外周血内皮祖细胞在烟雾病患者中的表达及出血型烟雾病患者血管重建术后的长期随访

外周血内皮细胞在烟雾患者中的表及出血型雾病患者血管重建术的长期随访第一部分内皮祖细胞在烟雾病患者中的表达研究背景及目的烟雾病(moyamoyadisease,MMD)是一种慢性进展性脑血管疾病其特征性表现为双侧颈内动脉末端和(或)大脑中动脉、大脑前动脉起始端狭窄或闭塞并在脑底部伴有代偿形成的异常血管网,即烟雾状血管病目前发病机制不详烟雾状血管的形成可能与内皮祖细胞的数量及功能相关,但仅有少量研究报道了内皮祖细胞在烟雾病中的表达情况,且由于鉴定方法不一,得出的结论相互矛盾。另外,烟雾病的病理特征提示烟雾病的发病可能与内皮损伤有关而目前还没有这方面的研究证实。因此,本研究应用流式细胞检测技术对烟雾病患者及健康志愿者外周循环血中的内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPC)内皮细胞(circulatingendothelialcells,CEC)数量分别进行检测探究烟雾病患者外周血液中EPC及CEC的表达情况,同时与患者的临床资料相结合分析EPC及CEC量的影响因素以期为烟雾病的病因学探索及临床干预提供依据方法外周血标本来源于2016年11月份-2017年5月份我科收治的81例成人烟雾病患者,并收集患者的一般资料,临床症状及影像学资料进行分析,65例成人健康对照组来自健康体检的人群。应用流式细胞检测技术对外周血分离的单个核细胞进行检测对所得数据通过FLOWJO软件进行分析,外周血内皮祖细胞的表面标志定义为CD34brCD133+CD31+CD45dim细胞,外周血循环内皮细胞的表面标志定义为CD34+CD133-CD31brCD45-细胞。结果:烟雾病患者中男性35,女性46,平均年龄±10.5岁其中28

例合并高血压、糖尿病或冠心病病史,临床症状以为首发症状的有例,有15例以脑出血为首发症状,28例以脑梗塞为首发症状2例无临床症状。烟雾病患者外周血中EPC占PBMC(外周血单个核细胞的0.047%±0.036%,健康对照组EPC占PBMC的0.037%±0.016%,二者比较有统计学差异P<0.05)。独立样本的t检验显示EPC与合并疾病负相关,即合并疾病的患者表达水平下降(P<0.05),相关分析发现,EPC与患者年龄显著负相关P<0.01),EPC与患者高密度脂蛋白水平相关(P<0.05)。进一步行多元线性回归分析结果显示水平仅与患者年龄及高密度脂蛋白水平相关雾病患者外周血中CEC占PBMC的±1.16%,健康对照组占PBMC的1.38%±0.78%,二者比较有显著差异P<0.01)。相关分析发现,两类细胞在外周血的表达没有相关性(Pearson数为-0.095;P=0.401)。相关分析发现仅与合并疾病相关(Pearson系数为0.25,P<0.05),与其它因素等均明显相关性。结论:烟雾病患者体内外周血EPC及CEC数量较健康人群明显增高;EPC表达水平与患者年龄及高密度脂蛋白水平相关而CEC表达水平仅与合并基础疾病相关,两类细胞在外周血的表达没有明确相关性;对烟雾病致病机制进行了推测,在致病因素(异常血流动力学改变传感染氧等)作用下,Willis环附近的血管出现内皮损伤内皮损伤后EPC和相关细胞因子介导的自身修复出现失衡或紊乱,导致血管内膜增厚最终形成管腔狭窄甚至是闭塞。第二部分内皮祖细胞与烟雾病血管重建术效果的关系研究背景及目的烟雾病(moyamoyadisease,MMD)是一种原因不明的慢性进展性脑血管疾病,其特征性表现为双侧颈内动脉末端和(或)大脑中动脉、大脑前动脉起始端狭窄或闭塞,并在脑底部伴有代偿形成的异常血管网(通常称为“烟雾血管”),脑血管造影时这

些异常血管网如同喷出的烟雾,由此得名烟雾病。近年来,随着影像技术的发展及对该病认识的提高烟雾病的发病率逐年增高,目前已成为儿童缺血性卒中最常见的原因也是成人缺血性卒中的常见原因之一雾病可导致患者神经功能缺损,严重影响患者的工作和生活质量,给社会带来沉重的负担。目前尚无有效的药物可以治疗烟雾病外科血管重建手术是治疗该病的有效方法,通过血流重建可改善局部脑缺血的状态,缓解临床症状。脑-硬脑膜-动脉血管融通术(encephaloduroarteriosynangiosis,EDAS)为间接血管重建手术的一种,目前已广泛运用到烟雾病的治疗中EDAS术后血流重建的关键因素是颈外动脉系统的供血动脉与颅内的皮层血管之间能否形成沟通的桥动脉,供血动脉通过新生的桥动脉与皮层血管联通从而向颅内代偿供血这个过程中,与血管新生相关的内皮祖细胞(endothelialprogenitor是否发挥了作用目前还尚不明确。本研究采用流式细胞技术检测烟雾病患者体内细胞的表达,同时行内皮祖细胞的体外培养并鉴定,进而分的表达EDAS术后血流重建效果的关系,为EDAS术后血流重建效果提供预后参考。方法外周血标本来源于年6月份-2018年3月份我科收治成人烟雾病患者,并收集患者的一般资料,临床症状及影像学资料进行分析。应用流式细胞检测技术对外周血进行检测对所得数据通过FLOWJO软件进行分析,外周血内皮祖细胞的表面标志定义为CD34brCD133+CD45dimKDR+细胞。同时选取20例烟雾病患者的外周血进行内皮祖细胞的体外培养并进行免疫荧光鉴定所有入组的烟雾病患者均行EDAS血管重建手术治疗,并于手术后6个月返院行全脑血管造影术评估血流重建效果分析血管重建效果的影响因素。

结果:共计116例烟雾病患者纳入到本研究中,73例为女性,患者的平均发病年龄为33.8±15.2岁。首发症状方面,45例(38.8%)患者首次发病表现为TIA发作,52例(44.8%)患者为脑梗塞剩余19例患者为脑出血45例烟雾病患者合并了高血压、糖尿病或冠心病等基础性疾病。全脑血管造影结果显示24例(20.7%)患者为单侧烟雾病,46例(39.7%)患者累及了大脑后动脉。铃木分期方面,1期为4例,2期12例3期21例,4期32例5期26例,6期为21例25患者造影无烟雾状血管网,38例患者有少量的烟雾状血管网,53例患者有大量烟雾状血管网。烟雾病患者外周血中占PBMC(周血单个核细胞)的0.071%±0.050%。20例进行外周血内皮祖细胞培养的标本中,16例患者均培养出克隆的细胞集落,免疫荧光染色提示该细胞集落CD34+CD133CD45dimEDAS术后全脑血管造影复查提示25例(21.6%)患者松岛分级为A,21例(18.1%)患者为B级,70例(60.3%)患者为C级。46例(39.7%)患者手术后血管重建效果一般(gradeA及gradeB),70例患者血管重建效果优秀(gradeC)。血管重建效果优秀组烟雾病患者外周血计数显著高于血管重建效果一般组(0.085%±0.054%VS0.048%±0.034%,P=0.000)年龄、首发症状、铃木分期、异常血管网的数量以及大脑后动脉的累及均与烟雾病患者术后血流重建的效果密切相关(P<0.05)。烟雾病患者外周血数量的多少仅与较小的年龄(P=0.047)和大脑后动脉的累及(P=0.039)切相关。结论:烟雾病患者外周EPC量术后的血管重建效果密切相关,EPC数量越多,手术重建效果越好;较小的年龄及大脑后循环的累及为烟雾病患者

EPC数量的影响因素;临床上可通过动员患者的数量及功能来获得更佳的血管重建效果三部分出血型烟雾病患者血管重建术后的长期随访研究背景及目的:烟雾病(moyamoyadisease,MMD)是一种慢性进展性脑血管疾病,其特征性表现为双侧颈内动脉末端和(或)大脑中动脉、大脑前动脉起始端狭窄或闭塞,同时在脑底部伴有代偿异常血管网的形成。目前该病的病因尚未明确根据患者的主要临床表现可分为脑缺血型和脑出血型。儿童多为脑缺血型,而成年人则脑出血型多见于缺血型烟雾病患者应当积极行血管重建手术治疗,而对于出血型烟雾病是否应当行手术治疗、何时应当行手术治疗用何种术式治疗以及手术能否降低再发脑出血风险等目前尚有争议。本研究对出血型烟雾病患者在行脑硬膜血管融通术(encephaloduroarteriosynangiosis,EDAS)进行了长期随访,以期明确EDAS血管重建手术对于降低患者再发颅内出血风险的效果同时探讨出血型烟雾病患者发生再出血的危险因素。研究方法:本研究纳入了年8月份-2010年1月份于我科收治的95例成人出血型烟雾病患者,所有病人均接受了血管重建手术治疗并定期接受随访所有纳入患者的一般临床资料影像学特征以及长期随访结局都被详细记录并分析。脉络膜前动脉的扩张情况依据全脑血管造影结果进行分级比较出血侧脑半球与未出血脑半球脉络膜前动脉扩张的程度有无统计学差异。依据患者首次发生脑出血的具体位置所有纳入的患者被分为前脑出血组及后脑出血组,应用Kaplan–Meier生存曲线来比较两组患者发生再出血的风险有无统计学差异用Cox比例风险回归模型分析出血型烟雾病患者再发颅内出血的危险因素,纳入分析的因素包括患者首次发病的年龄、性别、合并高血压、合

并高脂血症、合并糖尿病、有吸烟史及或饮酒史、铃木分期、是否合并大脑后动脉受累的情况、脑出血类型、脉络膜前动脉扩张情况及单侧烟雾病等。结果该组患者的平均首次发病年龄为37.1岁(20岁54岁),其中51例为女性患者,44例为男性患者,男女性别比例为1:1.16。95侧发生出血的脑半球中,61侧(64.2%)出现了脉络膜前动脉的明显扩张同时伴有侧枝血管形成,18侧(18.9%)由于颈内动脉的闭塞而导致脉络膜前动脉未显影;而在86侧未发生出血的脑半球中,仅有侧(32.6%)出现了脉络膜前动脉的明显扩张并伴有侧枝血管形成,4侧(4.7%)络膜前动脉未显影。单因素分析提示出血侧脑半球脉络膜前动脉的扩张情况较未出血侧具有显著差异(p<0.01)脑出血患者人数多于后脑出血组57例,60.0%,vs.38例,40.0%)。在平均长达8.5±1.7年的随访时间中,16例(16.8%)患者发生了颅内再出血,7例患者由于再发脑出血而死亡,年平均再发脑出血率为2.2%/人/年脑出血组中有8例(14.0%)患者发生了颅内再出血而后脑出血组中则有8例(21.1%)患者发生了颅内再出血,后脑出血组的年平均再发脑出血率高于前脑出血组,然而Kaplan-Meier生存曲线分析提示两者的差异无确切的统计学意义3.1%vs1.6%,p=0.404)。Cox比例风