牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌

一、复习二、实验：配培养基与灭菌三、斜面的划线培养四、倒平板的操作五、平板划线培养现在是1页\一共有56页\编辑于星期六1一、复习现在是2页\一共有56页\编辑于星期六2现在是3页\一共有56页\编辑于星期六3《微生物培养与检验》主要课程内容1.微生物营养需求2.微生物形态3.微生物纯化、分离4.微生物培养、筛选与保存5.微生物检验现在是4页\一共有56页\编辑于星期六4课程内容微生物吃什么？1微生物长的什么样？2如何得到微生物？3如何保存微生物？4我很爱吃熟食（猪头肉），但是听说熟食微生物超标，这是怎么检测的？55现在是5页\一共有56页\编辑于星期六规则：1.上课不迟到：第1、5节课，提前10min到教室

2.下课前，自己的实验物品归类，该清洗的清洗，该收拾的收拾

3.值日生负责擦黑板、扫地、擦桌；为大家做好服务工作

4.上课时间请不要玩手机

现在是6页\一共有56页\编辑于星期六6安全操作与标准操作现在是7页\一共有56页\编辑于星期六7（一）微生物培养基的制备（二）微生物的消毒灭菌（三）认识微生物培养所需的仪器设备微生物吃什么？1现在是8页\一共有56页\编辑于星期六8（一）微生物培养基的制备培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养物质。满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子，P，S，Na，Ca等适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位，合适的渗透压现在是9页\一共有56页\编辑于星期六9根据物理状态划分培养基分液体、半固体和固体3种液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩大培养；半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细菌现在是10页\一共有56页\编辑于星期六10培养基的配制原则1.选择适宜的营养物质实验室中常用：现在是11页\一共有56页\编辑于星期六112.营养物质的浓度及配比合适3.控制pH条件细菌和放线菌：pH7.0~7.5酵母菌和霉菌：pH4.5~6.04.控制氧化还原电位5.原料来源的选择尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基成分现在是12页\一共有56页\编辑于星期六126.灭菌处理避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所进行消毒与灭菌培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，121.3℃15~30min现在是13页\一共有56页\编辑于星期六13（二）微生物的消毒灭菌灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽孢。消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到消毒的目的无菌现在是14页\一共有56页\编辑于星期六14消毒灭菌方法：（一）干热灭菌法（二）湿热灭菌法（三）过滤除菌（四）紫外线杀菌（五）药物杀菌现在是15页\一共有56页\编辑于星期六15（一）干热灭菌法1.火焰灭菌法2.热空气灭菌法140~160℃2~3h现在是16页\一共有56页\编辑于星期六16（二）湿热灭菌法1.高压蒸汽灭菌法121℃20~30min2.常压蒸汽灭菌法3.常压间歇灭菌法现在是17页\一共有56页\编辑于星期六17（三）过滤除菌薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm现在是18页\一共有56页\编辑于星期六18（四）紫外线杀菌240~280nm波段紫外线杀菌力较强多以253.7nm作为紫外线杀菌波长特点：穿透力弱超净工作台：现在是19页\一共有56页\编辑于星期六19（五）药物杀菌1.酒精2.新洁尔灭现在是20页\一共有56页\编辑于星期六20（三）认识微生物培养所需的仪器设备1.培养平板现在是21页\一共有56页\编辑于星期六212.试管与棉塞现在是22页\一共有56页\编辑于星期六223.接种环，涂布棒现在是23页\一共有56页\编辑于星期六234.高温高压蒸汽灭菌锅现在是24页\一共有56页\编辑于星期六24p42高压蒸汽灭菌请回顾灭菌锅的操作方法现在是25页\一共有56页\编辑于星期六251）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。调整温度时间121℃15min。5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空气后，再将其关闭；6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开盖。注意防止烫伤7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量避免二次污染。现在是26页\一共有56页\编辑于星期六265.鼓风干燥箱现在是27页\一共有56页\编辑于星期六276.超净工作台现在是28页\一共有56页\编辑于星期六28每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。现在是29页\一共有56页\编辑于星期六297.微量移液器的使用现在是30页\一共有56页\编辑于星期六30今天的工作：1.固体物品的灭菌2.配制培养基并进行灭菌3.学习倒平板4.学习斜面培养基制作5.超净台的准备6.划线接种7.灭菌效果检查现在是31页\一共有56页\编辑于星期六31开始实验1.固体物品：1）平皿（6只/组）2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃20min现在是32页\一共有56页\编辑于星期六322.培养基：培养基分液体、半固体和固体3种液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩大培养；半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细菌现在是33页\一共有56页\编辑于星期六33牛肉膏蛋白胨培养基

牛肉膏

3g

蛋白胨

10g

NaCl

5g

琼脂

15-20gpH7.4-7.6，加水至1000mL；若需分装，需先融化，摇匀后分于121℃高压灭菌15~20min备用用途：普通细菌常用的培养基（1）固体培养基配置现在是34页\一共有56页\编辑于星期六34请大家配制：请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说明，每组配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150mL于锥形瓶中请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL的配方现在是35页\一共有56页\编辑于星期六35配制完毕，将配制好的培养基装入锥形瓶内，瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包扎瓶口，标注好组别，进行高温高压蒸汽灭菌现在是36页\一共有56页\编辑于星期六36（2）液体培养基为固体培养基中不含琼脂牛肉膏蛋白胨培养液

牛肉膏

3g

蛋白胨

10g

NaCl

5gpH7.4-7.6，加水至1

000mL于121℃高压灭菌15~20min备用用途：普通细菌常用的培养基现在是37页\一共有56页\编辑于星期六37请大家查询LB培养基配方每组配置LB液体培养基50mL于锥形瓶中，包扎好瓶口（纱布+牛皮纸/报纸）后灭菌请大家先写出1L的配方，然后再写出50mL的配方现在是38页\一共有56页\编辑于星期六381.固体物品的灭菌√2.配制培养基并进行灭菌√3.学习斜面培养基制作4.学习倒平板5.超净台的准备6.划线接种7.灭菌效果检查现在是39页\一共有56页\编辑于星期六393.如何倒平板（1）超净工作台的准备将超净工作台台面用酒精棉球擦干净；关上门后，紫外灯打开，灭菌15-30min灭菌结束，打开风机现在是40页\一共有56页\编辑于星期六402.加热融化培养基（若为刚灭菌结束未凝固的培养基，则略）将培养基放入微波炉内加热融化，注意观察，不要加热时间过长或温度过高，以免液体溅出。现在是41页\一共有56页\编辑于星期六414.倒平板超净工作台灭菌完毕，关紫外灯，打开风机；超净工作台门不能开太高，约20cm即可；用新洁尔灭棉球擦拭工作台和手；将酒精灯瓶外擦干净，转移入工作台；将已融化的培养基瓶身擦干净，转移入工作台；待培养基冷却至50°C左右（不烫手为原则，但是不可冷却过度），倒平板。现在是42页\一共有56页\编辑于星期六42平板要求：平板平整，无凸起；平板无“挂壁”；培养基布满整个平皿倒平板操作视频现在是43页\一共有56页\编辑于星期六43平板倒制结束，静置，待凝固使用现在是44页\一共有56页\编辑于星期六444.学习斜面培养基制作取无菌试管，倒入1/3高度的培养基，塞上盖子，斜靠，使得斜面长度3~4cm，待凝固后使用现在是45页\一共有56页\编辑于星期六45请大家先制备4个试管的斜面培养基，然后将剩余培养基用于制备平板现在是46页\一共有56页\编辑于星期六461.固体物品的灭菌√2.配制培养基并进行灭菌√3.学习斜面培养基制作√4.学习倒平板√5.超净台的准备√6.灭菌效果检查7.划线接种现在是47页\一共有56页\编辑于星期六476.灭菌效果检查现在是48页\一共有56页\编辑于星期六48生化培养箱为微生物培养提供恒温设备（固体培养基）现在是49页\一共有56页\编辑于星期六497.平板划线法：取一接种环细菌，左手持平皿将盖口微开，用沾有细菌的接种环在琼脂平板上划直线；接种环火焰灭菌，待冷却，再用接种环在顶端边缘划线处沾取标本继续划线，如此划4~5次，划毕加盖。并用蜡笔在皿底玻璃上写明接种菌名。于37℃培养18~24h观察，注意平皿表面生长各菌落的大小、形态、边沿、表面结构、透明度和颜色等特征。现在是50页\一共有56页\编辑于星期六50四区划线现在是51页\一共有56页\编辑于星期六51圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽，不透明菌落，直径1～2mm现在是52页\一共有56页\编辑于星期六52请大家划线接种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，置于培养箱16~18h后取出置于4℃