微生物检验9课件

不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌

概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。不发酵革兰阴性杆菌假单胞菌属(Pseudomonas)产碱杆菌属(Alcaligenes)不动杆菌属(Acinetobacter)莫拉菌属(Moraxella)无色杆菌属(Achromobacter)金氏杆菌属(Kingella)黄杆菌属(Flavobacterium)艾肯菌属(Eikenella)土壤杆菌属(Agrobacterium)黄单胞菌属(Xanthomonas)丛毛单胞菌属(Comamonas)非发酵菌嗜麦芽窄食单胞菌葡萄糖产酸无色杆菌属土壤杆菌属假单胞菌属动力+OXOX－不动杆菌属+葡萄糖产酸黄色素摩拉氏菌属黄杆菌属－－－++端鞭毛－+－++产碱杆菌属尿素－+常见不发酵菌的鉴定双岐索引第一节假单胞菌属(Pseudomonas)一、概述1.分类2.临床意义3.微生物特性

4.微生物检验

(1)检验程序

(2)鉴定

(3)药物敏感性试验(AntibacterialSusceptibilityTest)1.分类假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种一群需氧、不发酵葡萄糖无芽胞，有鞭毛氧化酶阳性的革兰阴性杆菌多为条件致病菌3.微生物特性革兰阴性、无芽胞、专性需氧有端鞭毛或丛鞭毛生长温度范围广，最适生长温度为35℃产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药

4.微生物检验检验程序

鉴定药物敏感性试验按NCCLS（NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards）推荐，分为4组：A，B，C，D二、铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)1.临床意义：铜绿假单胞菌在自然界分布较为广泛，因此很容易污染器械而造成感染机会

2.生物学特性革兰阴性，长短不一单鞭毛生长温度25～42℃氧化酶阳性还原硝酸盐、分解尿素、精氨酸酶阳性（1）分离培养与鉴定：标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等

3.微生物检验（检验程序）铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)血平板上毛玻璃样，金属光泽，生姜味可产生多种色素：荧光素与绿脓素铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)（2）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型（3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGEpulsedfieldgelelectrophoresis）、基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型鉴定技术铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)检验结果分析与报告：

诊断一定要与临床表现相结合治疗过程中，3－4天后重复药敏测试耐药机制：①产酶：金属酶，OXA酶②外膜蛋白的改变（Outermembraneproteins，OMP）为主要机制③主动泵出机制：对喹诺酮类，MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj④整合子：1类，3类铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌两菌均人兽共患病原菌人类感染是经伤口、粘膜、呼吸道急性患者可有高热、衰竭等全身症状肺鼻疽病、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症临床意义生物学特性

革兰阴性杆菌无芽胞、无荚膜伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(1~4根)，4℃不能生长马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42℃不生长微生物检验分离培养与鉴定需氧菌生长温度35℃普通培养基、血琼脂、麦康凯生化鉴定荧光直接法染色镜检，可快速诊断临床意义

为条件致病菌呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位。生物学特性革兰阴性，端鞭毛，(1~8)根有动力、无芽孢、无荚膜生长温度为35℃，4℃不生长血琼脂、普通培养基菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素第二节不动杆菌属

分类：醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus)洛菲不动杆菌(A.lwoffi)溶血不动杆菌(A.haemolgticus)鲍曼不动杆菌(A.baumannii)琼氏不动杆菌(A.junii)约翰逊不动杆菌(A.johnsonii)

临床意义为条件致病菌在不发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，近年呈上升趋势生物学特性革兰阴性杆菌，多为球杆状，常见成对排列无芽胞，无鞭毛专性需氧菌生长温度为35℃普通培养基，麦康凯、血平板均生长氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性微生物检验（检验程序）

血琼脂培养基：菌落圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径2~3mm而洛菲不动杆菌菌落小，直径为1~1.5mm药物敏感试验及结果解释Kirby-Bauer法做药敏试验，药物的选择与假单胞菌抗生素的分组相同鲍曼氏不动杆菌，对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药第三节产碱杆菌属

粪产碱杆菌(A.faecalis)皮乔特产碱杆菌(A.Piechaudii)粪产碱杆菌亚型(A.faecalistypeⅡ)木糖氧化产碱杆菌(A.xylosoxidans)脱硝亚种(Subsp.denitrificans)木糖氧化亚种(Subsp

xylosoxidans)分类临床意义人体的正常菌群医院感染的病原菌之一产碱杆菌属生物学特性革兰阴性杆菌周鞭毛、有动力最适生长温度为25~35℃普通培养基生长分离培养与鉴定pH至8.6为本菌特点氧化酶阳性触酶阳性不分解任何糖类O-F基础培养呈碱性脲素酶阴性不液化明胶第四节黄杆菌属

短黄杆菌(F.breve)脑膜炎败血性黄杆菌

(F.meningospticum)芳香黄杆菌(F.odoratum)水田黄杆菌(F.mizutaii)嗜糖黄杆菌(F.multrivorum)嗜醇黄杆菌(F.spiritivorum)嗜温黄杆菌(F.thalpophilum)薮内黄杆菌(F.gaduuchiae)IIb群黄杆菌(F.groupIIb)IIe群黄杆菌(F.groupIIe)IIh群黄杆菌(F.groupIIh)IIi群黄杆菌(F.groupIIi)分类临床意义是条件致病菌医院感染的常见菌之一引起败血症、新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎生物学特性革兰阴性杆菌无鞭毛、无动力、无荚膜、无芽胞需氧代谢氧化酶、触酶、磷酸酶阳性

分离培养与鉴定血琼脂培养基生长温度为35℃菌落：光滑、有光泽、边缘整齐，淡黄色，也有的呈黄色或棕黄色

药物敏感试验及结果解释

临床经验用药可选磺胺及大环内脂类的红霉素。临床上常见的脑膜炎败血黄杆菌及芳香黄杆菌等对广谱抗菌药有耐药性，所以最好根据药敏试验选择用药。第五节莫拉菌属

分类莫拉菌属(Moraxella)属莫拉菌科（Moraxellaceae）医学上重要的莫拉菌有：腔隙莫拉菌（M.lacunata）卡他莫拉菌（M.catarrhalis）非液化莫拉菌(M.nonliquefaciens)奥斯陆莫拉菌(M.osloensis)亚特兰大莫拉菌(M.atlantae)狗莫拉菌(M.canis)林肯莫拉菌(M.lincolnii)临床意义引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症微生物特性革兰阴性球杆菌呈双短链状排列，具有多形性微生物检验

分离培养：营养要求较高生长温度32~35℃血琼脂平板上生长良好针尖大小的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落。微生物检验鉴定：氧化酶阳性触酶阳性无动力不分解任何糖类吲哚试验阴性药物敏感试验及结果解释对青霉素类敏感对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖甙类药物均为敏感脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血脑屏障的问题第六节军团菌属

分类军团菌属(Legionella)属于军团菌科（Legionellaceae）常见的与人类疾病有关的军团菌：嗜肺军团菌（Legionellapneumophila）米克戴德军团菌（L.micdadei）长滩军团菌（L.longbeachae）杜莫夫军团菌（L.dumoffii）波兹曼军团菌（L.bozemanii）临床意义引起肺炎型和非肺炎型(庞蒂亚克热Pontiacfever)感染肺炎型：多器官损害，肺部、消化道及神经系统症状及体征，致死率高医院感染可高达23%慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者易发本病，且死亡率高达45%临床意义空气－乳胶微粒传播发病机制：①内毒素和细胞产生的多种酶②裂解红细胞③消化卵黄囊生物学特性革兰阴性杆菌菌体呈线状无芽胞，无荚膜，有端鞭毛或侧鞭毛严格需氧触酶阳性可液化明胶不分解糖类部份菌株氧化酶阳性微生物检验

临床标本：痰、气管分泌物、胸水和血液为主。病理组织标本：必须制成悬液，再进行涂片和分离培养。环境污染标本：应先浓缩再接种。微生物检验分离培养：营养要求苛刻，生长缓慢生长温度为35℃最适pH6.7~7.0初次分离必须采用(BCYE)3~5天可形成1~2mm直径的光泽菌落核酸检测：是快速特异的方法，采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断抗体检测：是检测军团菌感染临床常用手段，常采用方法：IFA、MAA、TAT、ELISA法等军团菌感染诊断试验试验敏感性(%)特异性(%)评注培养70100参考方法直接免疫荧光25～70>95不推荐常规应用间接免疫荧光70～90>99只用于嗜肺军团菌血清群1酶标记免疫70～90>99乳胶凝集55～9085～99血清学（间接免疫荧光）70～80>95辅助培养

非发酵菌嗜麦芽窄食单胞菌葡萄糖产酸无色杆菌属土壤杆菌属假单胞菌属动力+OXOX－不动杆菌属+葡萄糖产酸黄色素摩拉氏菌属黄杆菌属－－－++端鞭毛－+－++产碱杆菌属尿素－+常见不发酵菌的鉴定双岐索引42℃生长明胶液化鞭毛++极单鞭毛···铜绿假单胞菌-+极多鞭毛···荧光假单胞菌--极多鞭毛···恶臭假单胞菌OF试验：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+氮气：+医院环境及用品、临床标本分离培养基涂片检查肉汤培养基血琼脂平板SS、麦康凯琼脂平板挑选可疑菌落（37℃培养18－24h观察有无色素产生，色素鉴别接种金氏A、B培养基）无色素菌株-42℃+绿脓素+绿脓菌荧光素铜绿假单胞菌假单胞菌鉴定程序1.肉浸汤2.胰化酪蛋白大豆肉汤37℃培养18－24h挑选菌落鉴定分型血清学噬菌体绿脓素初步鉴定菌落特征、色素、绿脓