生物制剂考试重点集录

..生物制课及考试点录ByAugustine药学生技药研中任1、物术物特〔1〕与源物接，性、毒低〔2〕稳性，酶感在化道易解〔3〕分量大不穿胃黏膜〔4〕给途单；以射药为，必频给〔衰短2、物术物开趋研制新剂型提高稳定性和生物活：如缓控释微球、埋植剂、脂质体、原位微球改变给药途径，即研究新的给药统：如口服、鼻腔、肺部、直肠、透皮、眼部等途径给药提生利度方①药进化修或成体物②用收进〔要③用抑剂④用子渗皮给。聚二修〔PEG修饰〕优：以方延半期①为种障住白分外的原定，止体产生②PEG修饰，子量加肾小的过少③生间障保了白不被白水提多、白稳性途定突干素个胱酸基化修修饰缓系添剂高解，止凝，，元冷枯、雾燥拟关应〔pseudo-firstpasseffect鼻皮嗅区的胞素P450活性至于脏主由NADPH-胞素P450复酶量高约3~4倍，此此被谢产类肝处首作，称拟首效〔pseudo-firstpasseffect。发现在鼻黏膜中也存在肝脏中的三类可诱导的细色素酶，在鼻上皮中也发现第Ⅱ相结合反活性。..word.zl.

125125.125125.蛋多一构的PEST假设Roger等通文资的结现些在核胞快分的白分构通含共的基序，即谓PEST假设该假设认为细胞内半衰期短于2小时蛋白质的氨基酸序列具有一个或一个以上富脯氨酸P谷氨〔、氨酸S〕苏酸〔T的域●这些富含的区域的两侧通常〔但不总是〕有数个带正电荷的氨基酸组。●所有的域的共同点是局部高度中的P、S或冬氨酸较少。PEST序能够赋予蛋白多肽的快速分解确切机制尚未明然而，人们发现短寿的蛋白质的分解需要的Arrhenius激活能〕为，寿蛋白的分解所需的Ea。这种不同提示存在2种分解通路，各具不同的速率限定性步骤PEST予蛋白一种快速降解的易感性，从而更易发生胞蛋白水解。蛋多类物代动学点〔〕著首效和小分子合成药物相比类药物口服具有十清楚显的首关效应类药物在胃酸中的不稳定性及胃肠道和肝脏普遍存在的蛋白水解酶达体循环前大量降解而致生物利用度极低大局部蛋白多肽类采用胃肠外给药途径注射给药。〔〕除衰短由于这类药物体内迅速降解原形药物的体内存留时间甚短衰期仅为数分钟或0.5~1.0时左右，如胰岛素在人体半衰期不到静脉注射后1小时几乎所有胰岛素被去除，组织型纤溶酶原激活物〕半衰期为26-55，水蛭素为分钟。这种短半衰期迫使它们在临床应时不得不采用静脉滴注或屡次频繁给药效血药水平。〔〕观布积常小这类药物通常水溶性较强脂性较差过细胞膜和生理屏障数药物的表观分布容积相当于细胞外液体积人体的表观分布容积约为于细胞外液体积。这类药物在血液中的浓度往往较，而在脑组织中的浓度较低。〔〕线动学质蛋白多肽类药物的吸收、结合和除均可能涉及非线性饱和动力学。肿瘤坏因子〕小鼠152mg.kg-1后曲线下面积分别为率分别为0.66、0.41和kg说明随剂量增加，显示非线性药动学。..word.zl.

..猕猴静脉注射重组单链尿激酶型溶酶原激活量增加而延长，时曲线下面积明显于剂量的增加，全身去除率随剂量增而减慢，提示研究剂量范围内可能涉及多酶反响，为剂量依赖性非线性动力学过程。聚二修1与蛋质多分的必基团价合作一屏掩蛋质子表抗决簇防抗产生同可改变物水液的物配为溶性减少药的解2、PEG优●身疫性低●醚造架难哺动降●PEG与蛋质联分质增大不被脏谢反寡苷反寡苷类物人合的经学饰寡苷片，通自特序与mRNA结合在因水上扰病白产。反义药物能与特定的基因杂交因水平上干扰致病蛋白的产生扰遗传信息由核酸向蛋白质的传递。层的理层技是组关离法总当别的合随流相过定时由于组份理性存差，两发相作〔附溶、合等的力同在相中分〔量照不，且流相前动各份断地两中展分，从到将组别的的层的类按定基的式柱析纸析薄层根流相形：相析气层根原：子换亲层、配析吸层、水析、胶滤层前白处主要是利盐法、电沉、有溶沉等法的蛋白与其它较大量的杂蛋白分开，这些方法的特点是简便、理量大、既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白质，但分辨率低。亲层：依于白和的体ligand〕之的互用别的配通指的能另个..word.zl.

..分或子合一是共结〕分、团离、原子但亲层中配体通共键与质合配体以酶合一反物产或一可识靶白抗。当蛋白质混合物通过装有连接了体的基质的亲和层析柱时可以特异地与基质结合没有结合的蛋白质先被洗脱下来基质上的靶蛋白最后可以用含有高浓度自由配体的溶剂洗下。以有时只用亲和层析就可使蛋白质的纯化提高至。优：纯过程简单、迅速离效率高验条件温和缺：针某一别离对象就需要制备专一的吸附剂和建立相应的实验条件基的选择及其与基质的共价结合需要烦琐操作步骤根原：生专吸(bioselectiveadsorption)1.具专性和力生分对酶—物〔包括酶的竞争性抑制和辅酶因子〕特异性抗—体激素受体互补的凝集素和糖蛋白2.根过：固化Immobilise配基析中能被某一生大分子识别和可逆结合的生物专一性物质。基质载)亲层析中与配基共价结使其固相化的物质。载的择应备特：丰富的可供活化的化学基团，并在温和条下能与配基共价结合。性的，非专一性吸附无或足够小。孔网状构造。好的机械性能，具有好的液体流动性。较好的物理和化学稳定性。可选的体琼糖商品名型号：2B，4B，6B型号含义：琼脂糖浓度为2%，4%，6%特：水强理性稳，孔，专性附，能以态存经起机溶处。..word.zl.

4848.聚烯胺胶商品名Bio-Gelp型号P-100型号含义：排阻限度X1000当于允许进入凝胶内部蛋白的最大分子量特：胶理性稳,抗生侵能力大适于基亲物间和力拟的统应防止pH2-11以外溶中期用葡糖胶商品名型号G-100,150,200型号含干凝胶吸水量特:理化质定,耐、碱不酸,网小配的择应备特：于欲纯化的生物物质应具有专一亲和性须具备能被修饰的功能基团以酶和底物为例来讨论配基与欲化的生物物质的亲和:KEL在亲和层析定义分配系数Kd结/游离[EL]/[Ed00常数越小配基对大分子的亲和力越和层析中就越有价值。K

一般为dm/mol太大洗脱回收困难，太小那么难于有效吸附目标物质。配基可以是小分子物质：一些辅、辅基大分子物质：酶、抗体纯化酶的配底物、酶活性中心、抑制剂、辅酶、辅基等；纯化抗原抗体的配基：互为配基纯化核酸的配基DNA白质和配的相固相化技术：将配基以共价键连于不溶于水的固相基质上制成固相化吸附剂过：化、接臂"入"""子配基适当的离开载体骨克制载体空间位阻的影响亲层别〔〕柱平〔〕样亲吸操包括进料吸附、清洗、洗脱和再等步骤。..word.zl.

..洗脱方法有：特性脱利用含有与亲和配基或标产物具有亲和作用的小分子化合物溶液为洗脱剂，通过竞争性结合作用，脱附目标物。特点：条件温和，有利于保护目产物的活性和提高纯度。非异洗：过调节洗脱液的、离子强度、离子种类或温度等理化性质降低目标产物的亲和作用，使之脱附。是较多采用的洗脱方法。上：层析柱较短，通常左样品液的浓度不宜过高上样时流速比拟慢样品缓冲液中有一定的的离子强上样时选择适当较低的温度特性脱优：异性强，可以进一步消除非特异性吸附的响到较高的分辨率蛋白质变性缺：常的时间、较大的洗脱条件。改方：择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度非异洗：与配体亲和力较小连续大体积平衡缓冲液冲洗，不响活性，但洗脱体积较大，待别离物质浓度较低。配体结合较强时适当的pH离子强度洗脱，注意尽量不影响待别离物质的活性与配体结合非常结实时使用较强的酸洗脱液中加脲性剂，使蛋白质等待别离物质变性，洗脱后再复性吸剂再和存再生大量的洗脱液或较高浓度的盐溶液洗涤液重新平衡的不可逆吸附时，使用高浓度的盐溶液、尿素变性剂或参加适当的非专一性蛋白酶保存：参加0.01%的叠氮化钠下保存亲膜一原利用亲和配基修饰的微滤膜为亲吸附介质亲和纯化目标蛋白质的变形称膜亲和层析二应及点应：单克隆抗体的纯化、葡萄6-酸脱氢酶G6PDH的纯化等。..word.zl.

..特优：传质阻力小，到达吸附平衡时间，配基利用率高；压降小，流速高，设备体积小，基用量低。缺：理论板数很低，吸附和清洗效率；膜的污染会使操作速度、吸附效和亲和膜的寿命下降。亲错过一原和作原：亲和过滤或亲超滤，是生物亲和作用与膜别离相结合的蛋白质类生物大分子的别离纯化技术，是亲和层的另一种变形。操：般包括进料吸附、清洗、洗脱和再生等步骤。亲层用蛋质离实免疫亲和层析凝集素和糖蛋白亲和层析含有辅酶的酶类的亲和层析酶和蛋白类型抑制剂的亲和层析肝素为配体的亲和层析染料配体亲和层析金螯层1、疫和析小鼠血清不同亚型IgG别离的ASepharoseCL-4B柱1.5mol/L的氨pH8.9(平衡小血清同等体积的平衡液释后上柱洗去不吸附的蛋白质用不同pH0.1mol/L柠酸洗脱2、集和蛋的和析离凝集素是在自然界广泛存在的一类糖结合蛋白有不同的糖结合专一性天然存在的一些多糖和被固定化的不糖链构造的糖蛋白，可以有效地别离纯化不同型的凝集素，也可应用固定化的凝集素别纯化各种糖蛋白。用含有半乳糖的天然多脂糖的交联产物别离天花粉凝集素..word.zl.

..用磷酸缓冲(含0.15mol/LNaCl)处理的天花粉的丙酮粉制剂用平衡液抽后，上柱洗去不吸附的杂蛋白用半乳糖溶液洗脱花粉凝集素3、有酶酶的和析很多的酶中都含有不同类型的辅，最为常见的是氧化复原酶和脱氢酶含有为此用固定化的以别离不同类型的氧还酶和脱氢酶，或激酶4、和白型制的和析一些酶其制间在非专的互用抑制剂被固定化以用于一些酶的别离纯化。一些固定化酶也被应用于蛋白类型的抑制剂的别离。为了防位现，在酶的小分子抑制剂固定化时，常插一不长的手〞如插入原子胰蛋白酶抑制剂的别离纯化局部纯化牛巢蛋酶制溶于的酸缓冲液流经用同一缓冲液平衡固化胰白柱平衡液可洗去杂蛋白用的约1.2的溶(内含和10mmol/LCaCl2)白酶抑制剂金螯层基蛋质组酸唑和胱酸基与锌离间成定螯物进别的..word.zl.

..影离交选性因素:1、合子径半越，和力大2、子合：价子于吸附3、液pH：响换团交离的离度但影响换量4、子度越越；5、机剂不于附6、联、胀、子：联度，胀小筛能增；联小膨度，吸量少7、脂粒间辅力除电力外还氢和德力辅力凝层的用脱别提测高子质分量高子液浓蛋质性究SDS定白分量原：蛋质聚烯胺胶电时的迁率决它带电以分的小形等素1967年，Shapiro等人现如在丙酰凝系统参阴子污十烷磺酸〔sodiumdodecylsulfate，简SDS那蛋质子的泳移主取于的分量而所电和状关各SDS-Pr均一密度负荷其电过原Pr，除了同Pr荷差。参SDS，改了Pr的象SDS-Pr长圆，种轴为1.8nm。疏层疏作层〔HIC〕根分外疏性异别离白和肽生大子一较常的法疏性的质在高离强的液被脱来当离强降时，疏水强物质随被脱来最用正基交琼糖胶更强疏作，些水较的白被附不解析苯-联脂凝，用疏性强蛋质根操：平Equilibration..word.zl.

..上Sampleapplication洗Washing洗Elution1、析的择柱床高度通常为～15cm对一个优化好的别离方案进展规放大时，可保持柱高不变，增加柱的直径柱子〔内径为1.6～5.0cm进展层析。2、冲的择往平衡的缓冲液和样品中参加一盐析盐，有利于固定化配基与蛋白质的相互作用。随着盐浓度的提高，结合到固定配基上的蛋白质量也相应提高。最用盐Na、NaCl和(NH)244243、冲的择随着高，疏水作用相应下降由于时，被中和的带电基团增加，从而导致蛋质的亲水性增加在中性pH下与疏水相互作用介质不结合的蛋白质，在酸那么能够结合4、白的脱低浓度的水溶性乙醇、去污剂和有盐溶作用的盐破坏水的构造、降低外表从而削弱疏水相互作用。乙醇或去污剂的非极性区与结合蛋白质竞争疏水性配基，从而将蛋白质替代下来。5柱再、洁贮轻度污染时蒸馏水洗涤污染物严密结合时尿盐酸胍洗涤＋起始缓冲液或贮存缓冲液洗涤NaO