免疫检测点介绍

（一）免疫检测点简介“免疫检验点”，为抑制受体和抑制信号通路，这些“检验点”在正常情况下能抑制 T细胞的功能，同时在肿瘤组织中可能被肿瘤利用形成免疫逃逸。PD-1、PD-L1、CTLA-4、B和 T细胞衰减器（BandTcellattenuator，BTLA）、T细胞免疫球蛋白以及 Tim-3 等分子均属于“检验点”分子，在肿瘤组织中可能被肿瘤利用形成免疫逃逸， 它们通过控制胞外以及胞内信号来控制细胞周期进程。淋巴细胞活化基因 3（LAG-3）是表达在活化 T细胞、NK细胞及B细胞上的免疫抑制检验点分子。目前已知的唯一配体是 MHC-II分子。NK细胞表面存在杀伤抑制受体 （KIRs，可抑制 NK细胞的杀伤作用），在肿瘤微环境中可能会被诱导表达， 从而抑制 NK细胞的杀伤功能。因此，KIRs也被认为是免疫抑制检验点，通过阻断其信号可增强NK细胞的杀伤肿瘤的功能 [53]。目前已有针对 KIRs单抗进入临床实验（lirilumab单抗治疗急性粒细胞白血病已进入 I期临床实验）很多免疫抑制检验点在肿瘤细胞中与 PD-1/PD-L1共表达，另一方面，免疫抑制检验点的联合阻断中可供选择的目标增多有利于筛选出最佳组合从而达到最佳效果。（二）临床常用的检测点“程序性死亡分子 1”（programmeddeah-1 ，PD-1）和“细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4”（cytotoxicTlymphocyte-associatedantigen-4 ，CTLA-4）表达在 T细胞表面，同属于抑制性共刺激分子，在免疫系统中扮演着类似“刹车”的角色。CTLA的配体（即 CD80和CD86）只表达在抗原递呈细胞上，而非肿瘤细胞表面， 因此CTLA-4抑制T细胞活化发生在次级免疫器官（淋巴结）内，而不是肿瘤微环境中。 同时CTLA-4主要表达在 CD4+T细胞而非 CD8+T细胞，CTLA-4单抗的抗肿瘤作用可能是通过增强CD4+T细胞间接促进 CD8+T细胞的功能。不同于 CTLA-4的是，PD-1的配体 PD-L1在肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞上均有表达， 而不是在抗原递呈细胞上， 因此PD-1/PD-L1抑制T细胞活化主要在肿瘤微环境中 [5-7]。目前，在肺癌领域研究得比较多的免疫检验点抑制剂有抗 PD-1（Nivolumab，Pembrolizumab）和PD-L1单抗（MPDL3280A和MEDI-4736）。PD-L1仍然是现阶段 PD-1/PD–L1类药物最有前景的预测疗效的生物标记物之一在黑色素瘤相关研究中发现， 抗PD-1抗体的疗效要好于抗 CTLA-4抗体。在 NSCLC，CTLA-4抗体单药治疗鲜有疗效，而 PD-1/PD-L1阻断剂的单药均表现出肿瘤活性。PD-1有两个配体，PD-L1和PD-L2；PD-L1有两个受体 PD-1和CD80（B7.1）。所以，尽管抗 PD-1抗体和抗 PD-L1抗体都作用于 PD-1/PD-L1信号轴，但阻断 PD-1并不等同于阻断 PD-L1。抗PD-1抗体能阻断PD-1与PD-L1、PD-L2结合，却不能阻断 PD-L1与CD80相互作用，而抗PD-L1抗体能阻断 PD-L1与PD-1、CD80结合，却不能阻断 PD-1与PD-L2的结合。抗PD-1单抗的代表性药物有Nivolumab和Pembrolizumab（MK-3475）。1，Nivolumab是一种抗 PD-1受体的人源化 IgG4型单克隆抗体。百时美-施贵宝公司产品PD-1抑制剂，商品名“opdivo“(Nivolumab纳“屋单抗“)美国默沙东公司研制 PD-1抑制剂，商品名“Keytruda”（药品名：Pembrolizumab 派姆单抗， MK-3475）2，Pembrolizumab（MK-347），是另一种人源化 IgG4-κ型单克隆抗体，高选择性阻断 PD-1，其作用机理类似 Nivolumab。二，Ipilimumab（一种抗 CTLA-4抗5体），商品名yervoy（Ipilimumab易普利姆玛， 也叫“依匹单抗”），和opdivo一样，都是由百时美施贵宝公司生产。三，罗氏旗下基因泰克公司研发的 “MPDL3280A”是人源化抗 PDL-1的IgG4型抗体。MEDI-4736是另一个 IgG1-k型抗PD-L1单抗。（三）PD-1与PD-L1PD-1（programmeddeath-1）作为 T细胞抑制受体， 在肿瘤细胞中可限制 T细胞效应子的功能，在肿瘤免疫逃逸中具有重要作用。人PD-1基因位于染色体的 2q37.35，虽然 PD-1被认可为 CD28超家族成员，但PD-1蛋白质结构与 CD28、CTLA-4及ICOS存在明显差异。与其他的共刺激分子仅表达于 T淋巴细胞不同， PD-1持续性表达于T、B淋巴细胞、骨髓细胞并上调于活化的 T细胞表面。PD-1是免疫球蛋白超家族 CD28家族成员，为 50~55kD的Ⅰ型跨膜糖蛋白，由类似 IgGV的结构域、跨膜结构域以及胞质尾部结构域组成。 IgGV的结构区是从质膜中分离的 20个氨基酸区域，与细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原 -4（cytotoxicTlymphocyteassociatedantigen-4，CTLA-4）、CD28及共刺激因子具有 22%~33%的同源性；胞质尾区具有 2个酪氨酸基序，即免疫受体酪氨酸抑制基序（immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif ，ITIM）和免疫受体酪氨酸转换基序 （immunoreceptortyrosine-basedswitchmotif ，ITSM）。ITSM对于PD-1发挥免疫抑制功能十分必要［8］。PD-1的表达与细胞凋亡无关但与淋巴细胞活化相关。PD-1与肿瘤的免疫逃逸相关， 其被T细胞受体（Tcellreceptor，TCR）信号诱导，并在慢病毒感染及癌症中上调无衰竭 T细胞［9］。PD-L1（B7-H1）和 PD-L2（B7-DC）是 PD-1结合配体，属于 B7家族蛋白成员［ 10］。人B7-H1PD-L1在

与B7-1，T细胞、

B7-2及ICOS的同源性约为 21至23%。B细胞、巨噬细胞、 DCs以及一些非免疫细胞中表达。与其他的

B7

家族成员仅表达于造血细胞不同，

PD-L1

可上调表达于活化的 T细胞、B细胞、DC、巨噬细胞、单核细胞，或经 IFN-γ刺激的角质细胞、内皮细胞及成肌细胞表面。此外， PD-L1也低水平的表达于非淋巴器官如心脏、胎盘、骨骼肌、肺、肝、脾及胸腺等器官。而PD-L2表达仅局限表达于造血系统来源的细胞如树突细胞、 巨噬细胞、单核细胞并上调表达于活化的 T细胞、B细胞及其他组织来源的免疫细胞表面。B7-H1在维持外周耐受发挥主要作用， B7-DC主要是在淋巴结的免疫应答中有重要的功能

[4]。PD-L1配体涉及宿主免疫系统的逃逸及肿瘤抗凋亡的活性 ［8PD-L1的广泛表达表明 PD-1／PD-L1在调解效应 T细胞应答中具有

］。重要作用。与 PD-L1相同，IFNγ、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocytemacrophage-colonysti-mutaingfactor ，GM-CSF）以及白细胞介素-4（inte-rleukin-4 ，IL-4）等炎症信号可加强 PD-L2的表达。PD-Ls在肿瘤中的表达可调解适应性 Tregs导致肿瘤诱发的免疫抑制，包括 CD8+T细胞效应功能的抑制。PD-1／PD-Ls的IgV区域与 T细胞的抗原受体及抗体相似，提高了PD-1／PD-Ls复合物结合其他分子的可能性。活化诱导的细胞死亡PD-1通过 PD-L1或 PD-L2募集 PD-1，导致细胞周期停滞，使在 G0／G1期的细胞大量积累。研究表明，外源

IL-2

可减弱

PD-1聚集导致的细胞周期停滞。PD-1可能通过调节 IL-2的转录影响 T细胞的活化和增殖 ［26］。乳腺癌的标本都有不同程度的 B7-H1及B7-DC的阳性细胞。尤其在低分化的小叶癌表达最为显著。 B7-H1的表达与患者的预后呈负相关。目前有 5种处于临床试验阶段的抗体可作为阻断剂阻断 PD-1／PD-Ls信号通路，分别为1，MDX-1106 ／BMS-936558 ／ ONO-4538（全人 IgG4抗PD1单抗，

BMS）2，CT-011（人源化 IgG1抗PD1单抗，CureTech／Teva）、3，MK-3475（全人 IgG4抗 PD1单抗，Merck）4，BMS-936559（人源化 PD-L1IgG4单抗，抑制 PD-1和 B7.1）5，AMP-224（B7-DC／IgG1融合蛋白， GSK）MDX-1106／BMS-936558／ONO-4538 是人IgG4抗体CT-011为另外一种 PD-1阻断剂抗体，研究证明，其对血液恶性肿瘤是有效的，对固体瘤及直肠癌的研究仍在进行中。MK-3475（Lambrolizumab）是人源抗 PD-1单克隆 IgG4抗体BMS