油菜籽粕生物碱对离体回肠肠管平滑肌收缩功能的作用,药理学论文

油菜籽粕生物碱对离体回肠肠管平滑肌收缩功能的作用,药理学论文油菜籽粕为油菜籽榨油后的副产物。我们国家的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界第一位，油菜籽粕资源特别丰富，每年产量千万吨左右，居世界首位，但油菜籽粕的资源利用却相当有限，基本当做肥料或按少量比例添加作反刍动物和淡水鱼养殖饲料。当前对油菜籽粕中营养成分的研究主要集中于华而不实干物质、粗蛋白、粗脂肪、无氮浸出物、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗灰分、钙、硒、锰、磷，尚未见到有关油菜籽粕生物碱生物学功能的报道。本研究旨在观察油菜籽粕生物碱对离体回肠肠管平滑肌收缩功能的影响并讨论机制，为油菜籽粕功能性食品或药品开发提供实验根据。1材料与方式方法1．1材料①实验动物:成年健康新西兰长耳白兔，体质量2．0～2．5kg，雌雄兼用，辽宁省大连市大连医科大学医学实验动物中心提供，SCXK(辽)2020-0003。②主要仪器及试剂:Medlab-U/4C501H生物信号采集处理系统(南京美易科技有限公司)。BP211D型电子天平(德国赛多利斯制造)，恒温平滑肌浴槽(张家港市南港医疗器械厂)，FT-100生物张力传感器(成都泰盟电子有限公司)。硫酸阿托品注射液(郑州羚锐制药股份有限公司，批号:1005051)，氯化钠(青岛化学试剂厂，批号:050616)，氯化钾(河南焦作市化工三厂，批号:990911)，无水氯化钙(天津市广成化学试剂有限公司，批号:20020504)，碳酸氢钠(山东省化工研究院，批号:990902)，葡萄糖(青岛化学试剂厂，批号:040716)，MgSO47H2O(开原化学试剂厂，批号:990201)，NaH2PO42H2O(天津市科密欧化学试剂开发中心，批号:030828)，皆为分析纯。油菜籽粕生物碱为本实验室自制。1．2家兔离体回肠肠管的制备取禁食24h家兔15只，槌击后枕部致死，迅速剖开腹腔，分离回肠，去除肠壁周围肠系膜，分离出长约30cm的肠管，立即置于37℃充入95%O2和5%CO2的混合气体的台氏液中，肠管出现明显蠕动时剪成2cm的肠段，用台氏液将肠内容物冲洗干净后备用。1．3油菜籽粕生物碱对离体回肠平滑肌收缩频率及张力的影响观察参照文献方式方法，取1．2制备的离体肠管，上端接肌张力换能器，下端固定于金属钩上，将固定好的肠管置于充满20mL台氏液(370．5)℃的麦氏浴槽中，用Medlab-U/4C501生物信号采集处理系统记录肌张力变化，调整标本初负荷为2．0g，肠管蠕动平稳30min后开场试验。每次挑选13个舒缩频率、张力稳定的肠管进行实验，向13个麦氏浴槽中分别参加0、0．5、1、2、4、6、8、10、20、40、60、80、100g/L油菜籽粕生物碱溶液，每个浓度的给药体积为5L，每个浓度重复15次实验，以0g/L油菜籽粕生物碱作为空白对照，用MedLab生物信号采集处理系统软件记录并分析肠管的的蠕动曲线，用周期测量法测定给药后蠕动波的频率，用区间测量法测量给药后的张力。1．4油菜籽粕生物碱联合阿托品对离体回肠管平滑肌舒缩功能的影响观察参照文献方式方法，制备4条离体肠管，待标本舒缩平衡后，分别采用下述4种给药顺序观察油菜籽粕生物碱对阿托品所致回肠舒张的影响:①1%油菜籽粕生物碱1%阿托品(图A);②1%阿托品1%油菜籽粕生物碱(图B);③1%油菜籽粕生物碱1%阿托品1%油菜籽粕生物碱(图C);④10%阿托品1%油菜籽粕生物碱10%阿托品(图D)。每次实验给药量为5L。1．5统计学方式方法采用SPSS16．0软件。计量资料以珋xs表示，组内比拟用方差分析。P0．05为差异有统计学意义。2结果2．1油菜籽粕生物碱对离体回肠平滑肌收缩频率及张力的影响0、0．5、1、2、4、6、8、10、20、40、60、80、100g/L油菜籽粕生物碱作用后兔离体肠平滑肌收缩频率分别为(0．24930．0144)、(0．25130．0150)、(0．24270．0194)、(0．24810．0128)、(0．25580．0320)、(0．24710．0121)、(0．24500．0458)、(0．24330．0082)、(0．26000．0093)、(0．25270．0153)、(0．24800．0121)、(0．24670．0105)、(0．24940．0077)次/s，张力分别为(2．03640．0313)、(2．06000．0418)、(2．06130．0491)、(2．07870．0223)、(2．09330．0248)、(2．15530．0540)、(2．18380．0240)、(2．29000．1208)、(2．33360．1202)、(2．47150．2273)、(2．24130．1092)、(2．08470．0533)、(2．09500．0357)g，不同浓度油菜籽粕生物碱作用后兔离体肠平滑肌收缩频率比拟，P均＞0．05;6、8、10、20、40、60g/L油菜籽粕生物碱作用后兔离体肠平滑肌张力与0g/L油菜籽粕生物碱比拟，P均＜0．05。2．2油菜籽粕生物碱联合阿托品对回肠肠管平滑肌舒缩功能的影响油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用能够部分被阿托品阻断(图1A);油菜籽粕生物碱能够拮抗阿托品所致的肠管舒张(图1B);阿托品抑制油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用能够被再次参加的油菜籽粕生物碱所逆转(图1C)。采用封闭M受体剂量的阿托品(10%)，肠管呈现完全松弛状态，而1%的油菜籽粕生物碱能够部分拮抗阿托品所致的肠管舒张，且这种拮抗作用不会被再次加10%阿托品逆转(图1D)。【图1】3讨论油菜籽粕是以油菜籽为原料经过取油后的副产物，呈淡灰褐色。为将其开发成为功能性食品和药品，本研究开展了油菜籽粕生物碱对家兔离体肠平滑肌收缩功能的研究，结果发现油菜籽粕生物碱的作用性质是兴奋离体肠管，且这种作用在0．5～40g/L之间存在着明显的量效关系，在这里浓度范围内随着油菜籽粕生物碱浓度的增大，回肠收缩张力增大，超出该范围(40～100g/L)则出现随着油菜籽粕生物碱浓度增高张力反而下降的趋势。讲明油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用存在着高剂量翻转现象。为进一步探究油菜籽粕生物碱兴奋离体肠管的作用机制本研究采用M胆碱受体配体结合实验，考察油菜籽粕生物碱能否是通过M受体通路兴奋肠管平滑肌。图1A、B显示油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用能够部分被M受体阻断剂阿托品阻断且油菜籽粕生物碱能够拮抗M受体阻断剂阿托品所致的肠管舒张，也就是讲M胆碱受体途径介入了油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用。图1C显示阿托品抑制油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用能够被再次参加的油菜籽粕生物碱所逆转，这种现象的出现有两种揣测，一是油菜籽粕生物碱除了能够冲动M受体外，还可能通过其他通路实现提高离体肠管张力的作用，二是油菜籽粕生物碱与阿托品之间存在着竞争M受体的作用，阿托品剂量低缺乏以封闭所有肠管上的M受体。针对上述假设本研究采用大剂量阿托品(10%)孵育离体肠管，当阿托品完全阻断M受体后再参加油菜籽粕生物碱(图1D)，结果显示大剂量阿托品使肠管呈现完全松弛状态，但并不能完全阻断的油菜籽粕生物碱对肠管的兴奋作用，且这种兴奋作用不会被再次加大剂量阿托品所竞争性减弱，结合图1C、D讲明阿托品确实与油菜籽粕生物碱存在竞争M受体的作用，但除了M胆碱受体途径外，还有其他途径介入了油菜籽粕对肠管的兴奋作用，但究竟还有哪些途径介入了油菜籽粕兴奋离体肠管，仍需要进一步探寻求索。综上所述，油菜籽粕生物碱对家兔离体肠管平滑肌具有兴奋作用，其兴奋肠管的作用与冲动M受体有关。以下为参考文献:［1］左青，张新雄．我们国家油菜籽种植和加工现在状况［J］．中国油脂，2018，35(5):1-3．［2］吴谋成，袁俊华，邵锦华，等．油菜籽的综合加工和利用研究［J〗］．华中农业大学学报，1999，18(6):589-591．［3］朱文优．菜籽粕的营养价值与毒性［J］．江西饲料，2018，(增刊):10-12．［4］袁明勇，马松涛，刘冬恋，等．桂枝油对兔离体肠平滑肌的运动作用机制［J］．中国医院药学杂志，2018，31(17):1482-1483．［5］李仪奎．中药药理实验方式方法学［M］．2版．上海:上海科学技术出版社，2006:463．［6］徐志立，林原，张厚利，等．黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响［J］．时珍国医国药，2008，19(10):2323-2324．［7］张均田，杜冠华．当代药理实验方式方法［M］．北京:中国协和医科大学出版社，2020:556-55