自来水中细菌总数的测定

自来水中细菌总数的测定摘要：本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是近似值【1】。目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作平板，按菌落计数方法进行计数，通过实验测得的菌落数对照国家饮用水标准来判断水质【2】。良好的饮用水细菌总数应＜100CFU/mL，而＞500CFU/mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准(GB5749—85)规定每毫升水样细菌总数37°。培养24h不得大于100个。对自来水用平板菌落计数技术测定细菌总数，通过观测得到如下结果：菌落数为61个/mL。关键词：自来水普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板菌落计数技术细菌总数0引言各种天然水中常含一定数量的微生物，而水是微生物广泛分布的天然环境。水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等【3】。水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。细菌总数是指1mL水样在普通营养琼脂培养基中，37。。经24h培养后，所生长的菌落数。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧细菌菌落总数【4】。微生物学指标是评价水中生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。近年来随着环境污染加重我国水质不断下降，给居民饮水安全带来隐患。因此，我们想通过测定自来水中的细菌总数，了解水质情况，呼吁人们保护水资源。1材料和方法1.1时间与地点本实验于2010年10月26〜27日在太原师范学院微生物实验室完成。1.2材料1.2.1实验材料自来水1.2.2实验试剂牛肉膏蛋白胨培养基1mol/LNaOH1mol/LHCl蒸馏水1.2.3实验仪器高压蒸汽灭菌锅培养皿三角烧瓶天平牛角匙pH试纸(pH5.5-9.0)量筒玻璃棒电热炉温度计1.3方法1.3.1灭菌1.3.1.1首先将高压蒸汽灭菌锅内锅层取出，再向外锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。1.3.1.2放回内锅层,并放入培养皿、三角烧瓶、量筒、移液管。1.3.1.3加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，防止漏气。1.3.1.4用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa，121°C，20min灭菌。1.3.1.5灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。1.3.2水样的采取放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。1.3.3制备牛肉膏蛋白胨培养基称量用天平称量33g牛肉膏蛋白胨培养基粉末置于烧杯中。溶化在上述烧杯中加入1000mL蒸馏水，然后，在石棉网上加热，并用玻璃棒搅拌直至沸腾2分钟。调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH。如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/LHCl进行调节。1.3.4细菌总数测定1.3.4.1灭菌移液管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中。共做2个平皿。1.3.4.2分别倾注约15mL已溶化并冷却到45。左右的牛肉膏蛋白豚琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使自来水和培养基混匀。1.3.4.3另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白豚琼脂培养基15mL，作空白对照。1.3.4.4待培养基凝固后，倒置于37。温箱中，培养24小时，进行菌落计数。两个平板的平均菌落数，即为1mL自来水的细菌总数。2结果与分析2.1结果2.1.1菌落照片2.1.2实验数据测得培养皿中细菌菌落数如下表：自来水中菌落总数表实验数据平板序号12对照组菌落数目（个）11211050自来水中细菌总数=（平板1菌落数+平板2菌落数）-2-对照组菌落数实验中对照组的菌落为50，处理上表中数据知，该自来水中细菌平均数为61个/mL。2.2分析实验测的该自来水中的细菌总数为61个/mL,符合国家饮用水标准。3讨论人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。细菌是微生物界的一个大类群，它与人类的生活密切相关，其中有的有益，有的有害，为了我们更好的生活，我们必须研究细菌，并掌握一些方法，来使细菌向人类有用的方面发展【5】。本实验对照组中的菌数应为0个，但实验测得数据为50个，这主要是因为有杂菌混入，杂菌来源可能：培养皿灭菌不充分；灭菌后在空气中放置又落入杂菌；培养基倾入培养皿后没有立即加盖；配置培养基时反复升降温（没有立即转移使培养基凝固），使一些杂菌产生抗性【6】。虽然水中存在大量的细菌且种类繁多，但由于牛肉膏蛋白胨所提供的生长条件的限制，培养基中所得的细菌群落较单一为大肠杆菌，呈圆片状【7】。实验过程中应做到：（1）将培养基倒置培养。这样绝大多数的细菌会着生在培养基表面。这是由于菌种在固体培养基上借助重力作用而形成的，有利于菌落计数。（2）倒置培养基时应降温至45°C，温度过高会烫死大肠杆菌，过低会使培养基凝固；（3）倾注培养基后要将平皿在桌面上做匀速旋转，将培养基和自来水样摇匀，在培养基中观察时可见一些菌苔就是平皿没有摇匀的结果；（4）培养基不能反复升降温，倾入培养皿后应立即加盖，且灭菌后不应在空气中放置，以免杂菌混入；（5）应在高温时在对照组中倒入培养基，否则对照组中会出现大量的菌落【8】。测定水样是否符合饮用水的微生物方面的卫生标准，通常包括下列两项：细菌总数测定和总大肠菌群的测定。除采用平板菌落计数测定细菌总数外，现在已有许多快速、简便的微生物检测仪或试剂纸（盒或卡）等用来测定水中细菌总数【9】。4结论实验测的该自来水中的细菌总数为61个/mL，符合国家饮用水标准。通过此实验，我们可知平板菌落计数技术法是测定水样中细菌总数比较方便的方法，但它也存在一些无法避免的因素，比如在数菌落时，菌落太小且又处于培养基内部，这样就不能准确地观察到菌落，从而影响实验结果；又如在培养过程中由于细菌之间的相互抑制也会使菌落计数的结果减少【10。因此，只有我们在不需要精确的情况下才可使用此方法。本实验的成败在于灭菌、无菌操作技术、培养基的温度等方面是否操作正确，所以，今后要更加注意其方法及原理。参考文献沈萍陈向东主编《微生物学实验》（第4版）高等教育出版社李根生《干燥培养基恩德制造及应用》上海：上海科学技术文献出版社，1994陈声明刘丽丽《微生物学实验研究方法》北京：人民教育出版社，1982郝士海《现代细菌学培养基和生化试验手册》北京：中国科学技术出版社，1992张清敏，李洪远，王兰.环境生物学实验技术，2005顾孔珍钱纯罗岳平.用R2AAgar培养基提高饮用水中细菌总数的检出率[J].净水技术，2004,2