(2.19)-第十五章病毒感染的检查方法与防治原则

第二十四章病毒感染的检查方法与防治原则重点难点重点病毒培养标本采集与处理原则病毒分离培养方法病毒在培养细胞中的增殖指标病毒感染特异性预防方法难点病毒鉴定技术病毒感染的诊断方法第一节病毒感染的检查方法目录一、标本的采集与处理二、病毒的分离培养与鉴定三、病毒感染的诊断原则基本与细菌相似，但应注意：

1.发病早期或急性期采集

2.污染标本用“双抗”或两性霉素B处理

3.低温保存，尽快送检

4.血清学诊断采集双份血清（早期和恢复期）一、标本的采集与处理病毒病原学诊断的金标准，不适用于临床诊断，适合于实验室研究和流行病学调查1.动物接种2.鸡胚培养3.细胞培养二、病毒的分离培养与鉴定（一）病毒的分离培养1.动物接种目前较少应用应用：无敏感细胞培养的病毒、狂犬病病毒、乙型脑炎病毒2.鸡胚培养一般选用孵化9～14d鸡胚卵黄囊接种：乙脑病毒羊膜腔接种：流感病毒初次分离尿囊腔接种：流感病毒传代培养绒毛尿囊膜接种：天花、牛痘、疱疹病毒3.细胞培养（1）细胞分类根据细胞生长方式单层细胞培养悬浮细胞培养根据细胞来源、染色体特征及传代次数原代细胞----敏感性高但来源困难二倍体细胞----多次连续传代会出现细胞老化和衰亡传代细胞系---对病毒敏感性稳定，便于保存常用鉴定方法：形态学鉴定：电子显微镜血清学鉴定：用已知抗体鉴定病毒种、型和亚型。常采用免疫学方法分子生物学鉴定：主要检测病毒核酸。主要方法有核酸扩增、核酸杂交、基因测序等（二）、病毒的鉴定（二）、病毒的鉴定3.病毒在细胞培养中的鉴定细胞病变效应（CPE）：细胞聚集、融合、坏死、脱落溶解或形成包涵体等红细胞吸附：包膜上带有血凝素的病毒感染细胞后，宿主细胞膜表达病毒血凝素，与加入的脊椎动物红细胞结合。若预先加入相应抗体，则能中和细胞膜上血凝素，称为红细胞吸附抑制试验。干扰作用：抑制其后加入病毒的增殖，阻抑后者特有的CPE细胞代谢改变：pH值改变1.50%组织细胞感染量（TCID50）测定病毒系列稀释后接种于单层细胞，培养后观察CPE，以感染50%细胞的最高稀释度为判定终点，判断病毒的感染性和毒力。2.红细胞凝集试验----血凝试验将含有血凝素的病毒接种于鸡胚或细胞后，收集鸡胚羊膜腔液、尿囊液或细胞培养液，加入动物红细胞后出现红细胞凝集的现象。（三）病毒数量和感染性鉴定3.空斑形成试验将适量稀释的病毒悬液接种于敏感单层细胞中，经一定时间培养后，由于病毒增殖使感染细胞溶解脱落，形成肉眼可见的空斑。一个空斑是一个病毒增殖所致，计数空斑数可推算样品中活病毒数量，通常以每毫升病毒液的空斑形成单位表示，PFU/ml。1.形态学检查电镜检查病毒颗粒，光镜检查病毒感染细胞2.病毒成分检测：病毒蛋白抗原（ELISA/IF/RIA）、病毒核酸(PCR/northernblot/southernblot/genechip)3.血清学诊断中和试验血凝抑制试验特异性IgM抗体检测（三）病毒感染的诊断第二节病毒感染的特异性预防目录一、病毒感染的特异性预防二、病毒感染的治疗1.人工主动免疫以病毒抗原刺激机体，使其主动产生抗病毒免疫应答，预防疾病。常用生物制品：灭活疫苗(狂犬病疫苗、HAV)、减毒活疫苗（流感、麻疹）、亚单位疫苗（去除与激发保护性免疫无关的成分）、基因工程疫苗(乙肝)、重组载体疫苗（HAV/HBV）、核酸疫苗（DNA疫苗）等。2.人工被动免疫给予机体特异性免疫产物，如免疫球蛋白（人血清丙种球蛋白）、细胞免疫制剂（IFN/IL/TNF/CSF）。一、病毒感染的特异性预防1.抑制病毒生物合成的药物抑制病毒基因的转录和复制：核苷类药物---碘苷、阿昔洛韦、阿糖腺苷等；非核苷类药物---奈韦拉平蛋白酶抑制剂：沙奎那韦干扰素及诱生剂---polyI:C、甘草甜素、芸芝多糖2.整合酶抑