




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
免疫比浊法检测免疫球蛋白免疫学系现在是1页\一共有23页\编辑于星期三实验原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。现在是2页\一共有23页\编辑于星期三免疫比浊法分类当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱透射比浊法:在光源的光路方向(00)测量透射光强度和被检测溶液微粒浓度关系的方法。散射比浊法:在光源的光路方向(50-960)角的方向上测量透射光强度和被检测溶液中微粒浓度关系的方法。现在是3页\一共有23页\编辑于星期三
透射比浊法和散射比浊法光路检测器A检测器B
IC
I0
Iθ
Iθ透射比浊法散射比浊法现在是4页\一共有23页\编辑于星期三(一)基本原理是个极其简单的方法。在抗原过量情况下,与待测样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应,形成可溶性复合物,使反应介质的浊度发生改变。测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位(A)或OD值表示,A值反映了入射光和透射光的比率。待测物中Ig含量可通过标准曲线计算得出。待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比,而与透射光呈反比。反应在PEG的作用下,加速复合物的形成。
免疫透射比浊法现在是5页\一共有23页\编辑于星期三透射比浊法测定原理光源诱导剂现在是6页\一共有23页\编辑于星期三样品光电计滤光片光源透射比浊法测定原理现在是7页\一共有23页\编辑于星期三透射比浊法的缺陷:(1)溶液中存在的抗原-抗体复合物分子应足够大,分子太小则阻挡不了光线的通过。(2)溶液中的抗原-抗体复合物的数量要足够多。如果数量太小,溶液浊度变化太小,对光通量影响不大。(3)透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的,因此只能测定抗原-抗体反应的第二阶段,检测仍需抗原-抗体温育反应时间,检测时间较长。
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量
现在是8页\一共有23页\编辑于星期三
原理散射比浊法在入射光的一定角度检测粒子发出的散射光,散射光的强度与IC的含量呈正比。现在是9页\一共有23页\编辑于星期三散射比浊法测定原理增加散透率:660nm测定散射光聚集形成
诱导剂现在是10页\一共有23页\编辑于星期三散射光测定检测器(LED)光电计样品100%0%时间散射光强度现在是11页\一共有23页\编辑于星期三
速率散射比浊法
(一)基本原理
—
是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
—
所谓速率,是在单位时间内抗原抗体结合形成复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的速率及测定的散射信号连接在一起,即是动态的速率比浊分析。
—
当仪器测定到某一时间内形成速率下降时,即出现速率峰,该峰值的高低,即代表所测抗原的量。现在是12页\一共有23页\编辑于星期三CONCENTRATIONRATE在速率峰基础上完成的标准曲线现在是13页\一共有23页\编辑于星期三方法评价:
敏感度高快速(不必达平衡)抗原抗体结合的动态测定,理论上测定不受本底散射信号的影响可检测微量样品现在是14页\一共有23页\编辑于星期三原理2.终点散射比浊法让抗原抗体作用一定时间,使其反应达到平衡后,测定其IC形成的量。IC的浊度不再受时间的影响,但反应IC聚合产生絮状沉淀之前,进行浊度测定。现在是15页\一共有23页\编辑于星期三散射比浊法的缺陷(1)因为是一次性测定光吸收值,没有考虑每一个待测样本的吸收和散射效果,可测定结果不准确(2)测定的仍是抗原-抗体反应的第二阶段,不适合快速检测。(3)终点法存在反应本底,测定样本的含量越低本底比例越大,故在微量测定时,本底的干扰是影响准确测定的重要因素。
现在是16页\一共有23页\编辑于星期三影响免疫比浊测定的因素1、抗原抗体比例2、抗体的质量抗体的特异性、效价、亲和力3、反应的溶液4、增浊剂的使用现在是17页\一共有23页\编辑于星期三1、透射比浊操作简便,适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计,几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想,所需的抗血清量大,检测的周期较长。2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高,检测快速。其缺点是需特定的分析仪器,试剂价格高。透射比浊法和散射比浊法优缺点比较现在是18页\一共有23页\编辑于星期三免疫浊度法测定中应注意的问题
1、伪浊度的影响
伪浊度形成原因很复杂,主要是抗血清含有非特异性的交叉反应性杂抗体成分;增浊剂浓度和反应时间掌握不当;样品本身的浊度处理不当;试剂的污染和变质;器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。
2、非特异性散射光的影响
免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰,为避免这些非特异性光散射的影响,应用透射比浊法时需保证抗体组分在3%以下,散射比浊法需保证在0.5%以下。
现在是19页\一共有23页\编辑于星期三本实验中应用聚乙二醇的生理特性
聚乙二醇是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物,聚乙二醇即PEG具有高度的亲水性,在水溶液中有较大的水动力学体积,并且没有免疫原性。当藕联到药物分子或药物表面时,可以将其优良性质赋予修饰后的药物分子,改变它们在水溶液中的生物分配行为和溶解性,在其修饰的药物周围产生空间屏障,减少药物的酶解,避免在肾脏的代谢中很快消除,并使药物能被免疫系统的细胞识别。现在是20页\一共有23页\编辑于星期三材料1.免疫球蛋白试剂A,M,G2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品,蒸馏水3.微
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2024江苏无锡市锡州产城控股集团有限公司招聘录用笔试参考题库附带答案详解
- 2024四川绵阳市软件与数据智能军团招聘解决经理岗位测试笔试参考题库附带答案详解
- 2024年机械工程师考试迈向成功的关键及试题及答案
- 全国甘肃版信息技术六年级下册新授课 第13 课理解你的语言 教学设计
- 2023七年级数学上册 第3章 一元一次方程3.3 一元一次方程的解法第1课时 移项法解一元一次方程教学实录 (新版)湘教版
- 2024秋九年级历史上册 第一单元 跨入近代社会的门槛 第3课 剥夺王权保留王位的革命教学实录 北师大版
- 第4课 计算机的总管-操作系统 教学设计-2023-2024学年辽师大版(2015)初中信息技术七年级上册
- 《我们的班规我们订》(第二课时)教学设计四年级上册道德与法治第2课 统编版
- 2024年高中语文 第六单元14 促织 变形记(节选)教学实录 新人教版必修下册
- 认识百分数(教学设计)-2024-2025学年六年级上册数学冀教版
- 公路工程标准施工招标文件(2018年版)
- (正式版)SH∕T 3548-2024 石油化工涂料防腐蚀工程施工及验收规范
- 一年级语文部编版上册《ie üe er》课件
- 人民币教具正反面完美打印版
- 勤奋与懒惰小学心理健康课教案——告别懒惰.doc
- 消费者权益保护法培训课件
- 实现秸秆发酵饲料产业化--秸秆发酵饲料技术原理与应用示范
- 膜分离工程第二章:膜材料与制备
- KV电缆沟工程施工组织设计
- 《组织行为学》练习题库更新
- 被批评是奢侈的幸福
评论
0/150
提交评论