临床色谱质谱检验技术 第五章液相色谱-质谱技术（一）-汪慧-20170401

第五章液相色谱-质谱技术临床基因组教研室汪慧邮箱：gz-wanghui@2017.04.01《临床色谱质谱检验技术》一、本章教学要求二、液相色谱-质谱技术概述三、液相色谱-质谱联用仪系统五、小结与思考《临床色谱质谱检验技术》主要内容四、液相色谱-质谱联用中的主要技术问题一、本章教学要求《临床色谱质谱检验技术》目标掌握：液相色谱-质谱联用仪的组成及工作原理液相色谱-质谱联用方法的建立熟悉：液相色谱-质谱联用的主要技术问题了解：液相色谱-质谱技术发展历史第五章教学要求教学形式及学时理论教学学时：3第五章教学要求复习《临床色谱质谱检验技术》气相色谱-质谱联用技术优势气相色谱作为进样系统质谱作为检测器气相色谱作为进样系统，将待测样品进行分离后直接导入质谱进行检测二者优势互补，解决了气相色谱定性的不专一性，使得质谱成为一种兼具通用性，选择性的检测器。质谱作为检测器，检测的是离子质量，获得化合物的质谱图，对化合物进行定性定量获得三维信息谱图气相色谱-质谱技术优势

正癸烷气相色谱-质谱联用仪的组成及工作原理？气相色谱-质谱技术气相色谱部分质谱部分数据处理系统气相色谱-质谱方法建立流程？气相色谱-质谱技术文献检索方法建立过程中问题解决质谱方法建立离子源质量分析器......气相色谱方法建立内标选择

色谱柱......样品制备固相萃取液液萃取......气相色谱-质谱技术鉴别=定性计算含量=定量色谱图对检测有什么作用？样品制备仪器分析数据处理气相色谱-质谱方法检测流程临床GC-MS方法的验证参数？方法的精密度（批内、批间）、准确度、分析测量范围、临床可报告范围、分析灵敏度、基质特异性、干扰试验、携带效应、生物样品稳定性、前处理后样品稳定性、方法参考区间的建立与验证气相色谱-质谱技术二、液相色谱-质谱技术概述《临床色谱质谱检验技术》气相色谱-质谱联用技术的定义？优势？应用局限？定义：将气相色谱的分离能力与质谱的鉴定能力结合起来进行定性定量分析的基本分析技术。优势：既解决了气相色谱定性的不专一性，也解决了质谱要求样品纯度高的局限性，二者优势互补，将气相色谱作为进样系统，质谱作为检测器。局限：适合分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物（仅占已知化合物20%），但不适用不稳定和不挥发性物质分析。引言液相给出的信息液相色谱-质谱技术优势混合物中有机物的分析可解决的问题：

定性：保留时间定量：峰高，峰面积液相存在问题未完全分离？定性，结构信息？灵敏度？液相色谱-质谱技术优势质谱给出的信息液相色谱-质谱技术优势液相色谱-质谱联用中给出的信息液相色谱-质谱技术优势液相色谱-质谱技术可解决的问题定性：结构信息、保留时间定量：峰面积、峰高可分析含量极少的化合物液相色谱-质谱技术优势与气相色谱-质谱联用的区别？液相色谱-质谱技术优势与气相色谱-质谱联用的区别？液相色谱-质谱技术优势液相色谱-质谱技术不挥发性化合物分析测定极性化合物分析测定热不稳定化合物分析测定大分子化合物分析测定没有商品化的标准谱库气相色谱-质谱技术最早商品化的联用仪适宜分析小分子，易挥发、热稳定、能气化的化合物用电子轰击（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比已知化合物中约80%的化合物是亲水性强、挥发性低的有机物，热不稳定化合物及生物大分子，只能依靠液相色谱进行分离。液相色谱-质谱技术出现的原因？高分离能力适用广高灵敏度和高特异性临床毒理学生化遗传内分泌疾病微生物蛋白质组学治疗药物监测液相色谱-质谱技术在临床检验领域的主要应用三、液相色谱-质谱联用仪系统《临床色谱质谱检验技术》液相色谱-质谱联用仪的组成

1、液相部分（包括输液系统、进样系统、色谱柱、柱温箱）2、质谱部分（包括离子源、质量分析器、检测器和真空系统）3、数据处理系统数据处理系统液相部分质谱部分液相色谱-质谱联用仪的工作原理质谱部分数据处理（计算机）系统可以同时控制液相色谱、质谱部分、以及数据采集和处理分析，是液相色谱质谱联用仪的中央控制单元。四、液相色谱-质谱联用中的主要问题《临床色谱质谱检验技术》

液相色谱-质谱联用主要技术问题接口技术电子技术计算机技术目的：将液相分离后的待测组分实现离子化，通过提高离子化效率以产生足够量的离子进入质谱仪，同时还需要维持质谱的高真空状态。要求：接口不破坏MS真空系统，同时不影响色谱柱的分离柱效；接口使分离的组分尽可能多进入MS，同时让尽量少的液体流动相进入质谱；接口不改变分离后组分结构（样品不被分解损失）。液相色谱-质谱联用接口技术如何实现液相色谱-质谱联用？液相色谱-质谱联用的主要困难液相（LC）质谱（MS）高压液相操作（流速大）要求高真空液体进入离子源转变为大量气体只允许有限的气体进入离子传输系统质量范围无限制测定质量取决于m/z和质谱仪的类型常常使用无机盐缓冲剂需采用挥发性缓冲盐解决思路：扩大MS真空系统的抽气容量在引入真空系统之前除去溶剂分流流出物，牺牲灵敏度使用可在较低流量下有效工作的微型色谱柱液相色谱-质谱联用的“接口”技术发展的三个分支流动相进入质谱以后直接离子化，形成连续流动快速原子轰击技术（FAB）等；流动相雾化后“去溶剂”，分析物蒸发后再离子化，形成“传送带式”接口(MB)和离子束接口(PB)等；流动相雾化后形成的小液滴去溶剂化，气相离子化或者离子蒸发后再离子化，形成热喷雾接口(TS)、大气压化学离子化(APCI)和电喷雾离子化技术(API)等。液相色谱-质谱联用的接口1974E.C.Horning将大气压化学离子化（APCI）用于液相色谱质谱联用1984JohnFenn发明电喷雾离子化技术（ESI）1988电喷雾离子源质谱仪首次应用于蛋白质的分析1989第一台商业化电喷雾源的液相色谱质谱联用仪诞生1990

GaryJ.VanBerkel将离子阱质谱与ESI成功联用20世纪90年代以后