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文档简介

普通生物学详解演示文稿当前1页,总共89页。优选普通生物学当前2页,总共89页。

PCR技术:1985年由美国Cetus公司的KaryMullis

首创,可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。优点:敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等

KaryMullis

本人因此获1993年诺贝尔化学奖3当前3页,总共89页。PCR的原理:

用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段,类似于天然DNA的复制过程。

以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5′末端和3′末端互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。4当前4页,总共89页。试管中进行的DNA复制反应,依据DNA半保留复制的机理;体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质;通过人为控制体外合成系统的温度,使双链DNA变成单链,单链DNA与人工合成的引物退火,DNA聚合酶使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。5当前5页,总共89页。

扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合,基本反应步骤分三步:1.变性

(Denaturation):加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两条单链。94℃30″2.退火(复性)(Annealling):

突然降温后模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合,也存在两条模板链之间的结合,但由于引物的高浓度,结构简单的特点,主要的结合发生在模板与引物之间。55℃30″6当前6页,总共89页。

3.延伸

(Extension):

将反应温度调节到酶的最适温度,在DNA聚合酶、4种dNTPs及镁离子等存在的条件下,以引物的3′端开始,结合单核苷酸,形成与模板链互补的新DNA链。72℃1′

上述3步为一个循环,每经过一个循环,样本中的DNA量应该增加一倍,新形成的链又可成为新一轮循环的模板,经过25~40个循环后DNA可扩增106~109倍。7当前7页,总共89页。

PCR的基本反应步骤变性95˚C延伸72˚C退火Tm-5˚C8当前8页,总共89页。9当前9页,总共89页。10当前10页,总共89页。高温变性11当前11页,总共89页。低温退火12当前12页,总共89页。中温延伸13当前13页,总共89页。14当前14页,总共89页。15当前15页,总共89页。16当前16页,总共89页。17当前17页,总共89页。18当前18页,总共89页。19当前19页,总共89页。20当前20页,总共89页。21当前21页,总共89页。22当前22页,总共89页。23当前23页,总共89页。24当前24页,总共89页。水解DNA分子骨架的磷酸二酯键,将一个完整的DNA分子切割成若干片段,如同一把基因操作的“手术刀”限制性内切酶DNA连接酶反转录酶基因工程主要的工具酶能够催化DNA中相邻的3‘-羟基和5’-磷酸基末端之间形成磷酸二酯键并把两端DNA拼接起来。是从反转录病毒中制备得到的,该酶能以DNA或RNA为模板,以具有3‘-OH的DNA为因为,从5’-3‘聚合生成DNA链。25当前25页,总共89页。限制性核酸内切酶能够识别DNA上的特定碱基序列并从这个位点切开DNA分子。第一个核酸内切酶EcoRI是Boyer实验室在1972年发现的,它能特异性识别GAATTC序列,将双链DNA分子在这个位点切开并产生具有粘性末端的小片段。26当前26页,总共89页。几种主要DNA内切酶所识别的序列及其酶切末端。27当前27页,总共89页。基因克隆的载体仅仅能在体外利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行DNA的切割和重组,还远远不能满足基因工程的要求,因为大多数DNA片段不具备自我复制的能力,只有将他们连接到具备自主复制能力的DNA分子上,才能在寄主细胞中进行繁殖。载体(vector)是指具备自主复制的DNA分子,象病毒、噬菌体和质粒等相对分子量较小的复制子均可以作为基因导入的载体。28当前28页,总共89页。载体三要素:自我复制能力;携带外源基因片段大小(具有较小的分子量和较高的拷贝数);插入位点多少(具有若干限制酶单一识别位点);易于鉴定识别(具有抗菌素抗性基因)29当前29页,总共89页。30当前30页,总共89页。31当前31页,总共89页。DNA连接酶能把不同的DNA片段连接成一个整体

32当前32页,总共89页。重组DNA操作过程示意图33当前33页,总共89页。34当前34页,总共89页。(一)动物是由多层次的结构组成的1、组织:是由一种或多种细胞组合而成的细胞群体,构成动物机体的四大组织。上皮组织结缔组织肌肉组织神经组织35当前35页,总共89页。1上皮组织(epithelialtissue):

覆盖在身体及其部分的表面上构成:

大量的细胞和少量的细胞间质密集排列形成的膜状结构。特点:细胞排列紧密,细胞间质少;大部覆盖在身体表面或体内管腔囊的内表面;细胞有极性;无血管,神经末梢多。36当前36页,总共89页。功能保护(体表上皮组织)吸收(小肠上皮)分泌(腺上皮)排泄(排泄系统相关上皮)感觉(视网膜、鼻腔表皮、舌味蕾)不同部位的上皮常以一种功能为主37当前37页,总共89页。2结缔组织(connectivetissue):联结与支持其他的组织,由间质和分散其中的细胞构成。特点:形式多样,分布广泛功能:

连接、支持、保护、防御38当前38页,总共89页。结缔组织类型:固有结缔组织血液软骨和骨疏松结缔组织致密结缔组织脂肪组织网状组织结缔组织39当前39页,总共89页。固有结缔组织:

2.1疏松结缔组织(looseconnectivetissue)

组成:由少量、多种细胞和大量细胞间质构成。分布:全身各种细胞、组织和器官之间功能:支持、连接、防御、保护和营养、修复40当前40页,总共89页。2.2致密结缔组织(denseconnectivetissue)细胞、基质成分少。细胞主要为成纤维细胞纤维成分多主要为胶原纤维和弹性纤维排列致密。41当前41页,总共89页。2.3脂肪组织(adiposetissue)组成:

由大量脂肪细胞聚集而成。

分布:

皮下组织、肠系膜、网膜等处,并且包裹心脏、肾脏和肾上腺等器官。功能:

含有脂肪,储存能量 42当前42页,总共89页。概念:血液是一种特化了的液态结缔组织,由血浆和血细胞组成,占体重的7%~8%

加入抗凝剂沉淀后,分为三层:上层淡黄色的液体为血浆;中层薄层灰白色为白细胞和血小板;下层红色为红细胞。功能:传输物质和免疫血液(blood)43当前43页,总共89页。软骨和骨软骨组织是特化的具有支持作用的结缔组织,构成软骨的主体。骨组织的细胞间质内有大量钙盐沉淀,是坚硬有一定韧性的结缔组织。44当前44页,总共89页。膜性骨发生简图A.间充质中细胞集聚:骨原细胞分化B.细胞分化为成骨细胞:类骨基质形成,类骨基质钙化形成骨C.骨膜发生,血管进入D.进一步骨化;破骨细胞与骨的改建45当前45页,总共89页。46当前46页,总共89页。47当前47页,总共89页。软骨化骨示意图48当前48页,总共89页。3肌肉组织:在动物的运动中发挥作用构成:

由成束的具有收缩能力的长形肌纤维(细胞)构成,是脊椎动物体内最丰富的组织。功能:

维持机体和器官的运动。

49当前49页,总共89页。分类:骨骼肌(随意肌):

有明显的横纹,多核,受躯体神经支配;

心肌(不随意肌):有横纹、单核或双核,有闰盘,受植物性神经支配;

平滑肌(不随意肌):无横纹,受植物性神经支配;

50当前50页,总共89页。4神经组织:构成一个通讯网络组成:神经细胞和神经胶质细胞构成神经细胞(神经元):神经系统的结构和功能单位,具有接受刺激、整合信息和传导冲动的能力。

神经胶质细胞(神经胶质):对神经元起保护、营养和绝缘等作用;不能传导冲动。51当前51页,总共89页。神经元结构和功能神经元胞体突起胞核核周体代谢、营养中心树突:多个,较短,呈树枝状分支轴突:一个,细长功能:

接受刺激传导神经冲动52当前52页,总共89页。器官(organ):由多种组织按一定规律组合构成不同的形态,并执行特定生理功能结构。如:心脏,承担血液在血管中运行和循环的功能小肠:具有消化食物和吸收营养物质的功能(二)多种组织构成有特定功能的器官53当前53页,总共89页。脊椎动物的系统包括:消化系统(digestiveorgansystem)皮肤系统(integumentaryorgansystem)淋巴免疫系统(immuneandlymphaticorgansystem)

排泄系统(excretoryorgansystem)内分泌系统(endocrineorgansystem)

神经系统(nervousorgansystem)骨骼系统(skeletalorgansystem)

肌肉系统(muscularorgansystem)

生殖系统(reproductiveorgansystem)

循环系统(circulatorysysten)

呼吸系统(respiratorysystem)(三)若干个相关的器官又组成一个能够完成特定功能任务的系统(system):54当前54页,总共89页。呼吸系统循环系统55当前55页,总共89页。56当前56页,总共89页。消化系统消化道消化腺体57当前57页,总共89页。消化道口腔咽食管胃小肠(十二指肠、空肠、回肠)大肠(盲肠、结肠、直肠)等部肛门58当前58页,总共89页。口腔牙齿:数目32颗,切齿、犬齿、前臼齿和臼齿,撕裂和磨碎食物。舌头:化学感受器,味蕾,舌根具有扁桃体,淋巴组织。唾液腺:腮腺、颌下腺和舌下腺;分泌消化液。59当前59页,总共89页。咽与食管咽:气体和食物吞咽的通道。食道:平滑肌构成的管道,将食物运送到胃。60当前60页,总共89页。胃蠕动研磨食物分泌消化液:盐酸ph值胃蛋白酶分解蛋白质凝乳酶吸收水分和无机盐:胃排空时间61当前61页,总共89页。小肠十二指肠:胰腺导管和总胆管开口处,消化糖类、蛋白质和脂肪。空肠和回肠主要吸收的功能。62当前62页,总共89页。大肠盲肠:阑尾。结肠:表面具有结肠袋。直肠:对压力敏感。肛门:63当前63页,总共89页。肝脏和胆囊维持血糖浓度合成氮代谢尾产物合成蛋白质降解转运脂类解毒分泌胆汁贮存维生素64当前64页,总共89页。2.循环系统形态构成:心脏、血管(动脉和静脉)、血液输送氧气、排除二氧化碳、营养物质与激素的传输和分配、代谢产物的收集与排泄、异己物质的分解与清楚等功能。65当前65页,总共89页。心脏四个室:左右心房和心室。心室和心房之间具有瓣膜。动脉管和静脉管。动脉血和静脉血。66当前66页,总共89页。血压:一般的血压指的是大动脉的血压,常用上肢(右手)肱动脉的血压代表。左心室产生的血压最高,代表收缩压,正常为18.7kPa(140mmHg),心室舒张的压力代表舒张压,正常为11.3kPa(85mmHg)。高血压大于140/90低血压低于90/6067当前67页,总共89页。血液的成分血浆:水分和无机盐类血细胞红细胞白细胞嗜酸性嗜碱性血小板造血干细胞68当前68页,总共89页。血液的功能血浆的功能:维持酸碱平衡维持血液具有稳定的渗透压体内运送和交换各种可溶性物质的主要载体血纤维蛋白原在凝血酶的作用下转变为血纤维蛋白血细胞功能红细胞:运送氧气和二氧化碳白细胞:吞噬异物、清楚破损老化细胞血小板:含有丰富的凝血酶,释放凝血酶69当前69页,总共89页。3.呼吸系统呼吸道鼻咽喉气管和支气管肺70当前70页,总共89页。鼻结构:外鼻、鼻腔和鼻旁窦(鼻窦)三部分功能:鼻腔内部的上皮细胞及鼻毛分泌粘液阻挡灰尘鼻腔湿润并加热空气具有嗅觉的功能辅助发音71当前71页,总共89页。喉喉由软骨、肌肉、韧带和黏膜构成主要功能:发音和呼吸。喉结:甲状软骨的结构差异。72当前72页,总共89页。肺肺叶支气管、肺动脉、肺静脉、淋巴管和神经。肺泡总面积达到80-90平方米。与肺相关的疾病:感冒和流行性感冒:病毒和细菌肺结核:结核杆菌引起的慢性呼吸道传染病。传染性非典型肺炎:(SARS,severeacuterespiratorysyndrome)73当前73页,总共89页。4.排泄系统广义排泄:各类人类不能利用的废物及代谢终产物排出体外。结构:肾脏输尿管膀胱尿道74当前74页,总共89页。肾脏结构:肾纤维膜:最外层皮质:富含血管髓质:三角形肾椎体肾盂:集尿功能肾门:肾动脉和静脉进出的门户功能:排泄代谢产物;调节机体内水分、无机盐、酸碱平衡75当前75页,总共89页。排泄器官的病变肾炎:肾炎是一种免疫性行疾病是肾免疫介导的炎性反应,是不同的抗原微生物感染人体后,产生不同的抗体,结合成不同的免疫复合物,沉积在肾脏的不同部位造成的病理损伤。蛋白尿:肾小球毛细血管壁损伤,肾小管发生病变或肾小管功能缺陷时对蛋白重吸收减少或分泌蛋白增加,凝溶蛋白尿。糖尿病:糖尿病性膀胱病。76当前76页,总共89页。5.神经系统人体的感受器官皮肤感受器化学感受器声音感受器-耳光感受器-眼本体感受器内脏感受器神经系统中枢神经系统脑:脊髓外围神经系统按结构分:脑神经和脊神经按功能分:传入神经:传出神经:躯体运动神经自主神经(植物性)77当前77页,总共89页。皮肤感受器毛发:触觉特异小体:克劳氏球:冷觉梅氏球:触觉神经末梢:痛觉巴氏球:压力、重力觉温热觉皮肤的汗腺真皮层的胶原蛋白和弹性蛋白78当前78页,总共89页。化学感受器味觉器官:味蕾甜、咸、酸、苦温度变化产生味觉嗅觉器官:嗅细胞表面具有嗅觉响应器感冒流鼻涕嗅觉迟钝:鼻粘液覆盖嗅黏膜79当前79页,总共89页。声音感受器-耳耳廓(收集空气中的声波)——>外耳道(声音进入中耳)——>鼓膜(产生振动)——>鼓室内听小骨(把振动的声音放大)——>耳蜗

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