【生物课件】动物细胞融合技术与单克隆抗体 课件 高二下学期生物人教版选择性必修3

第二章细胞工程2.2动物细胞工程二、动物细胞融合技术和单克隆抗体实例1：自然条件受精作用一、动物细胞融合技术1970年人工条件下的人-鼠细胞融合实验实例2：人工诱导请同学们快速阅读课本P48页回答以下问题

1.什么是动物细胞融合技术（概念）？原理是什么？2.所形成的杂种细胞有什么特点？3.诱导动物细胞融合的方法有哪些？4.动物细胞融合技术的意义和应用有哪些？1、概念：杂交细胞2、原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性动物细胞融合也称________。是指_____或____动物细胞结合成一个细胞的过程。两个多个单核细胞杂交形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的____细胞，称为________。3、结果一、动物细胞融合技术4.诱导融合的常用方法：什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。诱导方法：物理法：化学法：生物法：灭活的病毒电融合法聚乙二醇（PEG)灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面↓细胞膜被病毒颗粒穿通↓细胞膜连接↓细胞核融合，形成杂交细胞用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：5、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。（1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。6、应用：(2)特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。处理方法诱导手段结果原理请同学们看图对比动物和植物细胞融合的异同：7、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导融合方法用途（结果）获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、电融合）化学（聚乙二醇等）物理、化学方法（同左）灭活的病毒制备单克隆抗体

抗原动物体内刺激浆细胞抗体抗原不纯抗体不纯传统抗体制备方法及缺陷缺陷：产量低、纯度低，

且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？阅读课本并思考：科学家发现B淋巴细胞有什么特点？怎样才能获得大量的单一抗体？体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖问题１：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的问题２：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备科学家发现：１.体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上２.每个B细胞只分泌一种特异性的抗体单克隆抗体克隆

一个B淋巴细胞

细胞群抗体遗憾：癌细胞动物细胞融合B淋巴细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞培养单克隆抗体杂交瘤细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验阅读课本P48-49,了解单克隆抗体的制备过程一个大胆的猜想1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖注射特定的抗原多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合①未融合的细胞②多种杂交细胞（包括B-B细胞、瘤-瘤细胞、杂交瘤细胞）动物细胞融合单克隆抗体制备的过程获得产生相应抗体的B淋巴细胞物理:电融合法化学:聚乙二醇

生物：灭活的病毒①未融合的细胞②多种杂交细胞杂交瘤细胞用特定的选择培养基第一次筛选已知细胞合成DNA有D（全合成途径）和S（补救途径）两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的

成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。氨基蝶呤已知细胞合成DNA有D（全合成途径）和S（补救途径）两条途径，全合成途径是由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，途径能被氨基蝶呤（A）阻断。补救合成途径是在次黄嘌呤（H）和胸腺嘌呤（T）存在的情况下，经过转移酶和激酶的催化合成核苷酸，进而合成DNA。所用的骨髓瘤细胞缺乏转移酶而不能通过补救合成DNA。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的

成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。氨基蝶呤①未融合的细胞②多种杂交细胞杂交瘤细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞用特定的选择培养基第一次筛选克隆化培养、抗体检测第二次筛选（可进行多次）多孔细胞培养板怎样二次筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞？将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗体结合的培养孔为阳性孔抗体检测板专一抗体检测呈阳性多孔细胞培养板①未融合的细胞②多种杂交细胞杂交瘤细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内（体内培养）体外培养获取单克隆抗体从小鼠腹水中从细胞培养液中动物细胞培养用特定的选择培养基第一次筛选克隆化培养、抗体检测第二次筛选（可进行多次）两次筛选的目的：第一次筛选：___________________________筛选出杂交瘤细胞第二次筛选：______________________________________筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞最终筛选杂交瘤细胞特点：__________________________________既能无限增殖又能产生特定抗体。杂交瘤细胞具有该特点的原因：___________________________________该细胞继承了双亲细胞的遗传物质。与传统制备的抗体相比，单克隆抗体的优点：能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗体发生特异性结合，并且可以大量的制备。与体外培养相比体内培养优点：不需要配制培养基、不需要严格的外界环境条件。

制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？动物细胞融合、动物细胞培养技术单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

2.单克隆抗体的应用优点：准确、高效、简易、快速（1）诊断试剂如定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。讨论1：ADC的抗体和药物各具有什么作用？

抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；

药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞讨论2：除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？①可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗；②一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗放射性同位素讨论3：单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？②ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点①单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒；（2）用于治疗疾病单克隆抗体药物已被广泛用于肿瘤、自身免疫病等疾病的治疗，如利妥昔单抗被用于治疗复发难治的低分化B细胞淋巴瘤;曲妥珠单抗被用于治疗乳腺癌等。（3）运载药物生物导