1简述生物分开过程的特点

本文格式为Word版，下载可任意编辑——1简述生物分开过程的特点简答题

1.简述生物分开过程的特点。

答：（1）产品丰富：产品的多样性导致分开方法的多样性；（2）绝大多数生物分开方法来源于化学分开；（3）生物分开一般比化工分开难度大：※成分繁杂；

※悬液中的目标产物浓度低；※生物活性条件相对温柔；※生物产品要求高质量；※获得高纯度的枯燥产品；※卫生。

因此，生物分开过程往往成本很高，在某些产品的生产过程中，分开成本可能占到总成本的80％以上。

（补充：常无固定操作方法可循；生物材料组成十分繁杂；分开操作步骤多，不易获得高收率；培养液（或发酵液）中所含目的物浓度很低，而杂质含量却很高；分开进程必需保护化合物的生理活性；生物活性成分开开生物体后，易变性、破坏；基因工程产品，一般要求在密封环境下操作。）

2.简述超临界流体萃取的原理及其特点。

答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。

利用超临界流体的特别性质，使其在超临界状态下，与待分开的物料接触，萃取出目的产物，然后通过降压或升温的方法，使萃取物得到分开。

其特点是密度接近液体，萃取能力强；粘度接近气体，传质性能好；且安全、无毒、产品分开简单，但设备投资较大。

3.常用的蛋白质沉淀方法有哪些？简述其作用机理。

（１）有机溶剂法：破坏蛋白质分子的水化层，使之聚集成更大的分子团而沉淀。

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（２）盐析：破坏蛋白质分子水化层，电荷中和，使之聚集成更大的分子团。（３）化学沉淀法：通过化学试剂与目的产物形成新的化合物，改变溶解度而沉淀。4.何谓ELISA？简述其分析过程。

答：ELISA即酶联免疫吸附测定，是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用结合起来，灵敏性很高的一种新型的免疫酶测定技术。

ELISA过程是在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板中进行的，每参与一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。抗原吸附在固相载体上被称为包被，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成“抗原-待测抗体-酶标记抗体〞的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，待测抗体的定量与有色物质产生成正比，因此借助分光分度仪计测定其吸光度，可计算出抗体的量。

5.结合SDS电泳的分开原理说明未知蛋白质分子量的测定方法。

答:SDS是凝胶电泳的一种，其分开原理是基于不同分子量的蛋白质（亚基）在电场中的迁移率不同，因此利用该技术测定未知蛋白质（亚基）的分子量是十分便利的，具体的方法是利用标准分子量MARK，与样品一同电泳，染色后根据标准分子MARK中已知分子量蛋白质的迁移率与其分子量的对数值作图，可得一标准曲线并拟合方程，再结合未知蛋白质的迁移率即可计算得到大致的分子量。

6.常用的层析方法有哪些？请表达其分开原理。⑴离子交换层析（IEC）

基本原理：通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分开的目的。⑵疏水色谱（HIC）

基本原理：主要是利用蛋白质分子表面上的疏水区域和介质中的疏水基团之间的相互作用，无机盐的存在能使相互作用力加强。

⑶亲和层析（AC）

基本原理：是利用固定化配基与目的蛋白质之间特异的生物亲和力进行吸附，如抗体与抗原、受体与激素、酶与底物之间的作用。

⑷凝胶过滤

基本原理：是以具有大小一定的多孔性凝胶作为分开介质，小分子能进入孔内，在柱中缓慢移动，而大分子不能进入孔内，快速移动，利用这种移动区别可使大分子与小分子分开。

7.何谓萃取的分派系数？其影响因素有哪些？

分派系数：在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分派时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分派系数。

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乳化作用。

pH值：影响弱酸或弱碱药物的分派系数和药物的稳定性。

温度和时间：药物的稳定性、分派系数。

盐析作用：盐析剂与水分子结合，游离水分子减少，药物在水相中溶解度降低，易转入有机相；降低有机溶剂在水中的溶解度；萃余相比重增大，利于分相。

溶剂的种类和用量及萃取方式。

基因工程

001基因工程操作的三大基本元件是I供体II受体III载体IV抗体V配体ＡI+II+IIIＢI+III+IVＣII+III+IVＤII+IV+VＥIII+IV+V

002根据当今生命科学理论，基因工程的用途是

I分开纯化基因II大量生产生物分子III构建新型物种IV提高基因重组效率ＡI+II+IIIＢI+II+IVＣI+III+IVＤII+III+IVＥI+II+III+IV

003基因工程的三大理论基石是Ａ经典遗传学、细胞生物学、微生物学Ｂ分子遗传学、分子生物学、生化工程学Ｃ动物学、植物学、微生物学

Ｄ生物化学、生化工程学、化学工程学Ｅ生理学、仿生学、免疫学

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004根据基因工程的定义，以下各名词中不能替代基因工程的是Ａ基因诱变Ｂ分子克隆ＣDNA重组Ｄ遗传工程Ｅ基因无性繁殖

005基因工程的单元操作顺序是Ａ增，转，检，切，接Ｂ切，接，转，增，检Ｃ接，转，增，检，切Ｄ检，切，接，增，转Ｅ切，接，增，转，检006生物工程的上游技术是Ａ基因工程及分开工程Ｂ基因工程及发酵工程Ｃ基因工程及酶工程Ｄ基因工程及细胞工程Ｅ基因工程及蛋白质工程

007基因工程作为一种技术诞生于Ａ上世纪50年代初Ｂ上世纪60年代初Ｃ上世纪70年代初Ｄ上世纪80年代初Ｅ上世纪90年代初

008利用基因工程扩增基因是依据Ａ基因定向重排Ｂ加强启动基因Ｃ加强子重组ＤSD顺序的存在Ｅ载体自主复制

009第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是Ａ生长激素（Growthhormone）Ｂ胰岛素（Insulin）Ｃ干扰素（Interferon）

Ｄ白细胞间溶菌素（Interleukin）Ｅ生长激素释放抑制素（Somatostatin）010以下有关基因的表达，错误的是Ａ蛋白质是基因表达的唯一产物Ｂ基因是DNA链上具有编码功能的片段Ｃ基因也可以是RNA

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Ｄ基因突变不一定导致其表达产物改变结构Ｅ基因具有方向性

011限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是Ａ修复自身的遗传缺陷Ｂ促进自身的基因重组Ｃ加强自身的核酸代谢Ｄ提高自身的防卫能力Ｅ补充自身的核苷酸消耗

012自然PstI限制性内切酶的来源是ＡBacillusamyloliquefaciensＢEscherichiacoliＣHaemophilusinfluenzaeＤProvidenciastuartiiＥStreptomyceslividans

013根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成Ａ2大类Ｂ3大类Ｃ4大类Ｄ5大类Ｅ6大类

014以下五个DNA片段中含有回文结构的是ＡGAAACTGCTTTGACＢGAAACTGGAAACTGＣGAAACTGGTCAAAGＤGAAACTGCAGTTTCＥGAAACTGCAGAAAG

015以下五个DNA片段，最可能含有SstI酶切位点的是ＡGGAGAGCTCTＢGAGCACATCTＣCCCTGTGGGAＤATCCTACATGＥAACCTTGGAA

016从dam型大肠杆菌受体细胞中分开出的质粒DNA能被BamHI、BglII和Sau3AI降解（假使上述酶切位点存在），但对BclI和MboI不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是

ＡDam甲基化酶使BclI和MboI识别序列甲基化，但对BamHI、BglII以及Sau3AI不起作用

ＢDam甲基化酶既可使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，也可使胞嘧啶C5甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同

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ＣDam甲基化酶能使所有5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同

ＤDam甲基化酶的作用位点在5'-GATC-3'序列内部，但该酶与DNA靶序列的结合还依靠于5'-GATC-3'序列左右两端的其它碱基组成

ＥDam甲基化酶既能使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用

017T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是Ａ2'-OH和5'-PＢ2'-OH和3'-PＣ3'-OH和2'-PＤ3'-OH和5'-PＥ5'-OH和3'-P

018以下DNA片段中，通过加热并用S1核酸酶处理即可使DNA断裂的是ＡCCGATCAAGCTGTTCCCGGAGGTGCCCGCCCTAAGGAGACTCGGTGGCTAGTTCGACAAGGGCCTCCACGGGCGGGATTCCTCTGAGCCAＢAAGGTCGGCGGGTTCCCACCCGTGAGCATCGGGCCTTGCCGTTATTTCCAGCCGCCCAAGGGTGGGCACTCGTAGCCCGGAACGGCAATAＣTATGATCATCCGCCGGGTGTCACTGATCCATGGCCCAAGGGTTTCATACTAGTAGGCGGCCCACAGTGACTAGGTACCGGGTTCCCAAAGＤGAGGATCCCTTTGCGATTCACCTAGGGTATCTCTGTAGGGCCTAGCTCCTAGGGAAACGCTAAGTGGATCCCATAGAGACATCCCGGATCＥGCATCGGCCCCCGGTAAATATTCTCGGGGCGGGTAGCCGCCTAGTCGTAGCCGGGGGCCATTTATAAGAGCCCCGCCCATCGGCGGATCA019Bal31工具酶是一种Ａ只切双链DNA的外切酶Ｂ双链单链DNA均切的外切酶Ｃ双链单链DNA和RNA均切的外切酶Ｄ双链单链RNA均切的外切酶Ｅ只切双链RNA的外切酶

020以下有关连接反应的表达，错误的是Ａ连接反应的最正确温度为37℃

Ｂ连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%Ｃ连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMＤ连接酶寻常应过量2-5倍ＥDTT可以维持连接酶的结构

021某一质粒的多克隆位点上含有以下单一限制性内切酶识别序列：AluI、BglII、ClaI、DpnI、EcoRV，若将含有EcoRI粘性末端的外源基因克隆在这个质粒上，并保存EcoRI酶切位点，则适合的插入位点是ＡAluIＢBglIIＣClaIＤDpnIＥEcoRV

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022若将含有5'末端4碱基突出的外源DNA片段插入到含有3'末端4碱基突出的载体质粒上，又必需保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是IT4-DNA聚合酶IIKlenowIIIT4-DNA连接酶IV碱性磷酸单酯酶ＡIIIＢI+IIIＣII+IIIＤI+II+IIIＥI+II+III+IV

023若载体DNA用M酶切开，则以下五种带有N酶粘性末端的外源DNA片段中，能直接与载体拼接的是MNＡA/AGCTTT/TCGAAＢC/CATGGACATG/TＣCCC/GGGG/GGCCCＤG/GATCCA/GATCTＥGAGCT/CG/AGCTC

024以下各组分别用两种不同的限制性内切酶切开的DNA片段经补平并连接后，其重组分子内能产生ClaI限制性内切酶酶切位点的是ＡBglII/BamHIＢHindIII/BamHIＣMluI/BamHIＤSpeI/BamHIＥXbaI/BamHI

025质粒DNA和外源DNA各用两种限制性内切酶切开，经连接转化后获得重组子。以下各组重组子中有可能含有两种相反基因极性的是ＡApaI/ClaIＢBamHI/BglIIＣBclI/SmaIＤHindIII/KpnIＥSphI/PstI

026提高重组率的方法包括

I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间ＡI+IIＢI+II+IIIＣI+III+IVＤII+III+IVＥI+II+III+IV

027载体的功能是

I运输外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力ＡIＢI+II

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ＣI+IIIＤII+IIIＥI+II+III

028以下有关质粒分子生物学的表达，错误的是Ａ质粒是共价环状的双链DNA分子

Ｂ自然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列Ｃ质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制Ｄ松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增Ｅ质粒并非其宿主细胞生长所必需

029带有多个不同种复制起始区的质粒是Ａ穿梭质粒Ｂ表达质粒Ｃ探针质粒Ｄ整合质粒Ｅ多拷贝质粒

030多聚接头（Polylinker）指的是

Ａ含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工DNA片段Ｂ含有多种复制起始区的人工DNA片段Ｃ含有多种SD顺序的人工DNA片段Ｄ含有多种启动基因的人工DNA片段Ｅ含有多种特定密码子的人工DNA片段

031l-DNA体外包装的上下限是自然l-DNA长度的Ａ25-50%Ｂ50-100%Ｃ75-100%Ｄ75-105%Ｅ100-125%

032l-DNA体外包装系统寻常分成分开的两部分，其原因是Ａ安全

Ｂ包装蛋白含量太大难于溶解Ｃ便于操作Ｄ提高转染率

Ｅ包装蛋白组份的冷冻保藏条件不同033琥珀突变是指Ａ起始密码的突变Ｂ终止密码子的突变Ｃ精氨酸密码子的突变Ｄ谷酰胺密码子的突变Ｅ丙氨酸密码子的突变

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034考斯质粒（cosmid）是一种Ａ自然质粒载体

Ｂ由l-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体Ｃ能裂解受体细胞的烈性载体Ｄ具有溶原性质的载体

Ｅ能在受体细胞内复制并包装的载体

035以下各常用载体的装载量排列顺序，正确的是ＡCosmid>l-DNA>PlasmidＢl-DNA>Cosmid>PlasmidＣPlasmid>l-DNA>CosmidＤCosmid>Plasmid>l-DNAＥl-DNA>Plasmid>Cosmid

036目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是Ａ质粒DNAＢ噬菌体DNAＣ病毒DNAＤ线粒体DNAＥ叶绿体DNA

037以下各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是Ａ大肠杆菌－繁殖迅速Ｂ枯草杆菌－分泌机制健全Ｃ链霉菌－遗传稳定

Ｄ酵母菌－表达产物具有真核性

Ｅ动物细胞－具有完善的蛋白质糖基化功能038基因工程的受体细胞必需具备I限制性缺陷II营养缺陷III感染寄生缺陷ＡIＢI+IIＣI+IIIＤII+IIIＥI+II+III

039促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是由于

Ａ人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用Ｂ人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定

Ｃ大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活Ｄ人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感Ｅ大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化040原生质体转化方法不大适用于Ａ大肠杆菌Ｂ枯草杆菌

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Ｃ酵母菌Ｄ链霉菌Ｅ植物细胞

041某一重组转化系统的重组率为10%，转化率为107/mgDNA，经切接单元操作后的载体转化率为原来的1%。若欲获得10,000个重组克隆，需在重组试验中投入载体Ａ0.1mgＢ0.5mgＣ1.0mgＤ2.0mgＥ10mg

042克隆菌扩增的目的是

I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因ＡIＢI+IIＣI+IIIＤII+IIIＥI+II+III

043载体质粒pBR325共有三个选择性标记：Apr、Tcr、Cmr。它们分别含有一个单一酶切位点：PstI、SphI和EcoRI。若将一外源基因取代此载体上不含Cmr标记基因的PstI-SphI限制性DNA片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是ＡApＢTcＣCmＤAp+TcＥAp+Cm

044经抗药性遗传标记法筛选出的转化体中，往往会出现无载体或无重组DNA分子的菌落，其原因很可能是Ａ标记基因发生突变Ｂ载体或重组分子不稳定

Ｃ载体或重组分子整合入受体染色体中Ｄ载体空载

Ｅ筛选药物诱导受体细胞产生抗性

045若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中参与Ａ半乳糖Ｂ葡萄糖Ｃ蔗糖

Ｄ5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）Ｅ异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）

046以下载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是ＡtsrＢApr

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076加强基因转录的元件是Ａ密码子Ｂ复制子Ｃ启动子Ｄ内含子Ｅ外显子

077启动子的特征之一是ＡGC富积区ＢTATABoxＣ转录起始位点Ｄ长度平均1kbＥ含有某些稀有碱基

078影响启动子功能的因素包括

I本身长度II与基因之间的距离III本身碱基排列顺序ＡIＢIIＣIIIＤI+IIＥII+III

079pIJ486是链霉菌的启动子探针质粒（如下图所示），其中neo和tsr分别为新霉素和硫链丝菌素的抗性基因。为了确凿克隆和筛选具有启动子活性的外源DNA片段，最为理想的插入位点应是

ＡApaIＢBclIＣEcoRVＤKpnIＥPstI

080以下基因调控元件中属于反式调控元件的是Ａ阻遏蛋白Ｂ启动子Ｃ操作子

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Ｄ终止子Ｅ加强子

081加强mRNA翻译的元件是Ａ启动子Ｂ复制起始区Ｃ加强子Ｄ回文结构ＥSD顺序

082以下mRNA5'端序列中，具有典型的原核生物Shine-Dalgarno序列特征的是Ａ5'……UAUAAG……3'Ｂ5'……AGGAGG……3'Ｃ5'……AUAUCU……3'Ｄ5'……CCUCCA……3'Ｅ5'……GGCCCG……3'

083以下亮氨酸密码子在大肠杆菌蛋白质结构基因中出现频率最低的是ＡCUAＢCUCＣCUGＤUUAＥUUG

084下面给出的DNA顺序是某链霉菌一个蛋白质结构基因的中间片段，其基因方向及阅读框架是5'...GCAGGGACTCGGAAGGCACCGACATGTCCTGC...3'...123456789...

Ａ从右至左，...876，543...Ｂ从右至左，...987，654...Ｃ从左至右，...123，456...Ｄ从左至右，...234，567...Ｅ从左至右，...345，678...

085为了使人类有经济价值的基因在大肠杆菌中高效表达，有时可以采用同步克隆表达受体菌tRNA基因的方法，其机理是Ａ加强基因的转录

Ｂ改正受体菌密码子的偏爱性Ｃ促进氨酰基tRNA合成酶的表达Ｄ稳定mRNA在核糖体上的定位Ｅ启动mRNA的翻译

086高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，原因是Ａ表达产物浓度过高Ｂ表达产物不能正确折叠Ｃ表达产物不含糖基侧链Ｄ表达产物难以形成二硫键

Ｅ表达产物中极性氨基酸残基比例下降

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087以下五种重组DNA分子中，目的基因有可能获得高效表达的是启动子SD序列目的基因终止子

Ａ

Ｂ

Ｃ

Ｄ

Ｅ

088包涵体是一种

Ａ受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒Ｂ大肠杆菌的亚细胞结构

Ｃ噬菌体或病毒DNA的体外包装颗粒Ｄ用于转化动物细胞的脂质体Ｅ外源基因表达产物的混合物

089在基因工程中，外源基因表达产物的重折叠寻常是指Ａ氢键的形成Ｂ离子键的形成Ｃ疏水键的形成Ｄ酰胺键的形成Ｅ二硫键的形成

090Chaperone协助蛋白质形成正确空间构象的机制是Ａ结合折叠不正确的蛋白分子以阻断蛋白质的错误折叠途径Ｂ加强蛋白分子内容二硫键的正确形成Ｃ促进肽基脯氨酸顺式键与反式键之间的转换Ｄ蛋白质正确构象与错误构象之间的平衡Ｅ催化错误构象蛋白质的降解

091某一表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中高效表达的基因A，若将外源基因B插入基因A的3'末端，并维持基因B的阅读框架不变，使两者在受体细胞中产生融合蛋白，则正确的重组策略是

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ＡA基因用BamHI切开，B基因用BamHI切开，连接ＢA基因用BglII切开，B基因用BamHI切开，连接ＣA基因用EcoRV切开，B基因用SmaI切开，连接ＤA基因用PvuII切开，B基因用SmaI切开，连接ＥA基因用SmaI切开，B基因用SmaI切开，连接

092外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是

I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III表达产物易于亲和层析分开ＡIIIＢI+IIＣI+IIIＤII+IIIＥI+II+III

093有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是Ａ核糖体Ｂ信号肽Ｃ终止子Ｄ亲水性氨基酸Ｅ多聚腺苷酸

094以下蛋白质N末端序列中，符合分泌型蛋白结构特征的是ＡMLSLRQSIRFFKPATRTLCSSRYLLＢMLVTAGVAAA

ＣMKRKHAIGPLLLAGLLAGVVAVLPＤMFSNLSKRWAQRTLSKSFYSTANAＥMVHAPNQSSTTWYHSCACGLIYWT

095一般而言，分子量小的蛋白质更不稳定，其原因是Ａ分子量越小，形成良好空间构象的可能性越低Ｂ分子量越小，表达效率越高Ｃ分子量越小，分泌效果越佳

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Ｄ分子量越小，形成多聚体的概率越大Ｅ分子量越小，越简单被加工修饰

096越来越多的研究结果说明，与抗菌素生