肿瘤超早期筛查在体检中应用10.6

癌症分子解析preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用案例分享总结主要内容第一页，共58页。恶性肿瘤现状恶性肿瘤已成为人类的“头号杀手”。全球每年新发肿瘤>1400万人，死亡约820万人。预计2025年，因人口增加和老龄化等因素，每年新增超2000万病例。“2012年中国肿瘤登记年报”数据表明，中国每年新发肿瘤约310万人，死亡270万人（右上图）。近60年来癌症致死率没有明显下降（右下图）。第二页，共58页。世卫组织（WHO）：早发现早诊断早治疗“三早”是关键，“早发现”是根本!

目前还无法攻克癌症（尤其是中晚期）；

癌症可防、可治：

癌前阶段：可实现近100%预防

早期癌症：可以实现80%治愈率晚期癌症：仅30%人活过5年。按照平均寿命74岁计算，人一生中患癌几率是22%。从年龄看，45岁以后发病率上升明显，应在40岁开始重视针对肿瘤的专项检查。2014世界癌症报告“抗击癌症，重在预防”第三页，共58页。癌症的分子解析第四页，共58页。ICGC：癌症基因组学研究国际癌症基因组联盟(InternationalCancerGenomeConsortium，ICGC)2014年2月4日公布超过1万个癌症基因组的数据。

2013年12月5日ICGC宣布：在原来白血病、膀胱癌、胃癌的基础上，中国又发起针对肠癌、食道癌、肝癌的驱动基因检测项目。

“眼下癌症诊治急需新的途径。如果能更好地从基因组来了解癌症，那么将更有利于癌症的预防和控制。"

——TomHudson安大略癌症研究所（OICR）所长、ICGC创始人之一第五页，共58页。致癌突变（oncogenicmutations）到肿瘤形成需要10-20年；期间，涉及多基因的异常发生，具有早期性和特异性：（早期性：分子异常是癌症发生的早期事件；特异性：分子异常是癌症发生的特有标记）癌变的分子事件AlfredG.Knudson,NatureRev.Cancer,

1,157-162(2001)CarloM.Croce,N.Engl.J.Med.

358,502-511(2008)第六页，共58页。第七页，共58页。原癌基因（Proto-oncogene）原癌基因是是细胞内与细胞增殖相关的高度保守的基因。原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时（此时转化为癌基因），使细胞过度增殖。第八页，共58页。抑癌基因（TumorSuppressor）抑癌基因一般调控DNA的修复和细胞凋亡。在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖作用。抑癌基因突变能导致活性降低或消失，从而减弱甚至消除抑癌作用。第九页，共58页。Sanger研究所：Cosmic数据库EmerginglandscapeofoncogenicsignaturesacrosshumancancersNatureGenetics45,1127–1133(2013)肠癌中基因异常发生率GaoH.etal,CancerRes.,54,4342-4346(1994)MorganC.etal,Br.J.Cancer,89,,1314-1319(2003)第十页，共58页。

preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用第十一页，共58页。传统检测突变检测癌症的“冰山学说”早期癌症几乎没有症状，极其容易被传统检测所忽视，一旦检出，则大部分为中晚期。preMiD超早期防癌检测，提前约3年预防发现潜伏体内的癌症或癌前病变。preMiD®超早期防癌检测，提前临床症状3-5年预警！第十二页，共58页。突变preMiD®技术检测的是来自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。第十三页，共58页。基因突变类型如下：第十四页，共58页。血液循环肿瘤DNA（ctDNA）来源NatRevCancer.2011Jun;11(6):426-37ctDNA由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统cfDNA的长度一般为100-500碱基，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。

“ctDNA是最有希望发现早期癌症”

——美国约翰霍普金斯大学LuisDiaz博士Free-floatingDNAfromtumorcouldprovideearlywarning！——USAtoday第十五页，共58页。分子癌变阶段（8-10年）细胞癌变阶段（3-5年）细胞簇形成组织形成早癌（1-3年）中晚期癌（？）1.不死2.无限增殖3.表型正常1.逃避免疫监视2.形成新血管3.异性增生常规手段可以检测preMiD可以第十六页，共58页。血浆突变检测技术-preMiD挑战血浆游离DNA含量极低突变DNA占比低于0.1%血浆成分复杂某些屏障存在………………应对preMiD检测基于PCR，扩增DNA融合Blocker、偏向扩增及熔点分析，极大提高灵敏度纳米技术提高核酸萃取效率新技术平台的融入第十七页，共58页。preMiD®

=Blocker+ASA+MCA突变偏向扩增系统（ASA）PCR引物的3'端位必须和突变扩增子匹配，而野生不匹配采用特异探针，实时PCR反应熔解曲线分析（MeltingCurveAnalysis）荧光vs温度作图得到DNA熔解曲线DNA溶解曲线是DNA序列的“指纹”核酸blocker阻滞野生扩增设计野生匹配blocker（含PNA修饰）阻滞对野生片段扩增三种已有技术的有机结合成preMiD，灵敏度达到0.01%，特异性近100%。第十八页，共58页。美国斯坦福癌症研究院近30年调查研究发现：癌前阶段，癌症是可逆性“工程”。消除突变，抑制癌变第十九页，共58页。正常DNADNA突变（肿瘤驱动基因）DNA修复抑癌基因诱导凋亡免疫监视失败癌

干预（突变逆转）第二十页，共58页。早发现与早预防突变筛查免疫力远离致癌物干预第二十一页，共58页。突变定量分析1.对于有基因突变的受检者，同时加做突变定量值，便于后期干预有效性的对比；2.随着样本量的增加，跟踪后续发展变化，将给出突变风险提示。突变值第二十二页，共58页。QRAM-qPCR相对定量检测肿瘤特异突变位点在血浆中含量在干预前后的变化，判断效果。干预有效性判断

主要用途：

1.直观反应干预或治疗方案的有效性，避免无效治疗。 2.评估手术后患者基本状态，如体内有无残留或转移。 3.判断有无复发。第二十三页，共58页。第二十四页，共58页。第二十五页，共58页。第二十六页，共58页。第二十七页，共58页。第二十八页，共58页。preMiD专业性

preMiD®德国标准生产质控体系国际公认检测内容COSMIC数据库，包含突变基因及位点信息，属于国际最权威机构最新研究成果。国家批准专有检测试剂美国Roche检测仪器注册号:(进)字2009第3402689号第二十九页，共58页。preMiD®血浆突变技术验证：

NSCLC组织和血浆中EGFR突变一致性研究试验单位：北京协和医院、浙江大学附属第一医院、江苏省肿瘤医院、青岛大学附属医院

Sanger测序1212例非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR突变；

preMiD®法检测对应1212例血浆EGFR突变。总体结果：阳性符合率为80.49%，阴性符合率为94.66%，总符合率为90.35%

（唯一完成临床试验研究，血浆-组织突变一致性最高的结果）（已完成CFDA批准临床实验，2011年12月28号-2013年12月28号）第三十页，共58页。中国唯一入选国际肿瘤学术大会ASCO会议的主讲报告第三十一页，共58页。中国医师协会preMiD项目专家论证会第三十二页，共58页。ctDNA在国际上的应用NDRG4,BMP3NDRG4,BMP3,KRAS总灵敏度：92%sensitivity早期肠癌灵敏度：94%特异性：87%ColonGuard（EXACT）第三十三页，共58页。ColonVantage(QUEST)ColoVantage检测血浆中SEPTIN9的甲基化状态，达到检测和预警结直肠癌的目的。ColoVantage是一种无创的检测方法灵敏度达到70%特异性达到89%适用于各个分期的结直肠癌第三十四页，共58页。ctDNA在甲状腺癌检测中的应用基因检测对甲状腺肿瘤诊断的准确率在80%以上突变检测能够应对病理检测不能确定的情况NikiforovYEetal,JClinEndocrinolMetab.2011Nov;96(11):3390-7第三十五页，共58页。案例分享第三十六页，共58页。preMiD检测：FLT3突变案例一：FLT3基因突变，2年半后诊断大肠癌中晚期个人不相信，不愿面对，没有采取必要干预措施第三十七页，共58页。案例二：KRAS突变检测者：男性，35岁，重庆人家族史：其父患肺癌进行preMiD检测：KRAS基因突变第三十八页，共58页。KRAS突变报告解读：结合健康问卷及专家咨询其父患肺癌作息紊乱干咳、胸闷近期没有体检资料结合该情况给出建议：进行胸部增强CT检查，判断突变在哪个阶段（临床前期或临床阶段）第三十九页，共58页。KRAS突变2014年5月8日右肺下叶斜裂旁小结节影肝左叶多发小囊肿第四十页，共58页。KRAS突变—干预方案匹多莫德口服液服用方法：1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用）3个月为一周期第四十一页，共58页。KRAS突变--跟踪随访2014年9月9日胸部CT增强未发现肿瘤第四十二页，共58页。干预后4个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果，基因仍有突变，并对再次突变情况进行与第一次的定量值分析，突变较之前下降。KRAS突变--复查及定量第四十三页，共58页。案例三：THR-α基因突变检测者：男性，41岁，南京人进行preMiD检测：THR-α基因突变第四十四页，共58页。THR-α基因突变报告解读：结合健康专家咨询作息紊乱20年吸烟史，每日1包近期没有体检资料第四十五页，共58页。THR-α基因突变右颈部、颌下多发小淋巴结，部分淋巴结FDG代谢增高；甲状腺瘤可能第四十六页，共58页。THR-α基因突变--干预方案胸腺肽a1方法：1支（1.6mg）/次，1次/周，皮下注射3个月为一周期第四十七页，共58页。干预后3个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果：突变消失。THR-α基因突变--干预方案第四十八页，共58页。病理：肺腺癌案例四：EGFR突变确诊6mm早癌检测者男性，62岁，无锡人士，某医院院长，体检发现肺内有6mm孤立影，不能确定其性质，经preMiD®检测发现EGFR突变。该检测者在上海肺科医院行胸腔镜手术，取出病理为肺腺癌。第四十九页，共58页。案例五：FHIT突变确诊胃癌晚期检测者男性，62岁，机关干部，既往慢性胃病史，平时喜食蒜泥等刺激食物。经preMiD®检测：FHIT突变，后追加蛋白标志物FMD1值异常升高。建议进一步胃镜检查，结果为低分化腺癌晚期，对化疗均不敏感。病理：低分化腺癌第五十页，共58页。案例六：宫颈癌复发监控案例检测者女性，29岁，2012年12月确诊宫颈癌，术后、放、化疗后。2013年5月经perMiD检测发现FHIT-exon8位点和HLA-A-c.835C>T位点有突变，确诊为术后复发。第五十一页，共58页。案例七：鉴别：前列腺癌or前列腺增生（BPH）？PSA>700,前列腺癌？！PSA=25，BPH？第五十二页，共58页。总结第五十三页，共58页。preMiD检测原理突变preMiD