细胞培养复习题

载称解释细胞培养(动物细胞培养)：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方组织培养：从生物体内取出活的组织(多只组织块)在体外进行培养的方法。有时泛指所有的体外培养。器官培养：是将活体内的器官(一般是胚胎器官)、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子(生长因子和激素、结合蛋白等)组成。体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。去分化(脱分化)：细胞在体外不可逆地失去原有特性。注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节表现出分化特性。但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。原因：培养条件分化发生阻抑细胞分裂指数(MI)：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称1)体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。2)一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种3)体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化(脱分化)②不适应要求：1)培养前准备2)操作间消毒3)洗手和着装4)火焰消毒用液的类型、配制和无菌处理方法：1)操作程序规范2)试剂设备专人负责3)培养用品定点存放2、平衡盐溶液(BBS)：(1)成分：无机盐和葡萄糖，少量酚红。(2)作用：维持渗透压、缓冲和调节酸碱酶消化液主要作用是水解细胞之间的蛋白质，使细胞相互分离。要作用是通过结合(螯合)细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞之间的细胞连接。达到分散细胞的目的。载液：胶原酶是从细胞中提取的一种酶，对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用，而对培养细胞一般2)合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的，配方恒定的培养基。3)完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基。细胞生长培养基:常用培养基，血清含量高,10-4)无血清培养基：定义：由基础培养基和替代血清的补充因子(生长因子和激素、结合蛋白等)组成。合成培养基(基础培养基)的成分只能维持细胞生存素：防止污染不同。可分为潜伏期、指数生长期、停滞期(平顶期)1.潜伏期特点：1)细胞适应新环境的恢复期(包括悬浮期、贴壁期、潜伏期三个时期)2)可有运动活动，基细胞分裂指数和细胞群体倍增时间表示。6、动物细胞培养具有一系列优点：删胞培养技术研究细胞的生命活动规律，可以很方便地采用各种实验技术和方法来、检测和记录。极其广泛。好的细胞群，降低实验成本。载2、动物细胞培养的缺点：③体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少的差异。(形态和功能的差异)理想的培养实验室可分为：准备室、缓冲室(与培养室相连的消毒房间，作为隔离培养室与外面非消毒房间的缓冲地带)、培养室(一间或几间)，普通实验室、办公室。培养细胞生命期：指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括三个阶段：原代培养期、传代培养期、衰退期。1.原代培养期(也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周)2.传代培养期(定义：原代细胞接种到两个或以上的器皿继续进行培养标志进入传代培养期)亡。骤 (2)在遗传学上的应用染色体分析，杂交育种。 (3)在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞，进行体外受精、胚胎分割和移植。 (4)在病毒学上的应用培养细胞为病毒的增殖提供场所。 (5)在药理学领域的应用药品、食品添加剂等对机体的毒性及其产生不良影响的安全性调查。(许多致畸、胞会发生染色体结构和数目的变异。) (1)用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断用羊膜穿刺技术获得胎儿细胞，培养后进行染色体分析，诊断胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型。 (2)用于癌症的早期诊断和预防通过培养淋巴细胞，对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的病人，进及早的预防和治疗。 (3)用于临床治疗目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造血障碍症患者体内进行治疗的报道。 新品种的培育可大大缩短育种进程，且更加经济有效。胚胎干细胞的研究成果和克隆羊多莉的4.在生物制品生产上的应用细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆抗体等。载染。牛血清和小牛血清，它们的区别清是从母牛剖腹取出的胎牛中分离出来的血清，对许多细胞系均有促进生长作用，主要用于细胞株的保化法传代步骤 (1)吸出或倒掉瓶内的旧培养液。 (5)计数，接种到新的培养瓶。采用离心法传代细胞连同培养液一并转移到离心管内，800-1000rpm离心5min,然后取出上清，加入新的培养液到离心管内，1)培养液观察培养液的颜色和透明度的变化。pH2)细胞生长状况倒置显微镜观察。4、微生物污染：培养液浑浊、漂浮菌丝。长减缓、胞质颗粒增多、培养液不变混。“去分化”不可逆(染色体变化)。“不适应”可重新诱导(培养条件变化)载去分化需要注意：①去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态。如:高度分化的神经细胞和心肌经丧失的增生活性不可能恢复，但已经具备的生物电活动特性不会完全失去。作用：在细胞代谢中有重要作用，是细胞合成核酸和蛋白质必需氨基酸，(在缺少时，细胞生长不良死亡)。二章细胞冻存的原则：慢冻快融2)加冷冻保护剂(常用：甘油或二甲基亚砜(DMSO))冷冻保护剂作用机理：1)冷冻保护剂易同溶液中水分子结合，从而降低冰点，减少冰晶的形成；易受损的-5~0度，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即①将恒温水浴箱的温度调至37~40℃。②从液氮中取出冻存小管，立即投入37~40℃温水中快速晃动，直至冻存液完全融解。要在1~2min内完成、细胞活性检查、苯胺黑等。2.四唑盐(MTT)比色法：活细胞可沉淀四唑盐并形成蓝紫色结晶，再用DMSO溶解结晶物，溶液颜色的深浅三章：组织块培养是即将组织剪切成小块后，接种于培养瓶培养的方法。基本方法：将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶载。离法消化细胞、镜检；②发现组织已分散成细胞团或单个细胞，终止消化，筛网过滤，大块继材的基本要求 (3)及时培养：可培养液4℃暂存。 (5)营养丰富：添加10%血清。 (6)采用易培养组织：组织类型、分化程度、年龄等。 (7)作好记录：来源等信息及标本要保留。2)组织材料的分离方法可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。。有的优点1，可以免受机体内部因素的影响，从而便于研究理化和生物等因素对肿瘤细胞生命的影响2、便与研究肿瘤细4、可用抗癌药物的快速筛选瘤性。四章培养技术：指在人工条件下，在细胞生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品微载体：微载体指直径在60~250微米，能适用于细胞贴壁培养的微珠，一般由葡聚糖或各种合成聚合物组成。模培养方法微囊化培养是指在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质以及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊， (一)贴壁培养载 (二)固定化培养于贴壁依赖性细胞，又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养，细胞密度高，抗剪切力和抗污染力法：吸附法、包埋法、微囊法 (三)悬浮培养①微载体表面性质与细胞有良好的相容性，适用细胞附着、伸展和增殖；收获；④粒径在60~250μm(溶胀后)之间，均一，差异不大于20μm。有利于细胞均匀分布在各微载体表面；120℃高温，便于采用高压蒸汽灭菌；①培养初期阶段；②粘附贴壁阶段；③维持培养阶段；④细胞收获阶段；阶段模培养技术的应用载1)温和、快速、不损伤细胞，尽量在液体和生理条件下操作2)所用试剂和膜材料对细胞无毒害3)膜的孔径可控制，必须使营养物和代谢物自由通过4)膜应有足够机械强度抵抗培养中的搅拌。介绍的几种生物反应器各自优缺点①能提供充足氧气；②良好的传质传热及密闭性能；③制备材料对细胞无毒；④有自动检测调控系统；高，3、中空纤维细胞培养反应器优点1)培养器体积小，细胞高细胞损害小；2)浓缩产品；3)易于分离产物，不易清洗维护，价格高五章起机体产生抗体的分子结构，叫做抗原决定簇。B。理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强，便于人为处理和质量控制位改变时，单抗不能发挥其作用应用：1)用于疾病的诊断和治疗：2)作为载体制备导向药物。几个问题是什么1)细胞比例2)反应时间3)反应温度4)PEG的选择交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理1)要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但B淋巴细胞不能在体外生长。载 2)而骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞融合，得到杂种骨髓瘤 3)杂种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来径合成DNA。这时正常细胞可以通过“补救合成途径”,由胸腺嘧啶激酶(HK)和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)利用T和H合成核酸而繁殖。6、酶联免疫吸附法(ELISA)原理第六章外植体：用于植物组织(细胞)培养的器官或组织(的切段)。离的悬浮细胞(单个细胞)，通过继代培养使细胞增殖来获得大量细胞群体的方法。。载2、外植体的预处理： (3)深层灭菌：氯化汞、次氯酸钠等。 4.从愈伤组织分离得到细胞。素浓度很重要配合一定浓度的细胞分裂素；添加附加物。