生药学课件 4-生药的鉴定

第三章生药的鉴定第一篇总论

第一节生药鉴定的意义

定义：生药鉴定（identificationofcrudedrug）就是依据国家药典、有关资料规定或有关专著对生药作真实性、纯度及品质优良度的检定。

目的：保证生药品种的真实性、用药的安全有效及发掘利用新药源。人工牛黄是以牛胆汁酸、胆红素、胆固醇与无机盐（硫酸镁、硫酸亚铁和磷酸三钙）为原料，与淀粉混合而成；培植牛黄是利用活牛体，以外科手术的方法在牛的胆囊内插入致黄因子，使之生成牛黄；而体外培育牛黄则是以牛的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。谢宗万教授《中药材品种论述》《中药材品种本草考证的思路与方法》《本草纲目药物彩色图鉴》各省(市、自治区)卫生厅批准执行的药品标准。第二节鉴定依据鉴定依据国家颁布的药品标准各省(市、自治区)制订的药品标准《中华人民共和国卫生部药品标准》《进出口药品质量暂行标准》国家标准部颁标准国家标准一级二级一、《中国药典》的版本及基本内容1953年版：收载药品531种，多数为原料药。1963年版：分为2部。常用生药643种(药材446种)。1977年版：内容较大变动，生药1152种，药材882。

1985年版：生药713种（药材506种）。1990年版：生药784种（药材509种）。

1995年版：生药920种（药材522种）。

2000年版：生药992种（药材534种）。2005年版：分三部：生药（1146）、西药、生物制品。2010年版：分三部：生药（2165），其中新增1019种（包括439个饮片标准）、修订634种，西药、生物制品。共九版二、地方药品标准地方标准收载国家标准中尚未收载的药品，或虽有收载但规格有所不同的本省（市、自治区）生产的药品，它具有地区性的约束力。第三节鉴定的一般程序送检单位送检日期鉴定目的样品数量样品包装一般状态一样品登记二、取样

估计取样——就是将整批的生药抽出一部分有代表性的供试品进行分析、观察，从而得出规律性的一种方法。

一般性检查感观比较常出现的问题

1取样前的准备工作2抽取样品的原则中药材破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的药材，每一包件至少在不同部位抽取2～3份样品，包件少的抽样总量应不少于实验用量的3倍。

包件多的，取样量一般按下列规定：

一般药材500～1000g；粉末状药材25g；贵重药材5～10g。总包件在100件以下：取样5件100～1000件：按5%取样超过1000件：超过的按1%取样贵重药材及不足5件：一般药材，逐件取样。用取样器(如探针)或手从包件的四角及中间或顶部、中部和底部分别取样。某些固体药材，可将其倒出，摊成正方形，依对角线划“×”字形，分成四等份，取对角2份，再如上操作，即连续四等分法取样。亦可采用连续二分法取样。液体药材混合均匀后取样，不易混匀者按不同部位取样。3取样的方法（1）方法：保证样品具有足够的代表性。由每一包件中取得混合样品称为“袋样”。大批药材全部袋样混合均匀所取得的样品，即为“混合袋样”，也叫“初样”。将初样根据不同种类按上述方法反复数次取样，直至最后剩余的药材量足够完成必要的试验以及留样数为止，此为平均样品。贵重药不取平均样品，逐件取样。取得的平均样品量一般不得少于检验所需的3倍数，即1/3供检验用，另1/3供复核用，其余的1/3留样保存。（2）样品的处理个体重量较大的药材，其取样量应比个体较小的为多，因为个体样品的代表性主要取决于取样的个数。对各类一般药材的平均样品量可按《中国药典》的规定执行。（3）样品的代表性和取样数量之间的关系鉴定目的主要可分为3个方面：真伪鉴别，纯度检查(检查杂质有机物和一般杂质)，品质鉴定。鉴定程序通常按上述排列依次进行。药典规定，生药材主要有下列内容：来源→性状→鉴别→检查→含量测定。三、鉴定的项目及程序1一般程序及主要项目首先要观察样品的类别、药用部分是否与送检时提供的情况相符。其是属植物药、动物药、矿物药，还是加工品。其药用部位是否相符，有无非药用部位，是否符合产地加工的要求等。（1）来源主要是与生药标准中描述的特征相对照，看其有无差异。必要时与标准药材相比较。（2）性状包括经验鉴别、显微鉴别和理化鉴别。一般鉴别试验只能体现某一药材的某一特性，而不能将某一个鉴别试验作为鉴定的惟一依据，应结合其他项目全面考察。例如化学鉴别试验，只能反映某类或某种成分的存在。（3）鉴别主要是对药材的纯净与否的限度检查，以控制其质量。检查内容是指药材在加工、生产和贮藏过程中可能含有并需要控制的物质。其中有有害物质、水分、灰分或浸出物等需测定的项目。（4）检查含量测定是控制生药质量的主要方法之一。主要用于有效成分已经明确药材的品质鉴定。（5）含量测定鉴定目的鉴定项目观察现象实验数据鉴定方法实验结果2鉴定记录及结果判断生药的杂质检查就是鉴定生药中可能混入的各类杂质以及杂质的数量是否超过规定的限度，也称为“纯度鉴定”。第四节生药的杂质检查一、定义对于保证临床用药的安全与有效具有十分重要的意义。二、意义三、来源来源性杂质掺入性杂质指来源与规定相同，但其性状或药用部位与规定不符。指来源与规定不同的物质。如在采收、加工和贮藏等过程中混入的无机物或人为掺入的非药用物质。人为掺入的杂质多见于贵重生药。由于贮藏不当，导致生药被虫蛀和霉变等变质的部分亦作为杂质处理。较小可筛分的杂质，可用适当的筛子将杂质筛出；个别肉眼难以识别的杂质，可采用显微或化学分析的方法进行检查；各类杂质确定后，应分别称重，计算出被检生药中杂质的含量。四、检查方法通常用肉眼或放大镜进行观察，较大的杂质可以直接检出。第五节生药鉴定的方法基源鉴定法性状鉴定法理化鉴定法生物鉴定法显微鉴定法生药鉴定的方法五大鉴定法第四节

基源鉴定法（又称“来源鉴定法”），就是应用植物、动物或矿物形态和分类学等方面的知识，对生药的来源或原料药进行鉴定，确定其正确的学名（或矿物的名称）或中成药的原料组成，以保证在应用中品种准确的一种方法。一、基源鉴定法第四节采用先观察整体、后观察局部形态的原则，掌握形态上的共性和特性。描述时要准确使用植物形态学知识及专业术语，认真的观察、解剖和描述之后，方可进行下一步工作，以达到确定品种的目的。检品不齐全的，须深入产地调查和采集实物，了解其相关信息，否则就无法着手鉴定。1鉴定步骤及方法（1）观察及描述第四节通过查阅有关植物资料或植物分科、分属的检索表，确定其科属。对于某些未知品种鉴定特征不全或缺少有关资料者，直接查阅与中药鉴定、药用植物等相关的综合性书籍或图鉴。即与收藏的已经确定学名的标本核对。在有条件的情况下，若能与模式标本(发表新种时所被描述的植物标本)核对，对正确的鉴定更为有利。

（2）查阅文献资料（3）标本核对鉴定第四节通常用于原植物鉴定的标本类型有：蜡叶标本、液浸标本和干燥标本。（4）标本的采集与制备自学2学名的鉴定第四节性状鉴定法也叫“直观鉴定法”，是用感观来鉴定中药性状是否与规定的标准或对照品相符合的一种方法。它是由传统鉴别方法与现代生物和矿物形态学相结合而形成的。具体地说，就是用眼看、手摸、鼻嗅、口尝、感试等十分简便的方法来鉴别中药的真伪、纯度或粗略估计品质的优劣。二、性状鉴定法第四节1性状特征描述方法药材形状药材大小药材颜色表面特征药材质地断面特征药材之气药材之味药材性状包括通常采用两种方法描述第四节一是使用生物学或矿物学的形态、组织学等名词，便于掌握药材鉴定的规律性，便于分类和推广。二是采用广大医药工作者在长期实践中积累起来的生动、形象的经验鉴别术语，语言简单，好记易懂，针对性强，但不易掌握其规律性。第四节

观察形状时，亦可用下列术语描述，如：

头（指根及根茎的上部）。

芦（指根顶端短缩的根茎）。

身（指根的主根）。

梢（指根的下部或支根）。

须（指小根或须根）。

连珠（指根及根茎膨大部分呈连珠状）。

疙瘩（指突起不规则）等。2性状鉴定的内容（1）形状：指药材的形状，一般较为固定，其与药用部位密切相关。第四节常用术语野山参“芦长碗密枣核丁，紧皮细纹珍珠须”党参“狮子盘头”防己“弯曲有横沟，形似猪大肠”黄连“鸡爪连”、“过桥杆”三七“铜皮、铁骨、狮子头”防风“蚯蚓头”辛夷“毛笔头”海马“马头、蛇尾、瓦楞身”松贝“怀中抱月”青贝“观音合掌”黄芪

黄芩三棱(圆柱形)(圆锥形)

(扁卵状圆锥形)半夏类球形麦冬纺锤形桃仁扁长卵形不规则块状熟地厚朴卷筒状黄柏板片状野山参

“芦长碗密枣核丁、紧皮细纹、珍珠须”防风蚯蚓头海马石决明夏枯草单位多用“cm”

。对鉴定部分药材具有重要意义。（2）大小：系指药材的大小、粗细、厚薄等。牛膝川牛膝第四节有些药材以颜色命名如黄芩、紫草等。药材的色泽可作为其质量的标志，如玄参要黑、茜草要红、黄连要黄。（3）颜色：常指商品药材的色泽，一般较为固定。紫草第四节色泽的变化与药材的质量有关，如绵马贯众久贮，根茎和叶柄基部断面变为棕黑色而不能药用；枸杞子和牛膝变黑后，就说明其已变质。第四节药材的颜色，一般均为复合色调，描述的颜色应以后一种色调为主，前一种为附助色调。如小茴香呈黄绿色，即以绿色为主，黄色为附。另有用“或”和“至”连接，如王不留行呈黑色或棕红色(未成熟)、天冬的表面呈黄白色至黄棕色。第四节蓝（胆矾）黄（蒲黄）红（西红花）白（僵蚕）黑（熟地）在描述复合色的药材时，应以后一种为主黄绿色（荆芥穗）红棕色（何首乌）黄白色（川贝母）朱砂丹参紫色：紫草、紫苏叶、紫石英；黑色：黑胡椒、黑芝麻、墨旱莲、乌梅；黄色：黄连、姜黄；白色：白芷、白藓皮、白芨、山药；褐色：赭石；蓝色：青黛；杂色：五花龙骨。（4）表面特征：指药材的表面（包括外表面和内表面、上表面和下表面）所能看到的特征。是否光滑是否粗糙有无皮孔有无毛茸有无鳞叶其它附属物有无纹理有无褶皱有无槽沟有无节等第四节毛茸（辛夷）钩刺（苍耳子）纵皱纹（桔梗）环纹（防风）光滑（相思子）防风蚯蚓头皮孔地衣斑块钉状物（皮刺）石菖蒲（毛鳞状叶基）贯众（叶柄残基）白花前胡根头部有叶鞘残存的纤维毛状物黄柏的栓皮乌梅的皱纹纹理王不留行的雕纹大黄的锦纹“松泡”表示质轻而松，断面多裂隙，如南沙参。“粉性”表示含有一定量的淀粉，折断时常有粉尘散落，如山药。5

质地：是指用于折试药材所感知到的特征。描述质地的各种术语，均有一定含义。南沙参山药第四节“黏性”表示具黏液质，如石斛嚼之则显黏性。“油润”表示其质地柔软，含油而有润泽，如熟地黄“糟”表示枯朽，呈朽木状，如川木香。熟地黄石斛川木香第四节“角质”表示质地坚实，断面且呈半透明状或有光泽（常因含多量淀粉，蒸煮时致使糊化而成），如法半夏。“柴性”表示纤维性强，木质成分较多，折之如柴，敲之作响，如桑白皮。法半夏桑白皮第四节南沙参（松泡）防风（松泡）当归（油润）郁金（角质）杜仲（胶丝）黄柏（纤维性）鸡血藤（6）断面特征：包括自然折断面和刀横切(或削)的平面。

是否易折断，有无粉尘及断面特征1．自然折断面（1）平坦：主要由薄壁细胞组成（牡丹皮）（2）颗粒状：富含石细胞（肉桂）（3）纤维状：纤维束（桑白皮、合欢皮）（4）裂片状：纤维束+薄壁细胞（苦楝皮、黄柏）2．横切面：（1）与形状相关的术语川芎切片“蝴蝶片”；枳壳“翻口似盆状”（2）与组织构造相关的术语粉防己“车轮纹”；黄芪“菊花心”－正常维管组织何首乌“云锦纹”；大黄“星点”；商陆“罗盘纹”；川牛膝“筋脉点”－异常维管组织；苍术“朱砂点”-油室；槟榔“槟榔纹”（大理石状花纹）-错入组织（6）断面特征：包括自然折断面和刀横切(或削)的平面。苦楝皮（多层薄片）牡丹皮（平坦）大黄（星点）何首乌（云锦花纹）菊花心车轮纹朱砂点川芎（蝴蝶片）枳壳（翻扣似盆状）商陆（罗盘纹）（6）断面特征：包括自然折断面和刀横切(或削)的平面。“菊花心”：指根或根茎的横切面的中心部位具有类似菊花瓣状的放射状纹理，如黄芪。“车轮纹”：指药材的断面纹理呈车辐状，如防已。

第四节（6）断面特征：包括自然折断面和刀横切(或削)的平面。“油点”：指具有红色或红棕色油室或油细胞，如当归.“星点”：指大黄髓部的异型复合维管束，如大黄。

第四节（6）断面特征：包括自然折断面和刀横切（或削）的平面。“霜”或“毛”：指药材析出的结晶，如茅苍术。“云锦花纹”：指何首乌的花朵状纹理(异型复合维管束，存在于皮层)，如何首乌。“金井玉栏”：指某些根类药材断面浅棕黄色的形成层环与类白色的皮部，如桔梗。第四节羌活白芷防己莪术大血藤槟榔鸡血藤何首乌大黄（7）气：药材的气是由于含有挥发性物质的缘故，有些药材的气十分特殊，可作为鉴别的主要依据。如阿魏具强烈的蒜样臭气；白藓皮有似羊膻气；

白藓皮第四节气味：无：石膏、珍珠微：山药清香：大黄、牛黄、熊胆、冰片芳香：八角茴香、蜂蜜香烈：肉桂、砂仁、麝香臭：九香虫、紫草、芜荑、蜘蛛香特殊气味羊膻味：白藓皮、羊红檀焦糖气：黄精腥味：紫河车蒜臭：薤白、雄黄、阿魏苯甲醛臭：丹皮硫臭气：硫磺党参臭：桔梗科药材鸡屎臭：鸡屎藤樟脑臭：大关木通（粗皮摩擦）打嚏：蟾酥、猪牙皂（8）味：是用味觉来识别药材，又称尝法。如五味子，甘草。药材的味也是评价质量的标准之一。黄连、黄柏以味越苦越好；乌梅以酸质量为佳。第四节味道：淡：石膏酸：乌梅、山楂、木瓜甘：龙眼肉、党参、桂圆肉麻：细辛辛、辣：干姜刺喉：半夏、南星咸：大青盐苦：龙胆、鸦胆子、黄连、穿心莲五味：五味子涩：五倍子苦涩：大黄苦而回甜：牛黄、熊胆吸舌：龙骨、竹黄粘性：黄精、玉竹、茯苓凉：薄荷、冰片砂砾感：大黄、地枫（9）水试：利用某些药材在水中产生各种特殊的变化来鉴别药材。第四节如红花水浸泡后，水液变成金黄色，其花色不褪。如苏木投入热水中，呈鲜艳的桃红色透明溶液。番红花：水浸泡后，水液染成金黄色；沉香：进口沉香放入水中下沉，浮在水面的一般为国产沉香葶苈子、车前子：加水浸泡，种子变粘滑，且体积膨胀；胖大海：加水浸泡膨大成海绵状，可达原体积的6～8倍；苏木：投热水中，水显鲜艳的桃红色；血竭：浮于水面，加热软化但不溶解，水不染色；菟丝子：加热至种皮破裂，露出白色卷旋状的胚，形如吐丝；牛黄：挂甲。秦皮：水浸出液在日光下可见蓝色荧光。（10）火试：是指用火烧、煅药材，观察所产生的现象，以鉴别药材。血竭粉置白纸上，火烤即熔化，色泽鲜红如血，透明无残渣。海金沙点燃发出爆鸣声及闪光，可区别相似品松花粉及蒲黄。第四节麝香：火烧有轻微爆鸣声，起油点如珠，似烧毛发但无臭气，灰为白色；海金沙：点燃产生爆鸣声及闪光；血竭：于锡纸上加热，融化后色鲜红如血而透明，且无残渣；珍珠：火烧有爆裂声，呈层状破碎，内外色泽一致，无气味；朱砂：用1根火柴挑朱砂粉末少许，用另1根火柴点燃有药末的火柴，可见到焦火柴杆上细小的水银球；青黛：燃烧时产生紫红色烟雾，并产生草腥气。

显微鉴定法就是利用显微镜、显微技术及显微化学方法等对中药进行分析鉴定，以确定其真伪、纯度、品质以及鉴别依据。三、显微鉴定法第四节显微鉴定的内容分类：1.组织鉴定：

（1）完整药材的鉴别（性状特征不明显)；

（2）外形相似而组织构造不同的类似品、混淆品、代用品、伪品）；（3）多来源药材的对比鉴别；（4）确定某种化学成分的存在部位。2.粉末鉴定：

（1）粉末药材；（2）外形较大，难以制作组织切片，或组织构造无鉴别意义，而粉末具有显著的特征的药材；

（3）已经破碎，性状鉴定难以区分的药材；

（4）中成药，如丸、散、片、胶囊等粉末制剂。横切片：观察组织的排列特征。

纵切片：观察茎木类中药的某些细胞组织。

磨片：坚硬药材如骨、贝壳类。1显微标本片的制备永久制片半永久片临时制片分类粉末片：多用于观察组织碎片、细胞及后含物等。解离组织片：观察某些细胞的形状，如纤维等。表面片：观察叶、花、全草、果实和种子表面特征。第四节（一）粉末制片法

1．粉末的制备选取有代表性的样品适量，剪成约0.1cm的小段置50-60℃的烘箱中干燥(含挥发油的药材温度应更低，控制在30-40℃)，然后用粉碎器粉碎，粉末过40—80目筛，中成药则应过100目筛，置干净瓶中备用。制备粉末时应注意不得有其他杂物混入，样品应全部过筛，不得留有残渣，过筛后的粉末需充分混匀方可装片。常用显微制片方法（一）粉末制片法

2．制片方法根据需要不同，可作成临时或永久制片。

(1)临时制片作临时观察用，随用随制，通常仅能保存1-2天。不经任何处理。直接用封藏液装片后即可观察，常用的封藏刑有以下几种：①水常用蒸馏水。用于观察淀粉粒等多糖类物质，但易引起淀粉粒膨胀变形，欲测淀粉粒大小时则不宜用水作封藏剂。②稀甘油用于观察糊粉粒、淀粉粒及其他多糖类物质，为显微制片中最常用封藏剂。常用显微制片方法（一）粉末制片法③50％甘油酒精适用范围同前，透明度较前者强；斯氏液(甘油醋酸液)专用于观察淀粉粒的形态，是目前观察淀粉粒最理想的封藏剂。可使淀粉粒保持原来的状态而不膨胀变形，便于测定其大小。

④乙醇主要用于观察菊糖及橙皮苷结晶。因乙醇极易挥发，故装片后应立即观察、放置稍久则乙醇挥发，产生大量气泡。

⑤水合氯醛一般作为透明剂，在观察菊糖时，用其作为封藏液，不加热，装片后立即观察，往往能得到比乙醇装片更为理想的效果。常用显微制片方法（一）粉末制片法在此特别值得一提的是水合氯醛透化片。用水合氯醛加热处理可除去粉末中所含的淀粉粒、叶绿素、树脂、蛋白质、油脂、色素、挥发油等物质，并使细胞膨胀、透明，以利于细胞及组织的观察。这种方法用途广、效果好、操作简便。具体方法为：取水合氯醛溶液1-2滴于载玻片上，挑取粉末少许，混匀，于酒精灯上微热透化，并以解剖针搅拌，补充2-3次水合氯醛溶液(勿使溶液蒸干)，透化好后加稀甘油1-2滴混合，盖片，清除盖玻片周围多余的药液即可。常用显微制片方法（一）粉末制片法（2）特殊处理制片①漂白若粉末中色素太多，色泽太暗，不便观察时，可预先用漂白剂浸渍处理，再以沸水及冷水洗涤，离心分离，然后挑取粉末适量，按前述方法制片。常用的漂白剂有过氧化氢、氯化碱液(由碳酸钠与漂白粉混合而成)等。常用显微制片方法（一）粉末制片法（2）特殊处理制片②脱脂一些含脂肪较多的中药(如种子类中药)，即使用水合氯醛透化也不便观察，可预先进行脱脂，然后再按一般方法制片观察。脱脂的方法有两种，一种是将粉末放于两层滤纸间挤压以除去油脂；另一种是将粉末用某些溶媒如氯仿、乙醇和乙醚的混合液等浸渍处理。常用显微制片方法（一）粉末制片法（2）特殊处理制片③解离若粉末中木化组织较多，细胞彼此不易分离时，可用5％氢氧化钾浸泡几小时或在水浴中加热浸渍，使组织崩解后再制片观察。常用显微制片方法（一）粉末制片法(3)永久制片粉末永久制片方法较多，这里仅简单介绍离心管操作法制片。①脱水取粉末0.3-0.5置离心管中，分步加入各级浓度的酒精进行脱水，每步3分钟，用细玻棒搅拌，每次均用离心机沉淀，倾去酒精液。各级酒精浓度依次是30％、50％、70％。常用显微制片方法（一）粉末制片法（2）特殊处理制片

②染色于70％酒精脱水后的粉末中加入番红染色剂，搅匀，染30min。若为单子叶植物药材或叶类、花类药材，因其机械组织及输导组织不发达，可将染色时间缩短为10-15min。离心分离，去上层染液，沉淀用70％酒精洗涤。染好色的粉末逐步用80％、95％、100％的酒精脱水，每步5min。常用显微制片方法（一）粉末制片法（2）特殊处理制片

③透明与封片粉末逐步用25％、50％、75％、100％的二甲苯透明，每步3min，搅拌、离心分离。去上层二甲苯液，迅速加入加拿大树胶(预先用二乙苯溶化好)约0.5-1ml，用玻棒搅拌均匀。用吸管吸取一滴于裁玻片上，加盖玻片封藏，并贴上标签，低温防尘干燥即可。常用显微制片方法（二）徒手切片法

徒手切片法主要用于临时制片。因切片过程中没有经过复杂的化学处理，可以真实地反映植物细胞、组织的本来面目，在显微化学及一般的结构观察中极为有用。

1切片用具主要有切片

(一般使用普通的剃刀)、培养皿(用于盛片)、毛笔(用于取片)、切片板(木板或玻璃板)、夹持物(夹持物应是坚固而易切的材料，常用的有莴笋、萝卜、土豆等)等。常用显微制片方法（二）徒手切片法

2.材料的软化

对于新鲜的材料，多数无需软化即能进行切片，但中药大都为干材料，切片前必须经过软化处理。软化的方法较多，使用时应根据材料的性质加以选择。主要有热水浸泡法(适用于纤细的根茎及根、全草、叶、花等质软而细薄的材料)、水煮法(适用于较硬的根、根茎、茎木类、皮类等材料)、醋酸煮沸软化法(适用于坚硬的木化程度强的材料)、甘油蒸煮法(也适用于坚硬的木化材料)、湿气密闭法(特别适用于含淀粉粒、菊糖、粘液质等的材料)、氢氟酸软化法(极硬的材料如果实、种子类药材)等。常用显微制片方法（二）徒手切片法

3．切片软化好的材料经分割成适当的大小后即可切片，切片方法主要有：

1)手执法用左手拇指和食指夹住材料，并用中指托着，右手持刀，使刀刃与材料的切面平行，移动右臂，向后斜拉切，不得来回拉切，标本必须一次切下。刀刃及材料切面应经常用水或30％乙醇润湿，切片放入培养皿中。常用显微制片方法（二）徒手切片法

(2)夹持法取夹持物切成适当大小、然后纵向剖开(但不完全切开)，将材料装入，再按前法将夹持物与材料同时切下，除去夹持物即可。本法适用于叶片、花瓣、细小的须根等质软而不便手执的材料。

(3)压切法将材料放于切片板上，以左手中指反食指轻轻压住材料，右手持刀自上面下均匀用力切削。本法适用于细小的果实、种子类以及某些较硬的材料。

4．装片用毛笔挑取透明的薄片(形状并不要求十分完整)，放于载玻片中央，于低倍镜下观察(不用盖玻片)，若切片充分透明，可以看清个别细胞，则取下滴加1—2滴封藏剂或用水合氯醛透化，再加封藏剂，盖上盖玻片即可。常用显微制片方法（三）解理组织制片法（离析法）

解离是利用化学试剂使组织各细胞之间的胞间层溶解，而使细胞相互分离。解离组织制片可用于观察细胞的完整形态和立体结构，特别适用于纤维、导管、管胞等在粉末中易于破碎的长形细胞及木化、栓化、角质化等细胞彼此不易分离的组织的观察。此外，若用逐层解理的方法(解离剂处理至细胞彼此能分开，但整个组织不散架，经逐层分离后分别制片)，还可弄清某些特征存在的部位，如木纤维与韧皮纤维在形态、上有时很难严格区分，但经逐层解离，木质部与韧皮部分别制片，则易将二者分开。常用显微制片方法（三）解理组织制片法（离析法）

目前常用的解理方法有：

1.氢氧化钾法(或氢氧化钠法)本法适用于木化程度较低的柔软材料的解离，解离剂不但可使细胞分离，而且具有透明作用，是目前透明、离析柔软或稍硬材料最简单的方法。对于较硬的材料尚可提高K0H(或NaoH)的浓度到6％-10％，或增长解离时间。

2.硝铬酸法本法适用于木化组织较多或木化组织集结成群的材料。用此法解离的木化细胞壁将不再呈木化反应。常用显微制片方法（三）解理组织制片法（离析法）

目前常用的解理方法有：3.硝酸-氯酸钾法本法适用于木化程度很强的材料，如茎木类、坚硬的果壳或种皮等。此法离析过程中有氯气散出，故应注意防止氯气中毒，整个操作必须在通风橱内进行。4.盐酸-草酸铵离析法此法较为缓和，适用于草本植物的髓、薄壁组织、叶肉组织等的解离。将分割好的材料放入3：1的70％或90％酒精和浓盐酸混合液中浸24h，然后用水洗涤，放入0.5％草酸铵水溶液中，时间随材料性质而定，到用玻璃棒轻压即散为度，取山水洗3-5次，稀甘油装片观察。常用显微制片方法（四）整体封固法

本法适用于扁平而薄或小的材料，如叶的表皮、花瓣、花粉粒、孢子以及藻类、菌类、纤细的苔藓等，根据需要可作成临时制片或永久制片。

1.临时制片取材料适量，表皮、花瓣等较宽的材料应切割成适当大小的，放于载玻片中央，加1-2滴稀甘油或先经水合氯醛透化处理后再加稀甘油，封片观察。

2.永久制片根据脱水剂、透明剂、封固剂的不同而有多种方法，这里仅介绍两种。常用显微制片方法（四）整体封固法

2.永久制片

1)甘油法将材料放于载玻片中央，加一滴纯甘油(甘油不可过多)，盖上盖玻片，用较稠的加拿大树胶沿盖玻片四周封边即可。

2)冰醋酸法(孢粉制片法)此法为孢子和花粉粒的一般制片方法。分别用冰醋酸和醋酸与硫酸的混合液处理过孢子和花粉粒，其内容物溶解，外壁及孔沟更加清晰。视情况可制成临时或永久制片。常用显微制片方法（五）表面制片法本法属于整体封藏法的一种，比较常用。

1.撕取法一般用于表皮易于剥离的叶的表皮制片。

2.削取法对于表皮难于剥离的材料如多数植物叶的上表皮茎的表皮等，可采用此法。

3.解离法主要用于表皮不易剥离的叶的表面制片。4.整体造化封固法适用于扁平而薄，难于撕取表皮的叶片、花被片等的表面制片。（六）涂片法及压片法此法是将材料涂抹或压成一均匀的薄层，再作成临时或永久制片，日前主要用于细胞遗传学方面的研究，在中药显微鉴定中也有应用，如浆果果肉的制片。常用显微制片方法通过观察生物药的组织构造特征来达到鉴定目的。主要用于个体较小的完整药材鉴别。2显微鉴定的主要内容组织鉴定粉末鉴定显微常数显微化学显微定量组织鉴定第四节通过观察生药的细胞、内含物和颗粒物质的性状特征来达到鉴定的目的。粉末鉴定用于粉末药材、外形较大或组织构造无鉴别特征的药材、破碎药材、粉末性的中成药。用途第四节主要有用于植物的叶类中药鉴别的栅表细胞比、气孔数、气孔指数、脉岛数和脉端数等。物理常数测定用显微化学反应来检查中药中细胞壁和细胞内含物的化学物质的性质来达到鉴定的目的。显微化学鉴定第四节——显微化学反应：主要用于药材的临时切片或粉末，主要进行：细胞壁的鉴别：如木质化细胞壁、木栓化细胞壁等。各类成分的鉴别：如多糖类（淀粉、菊糖、粘液等）、蛋白质、脂肪油、鞣质、草酸钙、碳酸钙结晶、生物碱等。——显微定位：就是用显微化学的方法确定药材中化学成分的存在部位(有效部位)，以此鉴定药材的质量和品种。基本要求：有效成分明确，选择有效成分具有的特殊反应。使之产生颜色或结晶，确定有效成分存在部位。具体方法：

第四节定义方法直接将生药切片或粉末置载玻片上，滴加试液，加盖玻片在显微镜下观察产生的结晶、沉淀或颜色。生药的提取物置载玻片上，滴加试液，加盖玻片在显微镜下观察反应。显微化学定位显微化学反应⑴切片：①绵马贯众切片＋1％香草醛醇溶液.浓硫酸→（镜检）细胞间显红色（绵马酸及黄绵马酸类）②香加皮＋冰醋酸.硫酸→（镜检）皮层及射线细胞显黄色，在紫外灯下显黄绿色荧光（4－甲氧基水氧醛）。③穿山龙＋冰醋酸.硫酸→（镜检）木栓层及中柱外侧组织呈紫红色（穿山龙皂甙的反应）④穿心莲叶＋3.5—二硝基苯甲酸（1克3.5—二硝基苯甲酸溶于50ml甲醇中，再加入2N氢氧化钾溶液50ml用时新配）3—4滴→（镜检）叶肉显红或紫红色（五元不饱和内酯环的反应）。⑤浙贝母＋碘试液→表皮一圈仍为白色，其余显蓝紫色（检查淀粉）。⑥苦参＋氢氧化钠试液→（镜检）栓皮显橙红色，渐为血红色，久置不消失木部不现色（色素）。⑦胡黄连＋无水乙醇：浓硫酸溶液1滴→（镜检）可见木栓、栓内侧、皮层显黄绿色或蓝绿色（皂甙的定位反应）。⑵粉末：①肉桂用氯仿浸渍→浸液＋2％盐酸苯肼→（镜检）黄色针状、杆状结晶（桂皮醛）②黄连用乙醇浸渍→＋30％硝酸或盐酸→（镜检）黄色针簇状结晶（检查小檗碱）。③胡椒粉末用乙醇浸渍，浸液稍干后加水封藏→（镜检）可见盖玻片边缘处产生针状结晶（胡椒碱）。④甘草粉末＋80％的硫酸（于白磁板上）→显橙黄色（甘草甜素的反应）。⑤槟榔粉末＋稀硫酸1滴，再加水3－4ml→微热几分钟，取滤液于载物片上＋碘化铋钾试液→（镜检）混浊。放置片刻，可见石榴红色球形或方形结晶（槟榔碱的反应）。(3)浸出液试验法（显微结晶法）：用药材粗粉＋适量试剂浸渍，吸取浸液于载物片上，加试剂后封藏、镜检，产生不同形态及颜色的结晶。①丁香＋氯仿浸渍→浸液于载物片上＋3％氢氧化钠的氯化钠饱和溶液→（镜检）簇状细针形结晶（丁香酚）。②天仙子＋乙醚及氨试液浸渍→浸液于载物片上＋碘化铋钾试液→（镜检）显黄紫色飞鸟状结晶（莨菪碱结晶）。③黄藤＋乙醇浸渍→浸液于载物片上＋30％的硝酸或盐酸→（镜检）可见黄色断棒状结晶（小檗碱）。微量升华法：生药中某些成分在一定温度下可以升华，镜检升华结晶及其形态鉴别生药。必要时用熔点测定仪测其熔点或用化学反应法进一步确定其成分种类。在升华器中加入少许的生药粉末，勿要超出升华器的面，上面放一干净的载物片，下面以酒精灯加热，待玻片下凝结有升华物时，停止加热，取下玻片反过来放置，待放凉后在置于显微镜下直接观察。若无升华器时，可用两张载物片中间以两根火柴棒隔开，期间放少许粉末，也可获得同样的效果。①大黄（升华）→可见黄色梭针状、羽毛状结晶。若加氢氧化钠试液，结晶消失并显红色（蒽醌类化合物）。②胡黄连（升华）→针状、针簇状、棒状、板状结晶或球状结晶（香荚酸及桂皮酸）③徐长卿（升华）→柱状、针状、羽毛状结晶。若加三氯化铁溶液，结晶消失并呈暗紫色（牡丹酚）。④麻黄（升华）→微细针状或颗粒状无色晶体（麻黄碱）。⑤鹿衔草（升华）→无色羽毛状结晶。若加三氯化铁溶液，则显示紫色（对苯二酚）。⑥斑蝥（升华）→白色柱状、棱状结晶。若加碱液，则结晶消失，若再加盐酸，结晶复出（斑蝥素）。⑦龙脑冰片（升华）→棒状或多角形结晶（右旋龙脑）。⑧补骨脂（升华）→针状、簇针状结晶（香豆精类）。利用显微镜及显微测量的某些手段，对一定重量单味药材粉末中的某些显微特征数量进行分析，或测定粉末性中成药中某个组分百分含量的一种方法。显微定量本法亦适用于粉末中药混存物的含量测定。显微定量分析主要用于解决采用理化方法难以控制中药质量的一些问题。用途基本要求及方法第四节需定量的药材应呈细粉状态，被测目的物一般需具备2个条件：一是应轮廓清晰、可以计数的颗粒。二是应易于检识且遇常用的显微化学试剂和封藏剂不发生形态变化。定重量、定面积法：该法是一种直接定量的方法。比率计数定量法：“石松子法”。第四节3显微特征的观察与描述一般描述方法粉末特征描述细胞形状描述组织排列描述大小的描述颜色的描述数量的描述先多数后少数先特殊后一般先感观后测试第四节4电子显微镜鉴定技术电子显微镜主要分为透射电镜和扫描电镜两大类。在中药鉴定工作中常使用扫描电子显微镜或分析电子显微镜。特点适用范围自学自学第四节此处讲述根、茎、叶、花、果实、种子、全草、菌类、矿物、动物类解剖鉴别要点。

理化鉴定法就是利用中药中存在某些化学成分的化学性质和物理性质，通过化学的、物理的或仪器分析的手段，鉴定其真伪、纯度、内在质量，以及有害物质的有无或含量多少。四、理化鉴定法第四节1理化鉴定的应用范围2理化鉴定的一般方法就是根据中药具有的各种特殊成分的理化性质，进行的真伪鉴别。包括物理分析法、化学分析法和物理化学分析法。就是根据中药含有的功效成分或主要成分，测定其相对的含量，本法主要用于中药的质量评价和纯度检查。定性鉴别定量鉴别第四节一、微量升华的原理及方法二、在鉴定中的应用2023/3/26139大黄微量升华——针晶大黄微量升华——羽毛状结晶利用生药含有蛋白质带电荷的成分，在同一电场作用下，由于各组分所带电荷的性质、电荷数目以及分子质量不同，而泳动方向和速度不同，在一定时间内，各成分的泳动率不同，结合谱带数和染色不同达到鉴定的目的。利用某些化学试剂能与中药中的某种或某类化学成分产生特殊的气味、颜色、沉淀或结晶等反应，来作为鉴别真伪的手段。电泳分析法化学定性分析第四节生药的化学定量分析是通过对中药含有的某种有效成分、有效部位、杂质或有害物质的含量测定，来控制中药质量的一种方法。生药化学定量分析通常包括重量分析法和容量分析法两大类。化学定量分析第四节它是通过测定中药中被测物质在某些特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。药品分析一般用200～400nm的紫外光区；400～850nm的可见光区；2.5～15μm(或按波数计为4000～667cm-1)的红外光区。光谱鉴定法紫外光谱法：利用中药所含组分的不饱和程度及含量差异，导致紫外光谱峰位和峰强的差别来鉴定。第四节可见分光光度法：利用中药溶液颜色对光的吸收度，以鉴定某种成分或组分含量的方法。红外光谱法：通常测定中药粉末、提取物或化学单体的红外曲线反映中药所含各组分官能团的差异。原子吸收光谱法：用于中药中无机元素和杂质检查。第四节荧光光谱法:利用生药中的某些成分在吸收自然光或紫外光后能发生荧光的性质，对生药及其所含成分进行鉴定的一种方法。例如：黄连饮片显黄色荧光；浙贝母粉末显亮淡绿色荧光；大黄粉末显深棕色荧光。荧光效率主要与物质的结构有关，具有π-π共轭结构的物质才能产生较强的荧光，共轭结构加长，荧光增强。含有黄酮、恩醌、香豆素、木脂素成分的生药，一般具有较强的荧光反应。第四节荧光分析法在生药鉴定中的应用定性分析紫外分析仪法1、观察生药整体2、观察生药的新鲜断面或饮片3、观察生药粉末4、直接观察生药的某种溶剂浸出液5、将生药提取液滴于滤纸上，挥干溶剂观察6、生药提取液与化学试剂作用后产生荧光7、多重观察

日光法荧光显微镜法荧光光谱法定量分析：荧光分光光度法、薄层荧光扫描法荧光定量分析：利用被测物质的荧光强度和溶液浓度成正比的关系，对中药所含的成分进行含量测定。含有黄酮、恩醌、香豆素、木脂素成分的生药，一般具有较强的荧光反应。色谱鉴定法柱色谱法纸色谱法薄层色谱法薄层扫描法毛细管相鉴定法气相色谱法高效液相色谱法质谱鉴定法核磁共振光谱鉴定法热分析法色谱光谱联用分析法X射线衍射法聚类分析法第四节薄层色谱操作：选择吸附剂制备薄层板点样定性参数的选测定显色展开（比移值Rf、相对比移值Rst）应用：定性分析定量分析薄层色谱法

以Rf做定性的依据，因影响Rf因素多，需用标准对照品作对照。在两种或两种以上展开系统种展开，若样品中斑点的Rf值与标准对照品的Rf值匀相同可基本肯定二者为同一化合物。定性鉴别用标准物质对照别标准对照品对照药材用相对比移值鉴别用文字描述鉴别

原点中心至斑点中心的距离Rst=

原点中心至参考物质斑点中心的距离定量鉴别分两类：一是将待测物从薄层板洗脱后，选择适宜的方法测定（洗脱法）；二是薄层展开后，用薄层扫描仪在薄层板上测定被分离组分的含量（薄层扫描法）。洗脱法分四步进行：待测组分的分离斑点定位斑点的收集及洗脱测定（多采用UV及可见光分光度法）薄层扫描法：波长的选择（样品波长、参比波长）测定方式的确立（透射、反射、荧光）扫描方式（直线式、锯齿式）标准曲线线性化（与散射参数有关，硅胶薄层板SX=3，氧化铝薄层板SX=7）定量前需考察的主要内容：工作曲线、精密度、准确度测定方法：外标一点法，外标二点法。HPLC

可用于定性和定量，色谱图中各色谱峰的保留时间、色谱峰相对百分峰面积及主要色谱峰的UV吸收光谱，均可作为生药真实性鉴定的指纹资料。是生药及制剂质量分析常用的方法。GC主要用于含挥发性成分的定性和定量。用于鉴定的数据主要是保留时间、相对百分峰面积。常常和质谱联用，快速鉴定成分电泳法带电质点（分子、离子或胶体颗粒）在电场作用下，向着与其所带电荷相反的电极移动，称为电泳。应用：生物学和生物化学领域。生药中主要用于氨基酸、多肽、蛋白质、核酸等。免疫鉴定法细胞生物学鉴定法生物效价测定法纯指标测定法DNA遗传标记鉴定法mRNA差异显示鉴定法

五、生物鉴定法利用生药或其所含的化合物对生物体的作用强度，以及用DNA特异性遗传标记特征和基因表达差异等来鉴别生药的品种和质量的一种方法。第四节生药中含有过量的水分，不仅易霉烂变质或使有效成分分解，还会使应用称量上相对地减少了实际用量而不能达到治疗目的。控制中药中的水分含量对于保证中药质量有密切关系。第三节生药的常规检测项目一、水分测定1意义第五节烘干法：适用于不含挥发性成分生药的水分测定。甲苯法：适用于含挥发性成分生药的水分测定。减压干燥法：适用于含有挥发性成分贵重生药的水分测定。气相色谱法：含水量的计算采用外标法。红外干燥器：可快速测定生药的含水量，直接读出干燥失重的数量，方法简便，但有一定的误差。2方法第五节适用于有效成分尚不清楚或有效成分尚无精确定量方法的生药的质量控制。生药中的成分在水、不同浓度的乙醇或醚中，其浸出物的含量大致有一定的范围。因此测定生药浸出物的含量，对于控制生药质量具有实际意义。二、浸出物测定1意义第五节水溶性浸出物测定：分冷浸法和热浸法（%）。醇溶性浸出物测定：参照水溶性浸出物测定法测定（热浸法须在水浴上加热）。醚溶性浸出物测定：利用脂肪提取器（索氏提取器）进行，用乙醚为溶剂。2方法第五节将生药粉碎加热，高温炽灼至灰化，则细胞组织及其内含物灰烬成为灰分而残留，由此所得的灰分称为“生理灰分”。各种生药的生理灰分应在一定范围以内，所测灰分数值高于正常范围时，说明有其他无机物污染和掺杂。测定灰分的目的是限制生药中的泥沙和杂质的含量，以保证生药的纯度。三、灰分测定1意义第五节总灰分测定：供试品粉碎，先炭化，再使完全灰化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中含灰分的含量（%）。酸不溶性灰分测定：取总灰分测定项所得的灰分，加稀盐酸置水浴上加热后，用无灰滤纸滤过。根据残渣重量，计算出供试品中含酸不溶性灰分的含量(%)。2方法第五节利用生药中所含挥发油成分能与水蒸气同时蒸馏出来的性质，在特制的挥发油测定器中测定其含量。四、挥发油测定1原理甲法：相对密度在1.0以下的挥发油测定方法。直接用挥发油测定器测定。乙法：相对密度在1.0以上的挥发油测定方法，在测定器加入二甲苯。2方法第五节第六节1、黄曲霉毒素的分析2、农药残留量的检测生药中有机氯