实验一鸡胚接种课件

一、原理

鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。实验一鸡胚接种二、实验目的

了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚接种方法。三、鸡胚的结构与功能卵壳壳膜气室绒毛尿囊膜

尿囊腔羊膜与羊膜腔卵黄卵白卵壳膜气室绒毛尿囊膜羊膜腔尿囊腔卵白卵壳气室

绒毛尿囊膜呼吸和调节压力起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。尿囊腔胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。羊膜与羊膜腔卵黄

卵白其中盛有羊水，胎体浸泡于其中在胚胎发育早期供给鸡胚营养。在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。五、受精卵的选择最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响受精卵的壳最好是白色的受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。六、孵育孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃相对湿度：50%-60%必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。七、检卵自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。孵育4-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡胚痕迹活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还可见到胚动，但孵育14、15天以后胚动不明显，甚至无胚动。死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。九、鸡胚用于病毒培养的优缺点

（一）优点组织分化程度低，病毒易于增殖可选择不同的日龄和接种途径感染病毒的组织和液体中含大量病毒容易采集和处理来源充足设备和操作简便易行（二）缺点胚内可能污染细菌和病毒

沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒母源抗体许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针十、接种途径

1、尿囊腔接种

2、绒毛尿囊膜接种

3、卵黄囊接种

4、眼球接种

5、羊膜腔接种正粘病毒和副粘病毒

6、脑内接种狂犬病毒

7、静脉接种蓝舌病毒4）用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。

5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml

5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，24h内死亡者废弃方法二：

1）2）同一

3）将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。在卵长径的1/2处用碘酊和酒精消毒。（二）绒毛尿囊膜接种

主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。

方法一：

1）取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒

2）在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口

3）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜

4）滴入接种物

5）用胶布或透明胶纸封闭切口5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入。

6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用石蜡密封。

8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。（三）

尿囊腔接种

主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病毒、新城疫病毒的分离和增殖。

1、选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位

2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒

3、用钢锥穿一小孔

4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接种物

5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。十二、收毒

收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死胚胎，防止出血。

根据接种途径的不同，收获相应