实验检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质

实验检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质第1页/共20页实验1：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质必修一实验:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质第2页/共20页一.实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。如：①.还原性糖的鉴定：还原性糖+②.脂肪的鉴定：

脂肪+脂肪+

③.蛋白质的鉴定：蛋白质+④淀粉+斐林试剂砖红色沉淀苏丹Ⅲ染液橘黄色苏丹Ⅳ染液红色双缩脲试剂紫色碘蓝色3第3页/共20页二.目的要求：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质1、还原糖的检测和观察：选材应该选择含

量高.颜色为

以苹果.梨为最好。糖白色或近于白色制备组织样液：制浆过滤取液三.实验过程:用一层纱布的植物组织，4第4页/共20页可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过程中生成砖红色沉淀，说明植物组织样液中含有还原糖。注入2mL苹果组织样液注入1mL刚配制好的斐林试剂水浴加热约2min呈色反应变成砖红色50----650C的温水结论：甲乙液等量混匀现配现用振荡、混合摇匀呈现蓝色5第5页/共20页①还原糖有

。

②试剂：

.（甲液：0.1g/ml

的

,乙液：0.05g/ml的

.）甲乙液必须

后再加入样液中，

。

③必须

。葡萄糖，果糖，麦芽糖用水浴加热斐林试剂NaOHCuSO4等量混合均匀现配现用注意事项：④颜色变化：浅蓝色棕色砖红色6第6页/共20页思考：

1.为什么加入斐林试剂甲液和斐林试剂乙液时必须混合后再加入？因为若先加入NaOH溶液，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4溶液后不能产生Cu2O砖红色沉淀，只有将其先配成Cu(OH)2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。7第7页/共20页2.斐林试剂甲液和乙液既然混合后使用，为什么不能在实验前配制好，一定要使用时临时配制？

由一分析可知，鉴定试剂实质上是Cu(OH)2悬浊液，很不稳定，容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液、乙液分别配制储存，使用时再临时配制8第8页/共20页二、脂肪的检测方法一：制作临时切片（1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。（2）检测过程：制片选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央制成临时装片：滴12滴蒸馏水，盖上盖玻片染色：在薄片上滴加23滴苏丹Ⅲ染液，染色23min洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精12滴镜观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。切片：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片。视野中有橘黄色颗粒第9页/共20页第10页/共20页橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒脂肪+苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染液橘黄色（或红色）第11页/共20页注意事项：

①切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰有的地方模糊。

②酒精的作用是：

。

③需使用显微镜观察

④使用不同的染色剂染色时间不同颜色变化：

。洗去浮色橘黄色或红色12第12页/共20页3、蛋白质的检测和观察：选材应该选择含

丰富的豆浆或鸡蛋清溶液（避免材料自身的颜色对实验变化颜色的掩盖）蛋白质黄豆浆滤液或蛋清稀释液制备组织样液呈色反应组织样液2mL双缩脲试剂A液1mL双缩脲试剂B液4滴摇匀后变成紫色结论：说明组织样液中存在蛋白质。13第13页/共20页（3）注意事项：①试剂：

（

A液：0.1g/ml的

；B液：0.01g/ml的

）先加

，再加

。注意：先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与Cu离子发生颜色反应，形成紫色的络合物。

B液要求量适中，否则多余的B液将会与A液发生反应生成大量蓝色Cu(OH)2沉淀而遮盖试验中所产生的紫色。同样为了防止生成较Cu(OH)2沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂B比斐林试剂乙液浓度小得多，这也是斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道理。②鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比。

③用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷双缩脲试剂A液1mlB液4滴NaOHCuSO4蛋白质的检测结果14第14页/共20页斐林试剂与双缩脲试剂的比较：A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4紫色物质生成砖红色沉淀先加A液，再加B液，不需加热甲液与乙液先混再用，且现配现用，需加热蛋白质还原性糖试剂组成检验结果试剂用法检测对象双缩脲试剂斐林试剂15第15页/共20页比较项目斐林试剂双缩脲试剂不同点使用方法甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用使用时先加A液再加B液反应条件需50-65℃水浴加热不需加热即可反应反应原理还原糖中的醛基被Cu（OH）2悬浊液氧化,Cu（OH）2被还原为砖红色Cu2O沉淀具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成紫色络合物颜色砖红色紫色浓度乙液CuSO4浓度为0.05g/mLB液CuSO4浓度为0.01g/mL相同点

都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓度都是0.1g/mL第16页/共20页斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成，但二者有如下三点不同：①溶液浓度不同。斐林试剂中NaOH的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度为0.05g/mL；双缩脲试剂中NaOH的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度为0.01g/mL。②使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液；双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2＋。③使用方法不同。使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用双缩脲试剂时，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。第17页/共20页淀粉的检测和观察：取材：马铃薯