细胞化学染色检验

细胞学和化学结合的一门科学。以细胞形态学为基础，结合运用化学反应原理对细胞内的各种化学物质（包括酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核算等）作定性、定位、半定量分析的方法。

第一页，共42页。临床应用辅助判断急性白血病的临床类型。根据细胞化学染色结果不同，可推断细胞所属系列。辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。由于血细胞在病理情况下，其化学成分及含量发生变化，可以辅助疾病的诊断，如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。第二页，共42页。细胞染色的基本步骤

固定为了保持细胞结构和化学成分的不变，需要对细胞进行固定。分为物理法和化学法物理法：干燥和火焰固定化学法：蒸气固定和液体固定，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。第三页，共42页。有色沉淀反应通过不同化学反应，是被检测物质最终形成稳定的有色沉淀。1）偶氮偶联法：含苯酚的底物，在相应酶的作用下释放出萘酚，萘酚与重氮盐结合，偶氮偶联形成相应颜色的沉淀物。2）普鲁士蓝反应：细胞内、外的铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成如亚铁氰化钾蓝色沉淀。第四页，共42页。3）雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀物。第五页，共42页。复染目的在于使各种细胞能显示出来便于辨认。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显对比度既能使细胞结构显示又能清楚的看出细胞化学染色的结果。第六页，共42页。

铁染色ferricstain第七页，共42页。原理健康人骨髓中的铁主要存在于骨髓小粒和幼红细胞中。骨髓中的铁在酸性环境下与亚铁氰化钾作用，形成普鲁士蓝色的亚铁氢化铁沉淀，定位于含铁部位。第八页，共42页。

化学反应

铁+亚铁氰化钾亚铁氰化铁酸性环境

蓝色沉淀第九页，共42页。

细胞外铁

主要存在于骨髓小粒的巨噬细胞内，反映体内贮存铁。

分-、+、++、+++、++++五个等级。第十页，共42页。

细胞内铁

存在于中幼红细胞、晚幼红细胞、及红细胞中的铁（包括铁粒幼红细胞、铁粒红细胞）。

油镜下计数100个中幼红和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分数。第十一页，共42页。

铁粒幼细胞根据蓝色铁颗粒多少粗细分为：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。

环形铁粒幼细胞：胞质内蓝色颗粒5颗以上，围绕核周三分之一以上。

铁粒红细胞：红细胞内出现铁颗粒。第十二页，共42页。

参考范围细胞外铁：+~++细胞内铁：铁粒幼细胞阳性率在12%~44%。Ⅰ型为主，少数Ⅱ型。无环形铁粒幼及铁粒红细胞。第十三页，共42页。临床意义缺铁性贫血：细胞外铁阴性，细胞内铁阳性率下降或为零。经铁剂治疗后，其细胞内、外铁增多，因此铁染色可作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。第十四页，共42页。铁粒幼细胞贫血：铁粒幼红细胞增多，有时可见到铁粒红细胞，细胞外铁也常增多。因此铁染色可作为诊断本病的重要方法。第十五页，共42页。骨髓增生异常综合征：伴环形铁粒幼红细胞增多，其环形铁粒幼细胞大于有核细胞15%,细胞外铁也常增多。第十六页，共42页。非缺铁性贫血：溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血、多次输血后和白血病等，细胞外铁和内铁正常或增加。感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症、血色病等细胞外铁明显增加而铁粒幼细胞减少。第十七页，共42页。应用评价临床上应用最广泛的一种细胞化学反应。铁染色的结果一般是可信的，虽不如血清铁蛋白敏感，但不受多种病理因素影响，因此铁染色是反映机体储存铁的金标准。假阳性：骨髓涂片受试剂、玻片清洁度及操作过程等因素影响，造成细胞外铁和内铁假性增高或阴性患者假阳性。假阴性：标本凝块误认为骨髓小粒第十八页，共42页。

中性粒细胞碱性磷酸酶染色

neutrophilicalkalinephosphataseNAP第十九页，共42页。原理中性粒细胞碱性磷酸酶的染色方法有Gonmori钙-钴偶联法和kaplow偶氮偶联法。第二十页，共42页。Kaplow偶氮偶联法磷酸萘酚钠萘酚包浆中NAPPH9.6重氮盐不溶性紫黑色沉淀第二十一页，共42页。正常细胞染色反应NAP主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核细胞和分叶核细胞），故成熟中性粒细胞胞浆呈阳性，其他细胞基本阴性。第二十二页，共42页。结果判读

胞浆中有紫黑色颗粒结果为阳性，分为+，++，+++，++++，分别为1分、2分、3分、4分，100个细胞中阳性细胞的积分之和即为积分值。第二十三页，共42页。参考范围阳性率<40%,NAP积分值为30~130分。第二十四页，共42页。临床意义1、NAP积分增加：见于细菌性感染（类白血病反应）、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病（慢粒、骨髓纤维化、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症）、慢性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、雄激素治疗等。第二十五页，共42页。2.NAP积分下降：慢性粒细胞白血病慢性期、急性粒细胞白血病、阵发性随眠性血红蛋白尿、骨髓异常增生综合征、恶性组织细胞病。第二十六页，共42页。应用评价NAP主要用于慢性粒细胞白血病与类白血病反应、PNH与再障及急性白血病类型的鉴别。本实验影响因素较多，如试剂、生理性波动及试验人员及判断标准等，使结果相差较大，各单位应建立本实验室参考标准。第二十七页，共42页。过氧化物酶染色peroxidasePOX第二十八页，共42页。原理

血细胞中所含主要为髓过氧化物酶MPO，MPO是人类中性粒细胞含量最多的一种蛋白质。POX染色方法有多中：复方联苯胺法、二甲基联苯胺法、四甲基联苯胺法等。第二十九页，共42页。

二甲基联苯胺法：

过氧化氢新生态氧过氧化物酶二氨基联苯胺不溶性沉淀第三十页，共42页。正常细胞染色反应1.粒细胞系统分化差的原始粒细胞为阴性分化好的原始粒细胞至成熟粒细胞各阶段均呈阳性。阳性程度随细胞成熟增强。嗜酸性粒细胞阳性最强，嗜碱性粒细胞阴性。第三十一页，共42页。

2.单核细胞系统：阴性或弱阳性

3.其他细胞：淋巴、红系、巨核系均为阴性，浆细胞，组织细胞可阴性，可阳性。第三十二页，共42页。临床意义辅助诊断急性白血病的首选，主要用于鉴别急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病。第三十三页，共42页。急性淋巴细胞白血病：原始淋巴细胞及幼稚细胞均呈阴性，实际上急性淋巴细胞患者骨髓中可残留部分原始粒细胞，而出现阳性，故参考范围为阴性或阳性<3%第三十四页，共42页。急性粒细胞白血病：原始粒细胞阴性或阳性，常阳性，为+~++，阳性颗粒数较多，颗粒较粗大，急性早幼粒细胞白血病：早幼粒细胞呈强阳性，+++~++++急性单核细胞白血病：原始单核和幼稚单核细胞呈阴性或弱阳性，其阳性颗粒少而细小。第三十五页，共42页。急性红白血病：原始粒细胞呈阳性或阴性，原始单核细胞呈阴性或弱阳性，有核红细胞呈阴性中性成熟粒细胞POX活性下降：见于骨髓异常增生综合征、放射病、退化的中性粒细胞及某些白血病。第三十六页，共42页。应用评价POX染色是急性白血病形态学分型中最重要、首选的常规细胞化学染色。

POX染色涂片上细胞结构不如瑞氏染色清楚，且阳性细胞中已有阳性颗粒覆盖，一定程度上干扰白细胞颗粒判断。第三十七页，共42页。

POX染色测定MPO的敏感性明显低于流式细胞术对MPO测定，所以POX染色阴性的患者并不等于白血病细胞中不存在此酶，需用流式细胞术进行确认。第三十八页，共42页。苏丹黑染色

苏丹黑B（sudanblackB，SBB）是一种脂溶性的重氮染料，能溶解细胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇），而使脂类物质显示出来，呈深黑色或