微生物的鉴定-分枝杆菌鉴定（临床微生物检验课件）

微生物检验技术

----分枝杆菌的鉴定案例导入1.掌握结核分枝杆菌的分类、临床意义、生物学特性和微生物学检测2.熟悉麻风分枝杆菌的临床意义、生物学特性、微生物学检测3.了解非典型分枝杆菌学习目标临床医学检验技术考试大纲单元细目要点要求科目分枝杆菌属结核分枝杆菌（1）分类掌握1，3（2）临床意义掌握2，3（3）生物学特性掌握1，3（4）微生物学检测掌握3，4非典型分枝杆菌（1）光产色分枝杆菌（Runyon群Ⅰ）了解2，3（2）暗产色分枝杆菌（Runyon群Ⅱ）了解2，3（3）不产色分枝杆菌（Runyon群Ⅲ）了解2，3（4）迅速生长分枝杆菌（Runyon群Ⅳ）了解2，3麻风分枝杆菌（1）临床意义熟悉3，4（2）生物学特性熟悉3，4（3）微生物学检测熟悉3，40分枝杆菌概述■分枝杆菌属是一类细长微弯的细菌，因繁殖时有分枝生长趋势而得名。■特点1、细胞壁含有大量的脂类，与染色性、抵抗力、致病性密切相关。2、菌体不易着色，不易脱色，故采用抗酸染色，故又称抗酸杆菌。3、无特殊结构，也不产生内外毒素。4、所致感染多为慢性过程，有肉芽肿病变的炎症特点。5、种类多，对人致病的主要有结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌。1结核分枝杆菌（MTB）分类（掌握）1-1临床意义（掌握）1-2生物学特性（掌握）1-3微生物学检测（掌握）1-4分类（掌握）

1-1麻风分枝杆菌龟脓肿分枝杆菌群偶发分枝杆菌……分枝杆菌属结核分枝杆菌牛分枝杆菌非洲分枝杆菌坎纳分枝杆菌田鼠分枝杆菌卡介苗鸟分枝杆菌复合群堪萨斯分枝杆菌戈登分枝杆菌……非结核分枝杆菌结核分枝杆菌复合群迅速生长分菌（RunyonIV群）光产色菌（RunyonI群）暗产色菌（RunyonII群）不产色菌（RunyonIII群）

缓慢生长菌迅速生长菌不能培养菌目前已经发现有102种（分致病与非致病性两大类），已知在我国对人类致病的主要有人型、牛型和非洲型结核分枝杆菌，其中人型结核分枝杆菌感染的发病率最高。临床意义（掌握）

1-2全球三大传染疾病爱滋病（AIDS）结核病（TB）疟疾（Malaria）在我国，结核病在上世纪40、50年代发病率和死亡率很高，60-80年代经过人们的努力，大大降低，80年代后期，发病率又有所上升，主要是因为耐药性的出现。临床意义（掌握）

1-2■致病物质尚未发现产生内外毒素及侵袭性酶，主要由菌体成分导致的炎症和免疫损伤引起病变。菌体成分主要为：1、荚膜——与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）——含多种酶（分解利用营养物质）——保护（阻止有害物质的进入菌体）2、脂质——存在细胞壁，占菌体干重的20-40%①磷脂——形成结核结节②脂肪酸（索状因子）——破坏细胞，引起肉芽肿③蜡质D（分枝菌酸+肽糖脂）——引起迟发性过敏反应④硫酸脑苷脂和硫酸多酰基化海藻糖——抑制吞噬体与溶酶体结合3、蛋白质其中最重要的是结核菌素，结核菌素+蜡质D—迟发型变态反应。临床意义（掌握）

1-2■所致疾病：结核分枝杆菌通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官感染，其中以肺结核最常见。肺部感染1、原发感染：常见于儿童，也称外源性感染。结局：机体抵抗力强：形成结核结节→纤维化→钙化→自愈（但病灶内常有细菌的潜伏）机体抵抗力差：活动性肺结核→干酪样坏死→全身播散→粟粒样结核2、继发感染——常见成人（原发病灶——内源性感染）特点：局部病变重，但不易扩散，一般局限于肺部，易发生干酪样坏死，可形成空洞和开放性肺结核。肺外感染部分肺结核患者体内的结核分枝杆菌可经血液、淋巴液侵入肺外器官，引起相应的脏器结核，如脑、肾、骨等。痰菌被消化道咽入，可引起肠结核等。临床意义（掌握）

1-2■免疫性与超敏反应TB菌的感染率很高，发病率却较低。抗结核的免疫称为有菌免疫。抗体无保护作用，临床辅助诊断有意义。细胞免疫发挥重要抗感染作用。可产生迟发性超敏反应结核菌素试验临床意义（掌握）

1-2■结核菌素试验：原理：人类感染过结核分枝杆菌后，产生免疫力的同时也会产生迟发性超敏反应，将结核菌素注入皮内，观察有无超敏反应的发生，判断对结核分枝杆菌有无免疫力。试剂两种：①旧结核菌素（OT）②纯蛋白衍生物（PPD）方法：前臂皮肤注射，48-72h后观察结果结果：→红肿硬结＞5mm，阳性（＞15mm，强阳性）。→红肿硬结＜5mm，阴性。意义：→阳性：感染过，或BCG成功，有免疫力→强阳性：现在活动性→阴性：没有感染过/未接种BCG→假阴性：①感染初期，老年人，严重结核合并其它传染病；②使用免疫抑制剂；③艾滋病等免疫功能低下者临床意义（掌握）

1-2生物学特性（掌握）

1-3■形态染色：菌体细长微弯，有分枝，排列不规则，单个散在或呈分枝状排列，菌体常聚集一起呈索状、束状或堆积似“菊花冠”状菌团。易发生L型，抗酸染色呈红色（阳性）。生物学特性（掌握）1-3■培养特性专性需氧，营养要求高，罗氏培养基（L-J培养基）。温度37℃，pH偏酸6.5-6.8，生长缓慢，18h分裂一次。2-4W形成R型菌落，“菜花样菌落”，乳白色干燥不透明，表面呈颗粒结节，边缘不整。馋懒丑生物学特性（掌握）1-3■生化反应不发酵糖类触酶试验阳性，而热触酶试验阴性对某些理化因子的抵抗力较强：耐干燥耐酸碱耐化学消毒剂湿热紫外线不耐受酒精“三耐三不耐”■抵抗力生物学特性（掌握）1-3典型形态→多形性R型菌落→S型菌落有毒→无毒（卡介苗）卡介苗：是有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油、胆汁和马铃薯的培养基中经13年230次传代而获得的减毒变异株抗结核药敏感→耐药■变异性微生物学检测（掌握）

1-4■标本的采集痰标本容器应采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶或可封闭塑料盒收集痰标本。痰标本性状：干酪痰，血痰，黏液痰、脓性痰为合格标本，唾液为不合格标本。微生物学检测（掌握）

1-4■直接涂片检查直接涂片或浓缩集菌涂片，使涂片面积大约为2cm×1cm大小，然后进行抗酸染色和金胺O荧光染色。微生物学检测（掌握）

1-4■分离培养■结核分枝杆菌培养阳性是确诊结核病的“金标准”。■改良罗氏培养法是目前较为成熟的分离培养方法。■分枝杆菌L-J培养，需要标本的前处理（4%NaOH）。目的：1）杂菌；2）液化。微生物学检测（掌握）

1-4生化试验鉴定烟酸累积试验（+）、硝酸盐还原（+）触酶（+）、耐热触酶（-）能被NAP抑制不被T2H抑制、吡嗪酰胺酶（+）依据抗酸染色性、菌落特征、生长速度、色素产生等作出初步鉴定，进一步鉴定可做以下试验：4.免疫学鉴定（1）结核菌素试验：迟发型超敏反应。（2）结核分枝杆菌抗原检测（3）抗PPDIgG检测思考练习1.结核分枝杆菌侵入机体的途径有_____、_____、_____等。最常见的结核病为_____。抗结核免疫为______，属于_____。2.结核分枝杆菌不产生内、外毒素，也无____和_____酶，其致病因素与_____、_____、_____等有关。（）3.结核杆菌属兼性厌氧菌。（）4.结核杆菌培养常用罗氏培养基，其PH值为7.2～7.6。（）5.结核分枝杆菌抗酸染色呈红色，故为抗酸菌。2非典型分枝杆菌光产色分枝杆菌（Runyon群Ⅰ）（了解）2-1暗产色分枝杆菌（Runyon群Ⅱ）（了解）2-2不产色分枝杆菌（Runyon群Ⅲ）（了解）2-3迅速生长分枝杆菌（Runyon群Ⅳ）（了解）2-4非典型分枝杆菌（了解）

2-0■除结核杆菌，麻风杆菌以外的分枝杆菌。■对酸、碱敏感，对常用抗结核药耐受。■多存在于环境中。■条件致病菌（机体抵抗力下降），主要引起肺部结核样病变，皮肤溃疡，淋巴结炎等。■根据NTM在固体培养基上的生长速度与光线对其产生色素的影响，Runyon分类法将其分为四个群。 光产色分枝杆菌（Runyon群Ⅰ）（了解）2-1本组细菌在暗处为奶油色，曝光1小时后再培养即成橘黄色。本群主要有：堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、猿分枝杆菌等。暗产色分枝杆菌（Runyon群Ⅱ）（了解）2-2这类细菌在无光暗处培养时菌落呈黄色或橘红色。在37℃生长缓慢，菌落光滑。对人致病的有瘰疬分枝杆菌(M．scrofulaceum)、苏尔加分枝杆菌、戈登分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌。不产色分枝杆菌（Runyon群Ⅲ）（了解）2-3无论是否光照，菌落通常不产生色素，而呈现灰白或淡黄色。40～42℃下生长缓慢，菌落光滑。本群主要有鸟-胞内分枝杆菌(M．avium-intracellulare，MAI)、蟾蜍分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、土地分枝杆菌、胃分枝杆菌等。迅速生长分枝杆菌（Runyon群Ⅳ）（了解）2-4在25～45℃生长较快，培养5～7天即可见到生长的菌落，菌落粗糙，部分能产色素。对人致病有偶发分枝杆菌(M．fortuitum)、龟分枝杆菌(M．chelonei)和溃疡分枝杆菌(M．ulcerans)。3麻风分枝杆菌临床意义（熟悉）3-1生物学特性（熟悉）3-2微生物学检测（熟悉）3-3（1临床意义（熟悉）3-1人类为唯一宿主和唯一传染源，致病因素不清。■传染源：病人（瘤型麻风病人通过皮肤黏膜及外分泌液向外排菌）■传播途径：皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触传播（家庭内传播多见）■潜伏期：2-5年，长者数十年■特点：潜伏期长，发病慢，病程长的慢性传染病■麻风病变可分为四型：1、瘤型麻风：（恶性麻风）侵犯部位：皮肤黏膜、神经及内脏病变中大量麻风细胞传染性强：分泌物中大量麻风杆菌——开放性麻风。细胞免疫缺陷（麻风菌素试验阴性）免疫状态：体液免疫正常（抗原抗体复合物沉积）病变：肉芽肿，麻风结节临床表现：“狮面容”，病情严重，逐渐恶化。（1临床意义（熟悉）3-12、结核样型麻风（良性麻风）60-70%侵犯部位：皮肤、周围神经传染性小——病变处少见麻风细胞及麻风杆菌免疫状态：细胞免疫接近正常（麻风菌素试验阳性）病变：淋巴细胞上皮样细胞，巨噬细胞浸润临床表现：皮肤——边缘清楚的红色斑疹，由于细胞浸润变粗、变硬——可触及，外周神经出现感觉功能障碍3、界限类4、未定类，具有上述两个型的特点，可转化。（1生物学特性（熟悉）3-2■大小、形态、染色均与结核杆菌类似，■呈束状排列，多存在于细胞内——麻风细胞（有大量麻风杆菌存在的感染细胞，呈泡沫状）。■目前人工培养尚未成功。■动物模型：犰狳，对该菌高度易感，接种后引起瘤型麻风。人对该菌抵抗力强，接触者仅少数发病。（1微生物学检测（熟悉）3-3麻风的诊断目前主要基于临床表现和皮肤涂片检查，现已有一些方法如组织病理学检查、小鼠足垫接种、血清学实验、PCR技术等，以提高麻风的早期诊断技术。思考练习1.麻风分枝杆菌主要是通过与传播。2．试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要意义。3.目前广泛用于麻风分枝杆菌研究的动物模型是A大白鼠B小白鼠C恒河猴D犰狳E豚鼠4.目前麻风病微生物学诊断的主要方法是A直接镜检B分离培养C麻风菌素试验D动物试验E血清学试验《微生物检验技术》教学培训课件曾凡胜----结核分枝杆菌的鉴定导入1知识讲授----生物学特性1知识讲授----变异性与致病性2知识讲授----感染类型2原发感染和原发