859TypeDintensity2266TypeC30202043TypeBTypeA3340PCR31443216638PC人根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV58的所有扫描结果在HPV58位置上的荧光灵敏度达到2,043或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,144或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV58外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于81，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为2,712或以上，PC的荧光强度检出值为638或以上。

72ndtest3rdtestHCTypeE1963463469166314751111PC4856701stteststtest2ndtest3rdtestHPV59107copies131618101908TypeDintensityTypeC72ndtest3rdtestHCTypeE1963463469166314751111PC4856701stteststtest2ndtest3rdtestHPV59107copies131618101908TypeDintensityTypeC100TypeB345730843700TypeA170PCR321032983497696根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV59的所有扫描结果在HPV59位置上的荧光灵敏度达到3,084或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,210或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV59外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于170，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,316或以上，PC的荧光强度检出值为485或以上。

2ndtest3rdtestHC39TypeE52386684348040227163286576291stteststtest2ndtest3rdtestHPV66107copies280114781527TypeD2ndtest3rdtestHC39TypeE52386684348040227163286576291stteststtest2ndtest3rdtestHPV66107copies280114781527TypeDintensityTypeCTypeBTypeA2878304430053206PCR34333206610PC人根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV66的所有扫描结果在HPV66位置上的荧光灵敏度达到3,005或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,206或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV66外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于84,所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,478或以上，PC的荧光强度检出值为610或以上。

intensity18581875190745TypeDTypeCTypeBTypeAPCR253408PC分析HPV68的符合性测试结果得到的数值338410212143218intensity18581875190745TypeDTypeCTypeBTypeAPCR253408PC分析HPV68的符合性测试结果得到的数值338410212143218根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV68的所有扫描结果在HPV68位置上的荧光灵敏度达到1,858或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,218或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV68外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于214,所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,961或以上，PC的荧光强度检出值为789或以上。

HPV69107copies2ndtest3rdtestHC2961TypeE492560TypeD5238104intensityTypeC1913TypeB6436TypeA13020PCR3165PC7009161stteststtest2HPV69107copies2ndtest3rdtestHC2961TypeE492560TypeD5238104intensityTypeC1913TypeB6436TypeA13020PCR3165PC7009161stteststtest2ndtest3rdtest1449206314362870103366032241573根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV69的所有扫描结果在HPV69位置上的荧光灵敏度达到1,436或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,165或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV69外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于130，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,449或以上，PC的荧光强度检出值为700或以上。

at2ndtest3rdtestHCTypeE1577097409236475323345077428971stteststtest2ndtest3rdtestHPV16107copies1784at2ndtest3rdtestHCTypeE1577097409236475323345077428971stteststtest2ndtest3rdtestHPV16107copies178429062328218TypeD287534993160intensityTypeC117TypeBTypeAPCR321034913254PC人根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV70的所有扫描结果在HPV70位置上的荧光灵敏度达到2,875或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,210或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。除HPV70外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于218，所以它们不会在其它位置被检测出来。HC的荧光强度检出值为1,784或以上，PC的荧光强度检出值为507或以上。

2ndtest3rdtestHCTypeE851324131111531仃378383PC7531stteststtest2ndtest3rdtestHPV73107copies2ndtest3rdtestHCTypeE851324131111531仃378383PC7531stteststtest2ndtest3rdtestHPV73107copies173138411078301636963537TypeDintensityTypeCTypeBTypeAPCR3548342630056431159根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV73的所有扫描结果在HPV73位置上的荧光灵敏度达到3,016或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,005或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。.除