血液学血细胞化学染色专家讲座

第三章

血细胞化学染色

血液学血细胞化学染色专家讲座第1页一、概述（一）研究对象

外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中化学物质：

酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等

血液学血细胞化学染色专家讲座第2页

（二）临床应用1.判别各类血细胞2.辅助血液系统等疾病诊疗和判别诊疗3.观察疾病疗效和判断预后

血液学血细胞化学染色专家讲座第3页

二、惯用细胞化学染色方法

过氧化物酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸-雪夫反应α-醋酸萘酚酯酶染色铁染色

血液学血细胞化学染色专家讲座第4页过氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

血液学血细胞化学染色专家讲座第5页POX

新生态氧[O]↑过氧化氢（基质中）四甲基联苯胺（无色）联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁氰化钠蓝色颗粒（浆内酶部位）粒、单核细胞胞浆【原理】血液学血细胞化学染色专家讲座第6页【结果判断】

-、+、++、+++、++++弱阳性颗粒小，分布稀疏阳性颗粒稍粗，分布较密集强阳性颗粒粗大，密布于整个胞浆血液学血细胞化学染色专家讲座第7页【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统

POX主要存在于粒系细胞中。分化差原粒细胞阴性;分化好原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞成熟逐步增强。

血液学血细胞化学染色专家讲座第8页

2.单核细胞系统阴性或弱阳性3.淋巴细胞系统红细胞系统巨核细胞系统阴性浆细胞组织细胞

血液学血细胞化学染色专家讲座第9页血液学血细胞化学染色专家讲座第10页【临床评价】

急性髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病

判别血液学血细胞化学染色专家讲座第11页

1.急性髓细胞白血病（1）急性粒细胞白血病

阳性反应

（2）急性单核细胞白血病

弱阳性反应血液学血细胞化学染色专家讲座第12页

2.急性淋巴细胞白血病

阴性反应或阳性率<3%(残留原粒细胞)血液学血细胞化学染色专家讲座第13页

中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）血液学血细胞化学染色专家讲座第14页磷酸萘酚钠（基质中）中性粒细胞胞浆中NAP磷酸钠α-萘酚

重氮盐（坚牢蓝盐RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞浆中）水解【原理】Kaplow偶氮偶联法血液学血细胞化学染色专家讲座第15页【结果判断】

胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+~++++）血液学血细胞化学染色专家讲座第16页【正常血细胞染色反应】1.中性成熟粒细胞阳性反应其它细胞呈阴性反应血液学血细胞化学染色专家讲座第17页血液学血细胞化学染色专家讲座第18页

2.NAP积分值计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别统计其分级情况：

血液学血细胞化学染色专家讲座第19页(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

阳性率全部阳性反应细胞之和

积分值各种阳性程度细胞分值之和血液学血细胞化学染色专家讲座第20页3.参考值

积分值35-70分

(各试验室参考值不一样)

血液学血细胞化学染色专家讲座第21页【临床评价】（1）细菌性感染与病毒性感染

（尤其是化脓性感染）

显著增加无显著改变血液学血细胞化学染色专家讲座第22页(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病显著增加显著下降且常为零分，缓解时又上升到正常血液学血细胞化学染色专家讲座第23页过碘酸-雪夫反应

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）血液学血细胞化学染色专家讲座第24页双醛基过碘酸雪夫试剂中无色品红

紫红色化合物(附于含多糖类胞浆内)乙二醇基(多糖类物质含有)氧化【原理】血液学血细胞化学染色专家讲座第25页【结果判断】阳性胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗粒状或块状。阴性胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。

血液学血细胞化学染色专家讲座第26页【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统分化差原粒细胞为阴性；分化好原粒细胞至中性分叶核粒细胞各阶段均呈阳性反应，阳性程度随细

胞成熟逐步增强。

阳性物呈细颗粒、均匀红色。血液学血细胞化学染色专家讲座第27页2.红细胞系统

阴性3.单核细胞系统

绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘阳性颗粒较粗大。血液学血细胞化学染色专家讲座第28页4.淋巴细胞系统

大多数淋巴细胞呈阴性；

少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.巨核细胞系统

呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。血液学血细胞化学染色专家讲座第29页【临床评价】1.红血病或红白血病幼红细胞阳性巨幼细胞性贫血幼红细胞阴性

血液学血细胞化学染色专家讲座第30页血液学血细胞化学染色专家讲座第31页3.判别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病

阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。血液学血细胞化学染色专家讲座第32页（2）急性粒细胞白血病

少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。（3）急性单核细胞白血病

可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。血液学血细胞化学染色专家讲座第33页α-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）血液学血细胞化学染色专家讲座第34页α-醋酸萘酚酯酶（细胞内）α-醋酸萘酚（基质液中）α-萘酚

重氮盐（坚牢蓝B）胞浆不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】血液学血细胞化学染色专家讲座第35页【结果判断】

胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。血液学血细胞化学染色专家讲座第36页

氟化钠抑制试验

在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后阳性率或阳性积分。血液学血细胞化学染色专家讲座第37页

氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分100%血液学血细胞化学染色专家讲座第38页【正常血细胞染色反应】1.单核细胞系统

原始单核细胞

分化差阴性分化好阳性

幼稚及成熟单核细胞阳性被氟化钠抑制血液学血细胞化学染色专家讲座第39页2.粒细胞系统

原粒细胞阴性或弱阳性以下阶段为弱阳性3.淋巴细胞系统

多数阴性，少数弱阳性

不被氟化钠抑制血液学血细胞化学染色专家讲座第40页血液学血细胞化学染色专家讲座第41页【临床评价】急单急粒急性早幼粒急粒单急淋α-NAE+++或-或++阳性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于判别急性白血病类型血液学血细胞化学染色专家讲座第42页铁染色

（ferricstain）血液学血细胞化学染色专家讲座第43页亚铁氰化钾亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含Fe部位)铁＋酸性环境普鲁士蓝反应骨髓小粒中含Fe血黄素（细胞外铁）骨髓中贮存铁幼红细胞内Fe（细胞内铁）原理血液学血细胞化学染色专家讲座第44页【结果判断】

幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。

血液学血细胞化学染色专家讲座第45页细胞外铁

低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团块状。

血液学血细胞化学染色专家讲座第46页

再用油镜判断阳性程度，依据铁量多少分五级:（-）（+）（++）（+++）（++++）血液学血细胞化学染色专家讲座第47页血液学血细胞化学染色专家讲座第48页细胞内铁

存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中铁。

油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，统计胞浆中含有蓝色颗粒细胞百分率。血液学血细胞化学染色专家讲座第49页

依据细胞内铁颗粒数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为四型:

Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型Ⅳ型血液学血细胞化学染色专家讲座第50页细胞内铁血液学血细胞化学染色专家讲座第51页血液学血细胞化学染色专家讲座第52页1.细胞外铁

+～++，约2/3人为++，约1/3人为+。2.细胞内铁

阳性率19%～44%Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）【参考值】血液学血细胞化学染色专家讲座第53页

【临床评价】1.诊疗缺铁性贫血、指导铁剂治疗

细胞内、外铁显著减低甚至消失，经铁剂