生物化学肝功能

关于生物化学肝功能第一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二第十二章

肝功能检验

第一节概述

第二节某些肝疾病的临床生化第三节肝功能试验第四节肝功能试验选择原则第二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二掌握肝功能试验的意义及评价，赖氏法、速率法测定ALT，改良J-G法和胆红素氧化酶法测定胆红素的原理、注意事项及主要临床意义。熟悉金氏法、速率法测定ALP，GGT测定方法、酶比色法测定血清胆汁酸的原理、注意事项及主要临床意义。了解肝脏的结构特点及生物化学功能，某些肝病的生物化学。本章教学要求：第三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

肝脏是人体最重要的器官之一，肝脏病变会引起多种功能的障碍，临床上常通过一些试验来了解肝功能，帮助对肝胆疾病的诊断，预后判断及疗效观察，这些试验统称为肝功能试验。第一节概述

肝脏是人体最大的实质性器官，成人肝脏占体重的2%，约1.2～1.5kg。它几乎参与了体内各种化学反应，如分泌、排泄、解毒以及各种物质代谢过程，故肝脏有“物质代谢中枢”之称。第四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二一、肝结构的特点

（一）肝具有双重的血流输入系统

即门静脉和肝动脉。门静脉是肝的功能性血管，它汇集了胃肠、脾及胰腺的静脉血流入肝，给肝带来肠道吸收的大量营养物质和腐败物。门静脉血占肝总血量的75%。肝动脉是肝的营养性血管，给肝带来大量的氧气，同时也带来肝外组织代谢产生的大量废物，其血流量占肝总血流量的25%。第五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（二）肝具有双重输出系统

即血液输出系统和胆道输出系统。血液输出系统是指肝静脉，出肝后经下腔静脉与体循环相通，使经肝处理后的代谢物通过肾脏随尿排出。胆道输出系统是指肝细胞分泌的胆汁通过胆道排入肠道，随胆汁排出的有胆汁酸盐和一些代谢产物。第六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（一）肝脏具有双重的血流输入系统门静脉(功能性血管)肝动脉(营养性血管)（二）肝脏具有双重的输出系统营养物质和腐败物氧气和肝外组织代谢废物肝静脉胆道

肝脏下腔静脉体循环肠道肝处理后的代谢物肾脏(尿)胆汁酸盐和代谢产物第七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（三）肝细胞的亚细胞结构特点

肝细胞中亚细胞结构丰富。含有丰富的线粒体、内质网和核糖体。使肝脏能量供应充分，并大量合成蛋白质和脂类。含有大量的溶酶体和高尔基复合体。促进对吞噬产物的分解和一些蛋白质的加工与成熟。还有过氧化物酶体，能分解代谢中产生的过氧化氢，减轻活性氧的损伤。第八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（四）肝细胞的再生

肝细胞是体内唯一具有再生能力的实质细胞，而且再生能力很强。新生肝细胞的来源有两种：1.由已分化的肝细胞增殖而来。

2.由未分化的小叶内胆管上皮细胞分裂而来。由于肝细胞有很强的再生能力，所以轻度的损伤，难以通过肝功能试验检测出来。第九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（三）肝细胞的亚细胞结构特点（四）肝细胞的再生新生肝细胞的来源①由已分化的肝细胞增殖而来②由未分化的小叶内胆管上皮细胞分裂而来①细胞表面有大量的微绒毛②细胞膜具有较高的通透性③肝细胞中亚细胞结构丰富④肝细胞含有丰富的酶系第十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、肝脏的生物化学功能

（一）排泄功能肝脏能分泌胆汁，很多代谢物可随胆汁通过胆道排入肠道而排泄。如胆汁酸、胆红素、氨等物质。

1.胆汁酸代谢

（1）胆汁：由肝细胞分泌的液体，正常人每天分泌量500～1000ml，称为肝胆汁。进入胆囊后水分被重吸收而浓缩，称为胆囊胆汁。胆汁中含有胆汁酸盐、胆色素、胆固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和无机盐等物质。其中胆汁酸盐占固体成分50%以上。胆汁既是一种消化液，也是排泄液。第十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二胆固醇

7α-羟胆固醇胆酸鹅脱氧胆酸甘氨胆酸牛磺胆酸甘氨鹅脱氧胆酸牛磺鹅脱氧胆酸肠道复杂反应甘氨酸牛磺酸胆汁胆道初级游离胆汁酸初级结合胆汁酸初级胆汁酸的生成第十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

HO

OH

COOH

HO

OHCONHCH2COOH

HOHO

OHCONHCH2CH2SO2H胆酸鹅脱氧胆酸牛磺鹅脱氧胆酸甘氨胆酸初级胆汁酸

HOHO

OHCOOH第十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二脱氧胆酸石胆酸次级胆汁酸大部分通过主动重吸收经门静脉入肝肠肝循环次级胆汁酸的生成与胆汁酸的肠肝循环甘氨胆酸肠牛磺胆酸道甘氨鹅脱氧胆酸牛磺鹅脱氧胆酸胆酸鹅脱氧胆酸肠菌水解肠菌还原一部分通过被动重吸收经门静脉入肝随粪便排出第十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

HOHO

OHCOOH

HO

HO

COOH脱氧胆酸

HO

OH

COOH

HOCOOH石胆酸胆酸鹅脱氧胆酸次级胆汁酸7－脱氧7－脱氧第十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二第十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

2.胆红素代谢胆色素是铁卟啉化合物分解代谢的产物，主要包括胆红素、胆绿素、胆素原和胆素，主要随胆汁排泄。（1）胆红素（bilirubin）的生成衰老RBC

单核吞噬细胞系统（肝、脾、骨髓）珠蛋白血红素加氧酶胆绿素还原酶脂溶性，可进入细胞产生毒害血红素血红蛋白

胆红素COFe胆绿素

第十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（2）胆红素在血中的运输胆红素血液水溶性，不能进入细胞内，也不透过肾小球未结合胆红素间接胆红素

胆红素-清蛋白复合物清蛋白

①限制了胆红素自由通过细胞膜，免除了对细胞的毒害作用。②增加了水溶性，有利于在血液中的运输。第十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（3）肝脏在胆红素代谢中的作用未结合胆红素

Y-蛋白-胆红素Z-蛋白-胆红素Y-蛋白Z-蛋白葡萄糖醛酸-胆红素UDPGA水溶性，不通过细胞膜，可通过肾小球肝细胞结合胆红素直接胆红素随胆汁排入肠道摄取转化排泄第十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（4）胆红素在肠道的变化及肠肝循环结合胆红素胆素原肠道细菌还原大部分随粪便排出80%～90%少部分被重吸收10%～20%大部分又随胆汁排入肠道形成肠肝循环少部分进入体循环通过肾随尿排出经门静脉入肝0.6～4mg胆素原胆素O2胆素原胆素O240～280mg第二十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

血红蛋白

珠蛋白

血红素

COOFeNADPH

胆绿素

NADPH

胆红素胆红素胞液Y蛋白胆红素-Y蛋白

Z蛋白胆红素-Z蛋白

UDPGA内质网

UDP葡萄糖醛酸胆红素肾小部分大部分胆素原胆红素－清蛋白复合物胆素原胆素

尿少量肠道胆素胆素原葡萄糖醛酸胆红素粪便胆红素葡萄糖醛酸单核－吞噬细胞肝细胞血液清蛋白第二十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

3.血氨代谢

（1）血氨的来源：①氨基酸的脱氨基作用及含氮化合物的分解，称为内源性氨。②肠道吸收，由未消化的蛋白质和未吸收的氨基酸腐败产生。

（2）血氨的去路：①合成尿素；②合成谷氨酰胺；③合成其他含氮化合物。

（3）尿素的合成与排泄：血氨进入肝脏经鸟氨酸循环合成尿素，经肾脏随尿排去。第二十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（1）在蛋白质代谢中的作用：是机体合成蛋白质的重要器官。除合成肝脏本身所需蛋白质外，还合成近100种血浆蛋白。

（2）在氨基酸代谢中的作用：是体内氨基酸分解代谢的主要场所。如脱氨基作用，调节血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。

（二）物质代谢功能1.营养物质代谢第二十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二维持血糖浓度恒定合成肝糖原肝糖异生血糖高（3）在糖代谢中的作用：维持血糖浓度的恒定。血糖低肝糖原分解第二十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二分泌胆汁酸盐，促进脂类的消化吸收。合成各种脂类，如TG，Ch，PL等。进行脂肪酸的β-氧化，产生酮体。参与脂蛋白代谢，合成HDL、VLDL；

（4）在脂类代谢中的作用：对脂类的消化、吸收、分解、合成及运输等过程均起有重要作用肝功能受损脂肪肝第二十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

2.激素及维生素代谢

（1）在激素代谢中的作用：对多种激素进行灭活和排泄，如类固醇激素、胰岛素、肾上腺素、甲状腺激素等。灭活后的产物大部分随尿排出。肝功能严重损害激素调节功能紊乱

（2）在维生素代谢中的作用胆汁酸盐有助于脂溶性Vit的吸收。储存维生素(A,K,D,B12)。参与维生素的转化。第二十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、肝脏的生物转化定义：生物转化:

机体对许多外源性或内源性非营养物质进行化学转变，增加其水溶性(或极性)，使其易随胆汁、尿排出，这种体内变化过程称生物转化(biotransformation)。

转化对象：转化特点：生理意义：保护机体通过灭活对活性物质的作用时间和强度进行调节利于机体对代谢废物和进入体内的异物的排泄内源性非营养物:氨、胺、胆色素、激素外源性非营养物:药物、毒物、食品防腐剂、色素①连续性，②多样性，

③失活与活化双重性第二十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

1.溶血性黄疸（肝前性黄疸）由于各种原因使红细胞大量破坏，以致未结合胆红素明显增加，超过肝脏的转化能力，但结合胆红素正常。新生儿血脑屏障发育不全，游离胆红素易进入脑组织，与脑部基底核的脂类结合，将神经核染成黄色，称为核黄疸（胆红素脑病）。第二十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

2.阻塞性黄疸（肝后性黄疸）由于胆道阻塞，胆汁不能排出而淤积在胆管内，使上端胆管内压力不断升高，最后使小胆管和毛细胆管扩张，通透性增加，甚至破裂，使胆汁返流入血，血中结合胆红素增加。第二十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

3.肝细胞性黄疸（肝源性黄疸）由于肝细胞病变，肝功能减退，使肝脏对胆红素的摄取、转化和排泄作用发生障碍。一方面肝脏不能将未结合胆红素转化成结合胆红素，使血中未结合胆红素增加；另一方面，病变区压迫毛细胆管，使结合胆红素返流入血，血中结合胆红素也增加。第三十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二2.黄疸的生化检查（1）血清总胆红素和结合胆红素的测定（2）尿三胆的测定:尿胆红素、尿胆素原、尿胆素（3）胆红素葡萄糖醛酸转移酶的诱导试验黄疸类型的鉴别肝细胞损害程度和预后判断第三十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（二）黄疸的生化诊断

1.血清总胆红素和结合胆红素的测定用于黄疸类型的鉴别，肝细胞损害程度和预后判断。

2.尿三胆的测定尿胆红素、尿胆素原、尿胆素合称为尿三胆。由于尿胆素是由尿胆素原遇空气氧化而来，故临床上一般只测定尿胆红素和尿胆素原。第三十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二3.胆红素葡萄糖醛酸转移酶的诱导试验（1）糖皮质激素的诱导试验：糖皮质激素能诱导肝细胞内尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的合成，促进未结合胆红素的转化与排泄，使血清胆红素迅速下降。（2）苯巴比妥试验：苯巴比妥类药物能诱导肝细胞内Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的合成，苯巴比妥类药物可用于核黄疸的治疗。第三十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、肝硬化的生化是由于多种损伤因素长期或反复作用于肝，使肝细胞弥漫性变性、坏死，以及肝结缔组织弥漫性增生，导致肝广泛的纤维化和结节的形成称为肝硬化。第三十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（一）肝硬化病因的分类

1.确定的病因：①乙型、丙型病毒性肝炎；②乙醇中毒；③代谢性疾病：血色病、Wilson病、半乳糖血症等；④肝内、外长期胆汁淤积；⑤门静脉回流受阻；⑥免疫功能紊乱：狼疮性肝炎；毒素及治疗性药物：氨甲蝶呤、异烟肼等。第三十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

乙醇的饮用量与肝硬化的发病率有密切关系，饮酒量越高的国家其肝硬化死亡率也越高。如饮酒量年人均量在10升以下的瑞典、英国、丹麦等国家，肝硬化死亡率在10/10万以下；而饮酒量年人均在27升左右的法国，肝硬化死亡率为30/10万以上。由于长期饮酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。第三十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二乙醇在胃和小肠上部迅速被吸收（胃30%、小肠上部70%），被吸收的乙醇90%～98%在肝内被代谢，其余的随尿和呼出气排出。乙醇的代谢途径有乙醇脱氢酶（alcoholdehydrogenase，ADH）乙醇氧化体系、微粒体乙醇氧化体系（microsomalethanoloxidizingsystem，MEOS）、NADPH氧化酶-过氧化氢酶体系、黄嘌呤氧化酶-过氧化氢酶体系。前二者最重要。

第三十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

ADH乙醇氧化体系：CH3CH2OH＋NAD+CH3CHO＋NADH＋H+CH3CHOCH3COOH乙酰辅酶A

三羧酸循环

微粒体乙醇氧化体系（MEOS）：CH3CH2OH＋NADPH＋H+＋O2CH3CHO＋NADP+＋2H2O

NADPH氧化酶-过氧化氢酶体系：NADPH＋H+＋O2NADP+＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHOADH乙醛脱氢酶MEOSNADPH氧化酶过氧化氢酶第三十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二黄嘌呤氧化酶-过氧化氢酶体系：次黄嘌呤＋H2O＋O2

黄嘌呤＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHO

2.可能的原因：①营养不良；②感染：新生儿梅毒、血吸虫病虫卵所致门管区纤维组织增生；③隐原性肝硬化；④肉芽肿性肝硬化。黄嘌呤氧化酶过氧化氢酶第三十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（二）肝硬化的生物化学检查肝硬化的早期诊断非常困难。近年来发展起来的几项生化检查为肝硬化的早期诊断提供了重要信息。1.单胺氧化酶（MAO）测定血清MAO与肝纤维化程度成正比。肝纤维化仅限于门脉区或中央静脉周围时，血清MAO几乎全部正常。第四十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

门静脉纤维增生侵入肝小叶实质内时，半数患者血清MAO活性增高。门静脉区间或门静脉区间与中央静脉之间结缔组织相连时，80%患者血清MAO活性增高。当有假小叶形成时，则100%患者血清MAO活性增高。

第四十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

2.β-脯氨酸羟化酶（β-PH）测定

β-PH在胶原合成中起关键作用。当肝纤维化时其含量和活性明显增高。正常人为29.2±5.9ng/ml，肝硬化患者为654.9±90.2ng/ml。

3.血清透明质酸（HA）测定肝纤维化时，门-腔静脉分流增大，进入肝内清除的HA减少，使血清HA明显增高。第四十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二4.血清Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）

是由Ⅲ型前胶原经内切酶作用而产生的多肽。正常人为7.91±0.86μg/L，肝硬化患者明显增高，诊断肝硬化的敏感性为95%，特异性为93%。第四十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二三、肝性脑病的生化机制

肝性脑病又称肝昏迷，是由严重的肝病所致的中枢神经系统功能紊乱，是严重肝病的重危合并症。目前认为氨基酸的代谢障碍可能是肝性脑病发生的生化基础。第四十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（一）氨中毒学说由于肝功能不全，肝脏合成尿素的功能障碍，血氨升高，血氨易通过血脑屏障，进入脑组织，氨对脑组织有严重的毒害作用。如抑制丙氨酸脱氢酶的活性，影响乙酰辅酶A的生成；与三羧酸循环中α-酮戊二酸结合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循环中α-酮戊二酸，减少ATP的生成；与谷氨酸结合生成谷氨酰胺，增加ATP的消耗。影响脑组织的能量代谢。第四十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（二）假神经递质学说在肠道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸经肠菌的氨基酸脱羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，在正常情况下可被肝内单胺氧化酶分解而清除，肝功能不全时，单胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺进入脑组织，经脑组织的非特异性羟化酶作用，生成苯乙醇胺和β-羟酪胺，它们与儿茶酚胺递质结构相似，但不能传递神经冲动，故称为假神经递质。第四十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

假神经递质释放后引起神经系统某些部位（如脑干网状结构上行激动系统）功能发生障碍，使大脑发生深度抑制而昏迷。

（三）氨基酸不平衡学说严重肝功能损伤和门腔静脉短路时，血浆支/芳比明显降低（正常健康人为4.0，慢性肝功能不全为0.9，急性肝功能不全0.8）。第四十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二由于芳香族氨基酸主要在肝内分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝内代谢发生障碍，在血中浓度增高；支链氨基酸主要在肌肉组织中代谢，肝功能不全时对胰岛素的灭活障碍，高水平的胰岛素促进支链氨基酸大量进入肌肉组织被分解，血中浓度降低。芳香族氨基酸进入脑组织，引起假神经递质生成增多，5-羟色胺（抑制性神经递质）增多，使中枢进入抑制状态。第四十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二第三节肝功能试验一、血清（浆）蛋白测定清蛋白（Alb)是血浆中主要的蛋白质,合成清蛋白是肝的重要功能之一。同时测定血清中的总蛋白（TP）和清蛋白含量，计算球蛋白（G）量和A/G比值是判定肝功能的重要指标。第四十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二血清总蛋白测定方法有化学法、物理法、染料结合法、电泳法等临床上常用的是双缩脲法。清蛋白测定常用方法为染料结合法，常用的染料有溴甲酚绿和溴甲酚紫。血中蛋白质主要由清蛋白和球蛋白组成而其他组分的蛋白含量低所以对同份血清测定的总蛋白、清蛋白结果可以求出可以求出球蛋白的含量，通过计算求出A/G。第五十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二血清氨基转移酶测定一、氨基转移酶测定方法简介丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase，ALT)天冬氨酸氨基转移酶（aspartateaminotransferase，AST)酶联-紫外连续监测法二硝基苯肼比色法方法:酶：第五十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（一）酶联-紫外连续监测法ALT和AST测定的参考方法

NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引起的340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－△A/min）计算ALT活性原理：计算：第五十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二注意事项：1.该ALT测定法中存在两个消耗NADH的副反应2.辅酶P-5′-P能使血清中的ALT显示最大活性3.试剂空白测定值的处理4.样本选择和处理方法评价1.特异性高2.准确性高3.精密度高参考范围：5～40U/L或参考试剂盒提供的参考范围第五十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（二）二硝基苯肼比色法原理：第五十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二操作与计算1.ALT校准曲线的绘制第五十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二2.样本的测定测定管吸光度减去对照管吸光度的差值为样本的吸光度，用该值在校准曲线上查得的卡门单位3.计算4.参考范围：5～25卡门单位第五十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二注意事项：1.赖氏法单位定义：卡门单位定义：血清1ml，反应液总体积3ml，25℃，波长340nm，比色杯光径1.0cm，每分钟吸光度下降0.001A为一个单位（相当于每升反应体系中0.1608µmolNADH被氧化）。2.底物α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼浓度不足，以及产物丙酮酸的抑制作用：

赖氏法的校准曲线不能延长到200卡门单位。当酶活性超过150卡门单位时，应用生理盐水作5～10倍稀释样本，测定结果乘以稀释倍数第五十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二3.样本存放时间在室温（25℃）可维持2d，在4℃冰箱可维持1周。在－25℃可维持1个月试剂空白自身血清的对照管样本对照管4.血清对照5.丙酮酸钠的纯度对曲线的影响6.加入2，4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应完全。加入氢氧化钠溶液的速度要一致，减少吸光度管间的差异。7.称量必须准确第五十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二方法评价重复性差底物α-酮戊二酸用量不足2，4-二硝基苯肼在碱性条件下也能显色产物旁路效应2.准确性差3.试剂稳定性差4.操作简便第五十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、氨基转移酶测定的意义肝细胞中含量最多，其次是肾脏和心脏，通常只有极少量释放入血液，所以血清中此酶的活力很低，当这些组织病变时，细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清中该酶活力显著增高1.血清ALT活性增高肝胆疾病骨骼肌疾病一些药物和毒物可引起ALT活性升高2．血清AST活性增高心血管疾病各种肝病均可引起血清AST的升高第六十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二第三节血清碱性磷酸酶测定一、测定方法简介一组非特异性的在碱性条件下水解磷酸酯的酶类底物:β-甘油磷酸钠磷酸苯二钠对硝基酚磷酸盐酸酚酞α-萘酚磷酸盐4-甲基伞形花内酯酰磷酸盐碱性磷酸酶:第六十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二测定方法:（一）测定水解释放的无机磷鲍氏（Bodansky）法（二）测定底物水解后的羟基化合物1.羟基化合物需与显色剂作用后比色测定金氏（King）法2.羟基化合物在碱性条件下直接显色测定对硝基酚磷酸盐（p-nitrophenylphosphate,4-NPP）法第六十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二金氏法测定血清碱性磷酸酶

ALP在碱性条件催化磷酸苯二钠水解，释放出酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色的醌类化合物，根据红色的深浅与校准酚比较，确定ALP的活性。原理:第六十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二参考范围：单位定义：

灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速准确度和精密度都较低,受胆红素和溶血的干扰方法评价：100ml血清在37℃与底物作用15min，产生1mg酚为1个金氏单位成人3～13金氏单位，儿童5～28金氏单位第六十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二速率法测定血清碱性磷酸酶原理:以对-硝基苯酚磷酸钠（4-NPP）为底物，AMP或二乙醇胺（DEA）为磷酸酰基的受体。在碱性条件下，ALP催化4-NPP水解释放出磷酸基团，生成游离对-硝基酚（p-nitrophenol,4-NP），4-NP在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出清ALP活性单位。第六十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二计算：参考范围：40～160U/L（37℃）灵敏度高、线性范围宽（500U/L以上）和精密度高方法评价：第六十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、碱性磷酸酶测定的意义分布：广泛存在于各器官组织中，尤以肝脏、骨骼、小肠和肾脏含量较高，血清中ALP主要来自肝脏和骨骼病理性增高：

肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌

骨骼疾病：佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期生理性增高：妊娠期与儿童生长发育期第六十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二第四节血清γ-谷氨酰转肽酶测定一、测定方法简介γ-谷氨酰基转移酶（γ-glutamyltransferase，GGT)（一）重氮比色法（二）速率法测定方法:第六十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二速率法测定血清γ-谷氨酰基转移酶

GGT催化γ-谷氨酰基移换反应。以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物，双甘肽为谷氨酰基的受体，在GGT的催化下，谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性单位原理：第六十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二计算：参考范围：男性11～50U/L（37℃），女性7～32U/L（37℃）`方法评价:本法准确度好；精密度好线性范围宽（460U/L）；操作简便；但对试剂纯度要求高第七十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二重氮比色法测定血清γ-谷氨酰基转移酶以γ-谷氨酰α-萘胺作为γ-谷氨酰基的供体，双甘肽作为受体，在GGT作用下，产生α-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色α-萘胺-对-偶氮苯磺酸，其色泽的深浅与GGT活力成正比。原理：第七十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二参考范围：方法评价：

不需去除蛋白质，操作简便，颜色稳定，线性关系好，但底物水溶性较差成年男性3～17U/L，成年女性2～13U/L第七十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、γ-谷氨酰转肽酶测定的意义分布：肾最高，其次是前列腺、胰、肝等器官尿中GGT活性：

可能有助于诊断肾疾病

血清GGT用于诊断肝胆疾病1.原发性或转移性肝癌2.阻塞性黄疸3.病毒性肝炎和肝硬化4.乙醇性肝炎第七十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二血清胆红素测定

未结合胆红素间接胆红素血清胆红素结合胆红素直接胆红素加速剂常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸钠、尿素。最近在血清中还发现了第三种胆红素，称为δ-胆红素，性质与结合胆红素相似，含量很低。第七十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（一）重氮法

对氨基苯磺酸＋亚硝酸钠氯化重氮苯磺酸＋NaCl＋2H2O

胆红素＋氯化重氮苯磺酸紫红色的偶氮化合物λ=560nm

加速剂为甲醇。灵敏度较低，溶血标本干扰大。重氮试剂在室温中不稳定，易分解，故一般在临用前新鲜配制。HClpH1-2第七十五页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（二）改良J-G法1938年由Jendrossik和Grof建立，几经改进成为今天广泛应用的J-G法。加速剂为苯甲酸钠-咖啡因。紫红色的偶氮胆红素在强碱性酒石酸钠和咖啡因存在下，生成蓝色的偶氮胆红素。pH13，λ=660nm灵敏度高，ε7.4×104；线性范围宽，0～2736μmol/L；显色稳定；精确度较好；干扰少。是我国医学检验学会推荐的方法。第七十六页，共九十三页，编辑于2023年，星期二（三）胆红素氧化酶法总胆红素＋1/2O2

胆绿素＋H2O胆绿素＋O2

淡紫色化合物

胆红素在460nm波长处，吸光度的下降与浓度成正比。在pH8.2时，胆红素氧化酶可催化结合胆红素和未结合胆红素氧化；在pH4.5时，胆红素氧化酶仅催化结合胆红素氧化。因此，调节溶液pH可分别测定总胆红素和结合胆红素。灵敏度高，干扰少，精确度好，线性范围宽。胆红素氧化酶第七十七页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

【参考范围】血清总胆红素5.1～17.1μmol/L血清结合胆红素0～6μmol/L结合胆红素/总胆红素20%～35%

第七十八页，共九十三页，编辑于2023年，星期二【临床意义】

诊断黄疸和鉴别黄疸类型，血清总胆红素17.1～34.2μmol/L为隐性黄疸，＞34.2μmol/L为临床黄疸，根据结合胆红素占总胆红素的百分比可鉴别黄疸类型。

溶血性黄疸结合胆红素占总胆红素的20%以下。肝细胞性黄疸结合胆红素占总胆红素的35%以上。阻塞性黄疸结合胆红素占总胆红素的50%以上。

第七十九页，共九十三页，编辑于2023年，星期二二、血氨测定

血氨主要来自肠道的吸收及组织中氨基酸的脱氨基作用。主要的去路是在肝脏经鸟氨酸循环合成尿素。血液中的游离氨以两种形式存在，NH4+和NH3，在生理pH条件下，NH4+占98%以上。血氨测定的方法主要有三类：化学法（碱性酚次氯酸盐直接显色法）；酶法（谷氨酸脱氢酶速率法）；离子选择电极法。第八十页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（一）碱性酚次氯酸盐直接显色法血清经钨酸沉淀蛋白质后，滤液中的与碱性酚次氯酸盐试剂反应生成蓝色化合物（靛蓝），λ=625nm，此反应又称Berthlot反应。显色稳定，但血液离体后，血液中的含氮化合物可分解产生氨，时血氨缓慢升高，此时应迅速将血液标本制成无蛋白滤液。第八十一页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

（二）谷氨酸脱氢酶速率法

血浆中的在NH4+足量的α-酮戊二酸和NADPH存在下，经GLDH催化生成谷氨酸NADP+，对340nm紫外光吸光度下降。NH4+＋α-酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋NADP+＋H2O

【参考范围】13～57μmol/L（酶法）GLDH第八十二页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

【方法评价】特异性强、分析时间短，在200μmol/L范围内线性良好，精密度好，批内CV＝3.9%；批间CV＝4.5%。回收率为97.9%～102.7%。是较为理想的氨分析方法。

【临床意义】肝性脑病，重症肝炎，尿毒症血氨增高。第八十三页，共九十三页，编辑于2023年，星期二三、血清胆汁酸测定

胆酸肝脏游离型鹅脱氧胆酸初级胆汁酸

结合型胆汁酸

肠道脱氧胆酸次级胆汁酸石胆酸甘氨胆酸甘氨鹅脱氧胆酸牛磺胆酸牛磺鹅脱氧胆酸第八十四页，共九十三页，编辑于2023年，星期二

肝脏在胆汁酸的生成、分泌、排泄和摄取等代谢过程中有极其重要的作用。血液流经肝脏一次约90%的胆汁酸被摄取，故正常人血清TBA含量很低，一般在10μmol/L以下。任何引起肝细胞病理性损伤的过程都可使肝脏摄取胆汁酸能力降低，而导致血清TBA↑，故血清TBA测定是目前认为最敏感的肝功能试验项目之一。胆汁酸测定的方法有，气相色谱法、气相质谱法、HPLC、放免法、酶法。第八十五页，共九十三页，编辑于202