课题申书实验设计示例

填报说申请书各项内容应实事求条认真填写达要明确严谨，字迹清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，二、申请书统一采用A4纸型版面设计，无须打印。标书请在11月7日前发到：keyan 由学术部统一集中打印，过期三、封面右上角“顺序号”由中山大学北校区学生会学术部填写（词应反映研究内容，词数量不多于三个，各词之间以逗号分隔）二、立论依请请按以下提纲填写1、研究意义（基础研究，着重结合科学发展趋势，论述项目的科学意义应用基础研究结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用前景）2、国内外研究现状3、本项目的构思或设计思路4、本项目的创新之处5、主要参考文献及出处（格式： ——作者．题目．名．年份．卷(期)．页码／专著——作者．书名．者．年份）研究背景与意血吸虫的确诊需要从粪便中检出虫卵,但由于血吸虫生活史的特点,在同一时间段内所获得的粪便中的虫卵数不相同,或者没有虫卵,所以粪便检测的随机性很大,不能正确反映情况。尤其当度较低时,粪便检测方法的敏感性较低,不适用于低度流行病区血吸虫的检测以及疗效考核,而且,在成虫未产卵以前,即处于潜伏 。目前,已有环卵沉淀试验(COPT)、间接红细胞凝集试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和循环抗原检测等血吸虫病免疫诊断方法。抗体检测虽 快,可用于确定诊断和(或)疗效考核,但由于血吸虫成虫外膜具有不断更新的特点, 技术，即PCR方法检测血吸虫的 DNA进行扩增，并证明有较高的敏感性。不过目前利用PCR方法检测可疑患者的方法具有侵入性，且当需要重复取样 的纵向监测的潜力。2009年JInfectDis Nwakanma等用PCR方法检测来自 386例患者的唾液中 DNA数量，结果显示唾液中PCR的测定结果与显微镜检查法所测的数量具有显著的相关 DNA是如何释放到唾液中的机制目前还不明确。由此我们得到启示，通过PCR方法检测 血吸虫患者唾液中血吸虫DNA片段，评价用PCR方法检测血吸虫患者唾液中血吸虫DNA片段的可行性，为探索唾液检测这一低侵入性的检测方法提供新的思路和依据。国内外研究现 设计特异性引物，采用PCR方法对 标本中的DNA进行扩增，结果表明聚合酶链式反应检测 血吸虫DNA有较高的敏感性， 性钉螺PCR方法，靶 是18S小亚基单位核糖体核酸 易感人群、控制血吸虫病流行具有一定意义。Driscoll等 血吸虫尾蚴的PCR方法选择的靶 释放剂）在反应管中直接提取尾蚴DNA，然后结合环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermalamplification，简称LAMP技术）扩增尾蚴DNA，建立了检测尾蚴的方法。此法具有快速、非靶序列的污染少及提取过程中无扩增靶序列的丢失，操作简便，敏感性高（可检测到1条尾蚴），可在1．5h内完成，若再设计2条环引物，可再节约0．5h，但成本较高，在试剂 周立等运用实时荧光定量PCR检测血吸虫，根据血吸虫18S（18SrRNA）基PCR增出1450bp列TA隆后转入大肠DH5α为模板制作荧光定量PCRPCR法检测血吸虫DNA度约为6pg，已经初步应用于血吸虫病患者粪便标本检测，准确性和特异性较好。本项目的构思本项目通过从湖南血吸虫疫区收集30份 血吸虫患者唾液样本，并在中山大学北校区在校大学生收集50份唾液样本作为正常对照。提取唾液中的DNA，利用设计的引物进行PCR特异性扩增后在经2%的琼脂糖电泳检测，紫外观 本项目的创新之处目前血吸虫的技术，即PCR虫的片段，在血吸虫的诊断中已经得到了很大的发展，已经成功从血吸虫患者和实验动物的肝组织、粪便、外周标本中的DNA但这些方法具有侵入性，且当需要重复取样测定时该方法具有很差的顺应性。2009年JInfectDisNwakanmaPCR门诊患有疑似疟疾的386液中DNA唾液PCR测定结果与显微镜检查法所测的数量具有显著的相关性，证明对于检测疟疾来说，唾液取样是一种很有前途的低1 中 学 2005年10月第23卷第期2、，等。血吸虫病免疫诊断方法的研究进展国际医学 3、,。血吸虫病的免疫诊断现状与研究进展ThestatusquoandprogressofstudyontheimmunodiagnosisofSchistosomiasisjaponicum<<疾病控制>>19993024、牛血吸虫病5种学诊断技术比较ComparisononfivekindsofserologicaldiagnoseassaysofSchistosomiasisjaponicuminfarmcattle<<湖南学报(自然科学版)>>200733第015 澄用ELISA法比 血吸虫抗原特异性和敏感性湖南医学1994。6、 ，等循环抗原 医学大学学报7 88910 研究专项课题3年评估报告.中国血吸虫病防11、吴忠道,等.血吸虫病再研究I化疗后人群再的流行病学特征.中国血吸虫病防治12、RashikaER,etal.Immunizationofmicewithultraviolet-attenuatedcercariaeofmansonitransientlyreducesthefecundityofchallengeworms.InternationalJournalforParasitology,1997,27(5):581-586.1314166-、17;年第期 卷专我国血吸虫病现状及治疗药物《畜牧兽 》2007年01; 性疾病6(2):105-18 病200762519、NwakanmaDC;Gomez-EscobarN;WaltherMetal. tativeDetectionof smodiumfalciparumDNAinSaliva,Blood,andUrine.JInfectDis，2009，Jun199(11):1567-74三、研究方.研究目标、研究内容和拟解决的关键问题（一）本项目通过对疫区血吸虫病患者的唾液样本进行PCR特异性扩增后电泳检测，观察是否有特异性条带产生并通过 检测方法的阳性率，以及对照组假阳性率，并与其他检测方法进行比较，评价唾液PCR法检测血吸虫DNA在血吸虫 对患者的唾液样品进行DNA条 （三）疫区患者唾液中DNA提 .拟采取的研究方法、技术路线、实验方案（包括流程图）及可行性分析研究方学生中获取30样DNA除去蛋白质：蛋白酶K氯仿提、分离蛋白质；析出DNA：乙醇沉淀使DNA引物15′→3′TCTAATGCTATTGGTTTGAGT引物2:5′→3′TTCCTTATTTTCACAAGGTGA工程技 提PCR.试剂Taq、10×buffer、Mgcl2、dNTP、100bpDNAMarKer、蛋白酶K工程(大连)有限公.引物由 引物1:5′→3′TCTAATGCTATTGGTTTGAGT引物 PCR2%琼脂糖凝胶电泳溴乙锭含量0.5μg/ml,电泳缓冲液为1×TBE100bpDNA样品加样量为10μl,加2μl电压80V60min,电泳后凝胶置于紫外透射反射仪上观察结果。 利用统计学方法计算出本检测方法的阳性率，以及对照组假阳技术路线加入特异性引加入特异性引物进行PCR增可行