原核表达系统课件

原核表达系统原核表达系统分类分类方式分类表达调控方式组成型，诱导型表达产物定位分泌型，不分泌型（细胞内、细胞膜、周质空间）产物纯化方式是否融合蛋白、是否一步亲和纯化产物溶解状况可溶、包含体、分泌型

GeneCompanyLimited基因有限公司*基因功能研究*重组蛋白特性研究*重组蛋白制备/制药主要用途

GeneCompanyLimited基因有限公司内含肽（Intein)内含肽是一种蛋白剪切元件（Proteinsplicingelement),是一些读框区中打断宿主基因编码区的序列。与内含子(Intron)不同的是，它们是在翻译后通过自身催化的蛋白剪切机制从蛋白前体中被剪切的。InBase(TheInteinDatabase)NEB’swebsite:<>TechnicalResourcesectionIMPACT-CN系统特点*

操作灵活——目的蛋白可在C端或N端与标记融合*目的蛋白产物序列不变*一步亲和纯化——无需另加蛋白酶除亲和标记*严谨的转录控制*目的蛋白能够进行C端标记独家的Intein介导的肽连接技术（IPL）IMPACT-CN系统流程IMPACT-TWIN系统流程

GeneCompanyLimited基因有限公司Proteincyclization

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GeneCompanyLimited基因有限公司NEB公司的IMPACTTM系统载体选择A1:未诱导细胞A2:诱导细胞B1:直链淀粉柱第一次纯化B2:FactorXa处理后B3:直链淀粉柱第二次纯化pMAL-C2:无信号顺序，融合蛋白产物定位于细胞质中pMAL-P2:含信号顺序，融合蛋白分泌表达于细胞周质载体选择PROBacterialExpressionSystem-----CLONTECH-----

GeneCompanyLimited基因有限公司PROBacterialExpressionSystemSimultaneous,independentexpressionoftwoproteinsThepPROTet.E332-lacZandpPROLar.A222-LucControlVectorsweresimultaneouslypropagatedinDH5αPRO-----CLONTECH-----

GeneCompanyLimited基因有限公司HATProteinExpression&PurificationSystem-----CLONTECH-----

GeneCompanyLimited基因有限公司特点*

可在中性pH条件下纯化蛋白

有效去除杂质*纯化可采用变性或非变性条件

降低蛋白酶活性，提高蛋白稳定性*提供纯化的专用树脂：TALON®IMAC

钴离子高度专一地亲和HAT和其它6×His蛋白，且洗脱条件温和，保证蛋白完整性*pHAT-GFPuv载体还带有荧光标记

极大的方便了表达产物的检测、定位及纯化QIAexpress以6×His标记和Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统特点*

表达量高

表达产物可占总蛋白的50%*严谨调控

IPTG诱导的T5启动子，可表达有毒蛋白*基因克隆灵活：

可选择N-端或C-端融合标记

可选择一端或两端6×His标记*纯化方便：一步纯化

可选择变性或不变性条件可选择多种灵敏的检测方法

GeneCompanyLimited基因有限公司QIAexpress以6×His标记和Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统

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