痰培养标本采集时间频率

呼吸道标本的采集.送检和接种办理一.痰培育标本的采集光阴及频次是什么?在抗生素运用前采集痰标本.2.最幸亏清晨采集痰标本.多数患者在清晨痰许多,且含菌量也多,特别是对平时平庸痰量少的患者,清晨采痰相对轻易.3.关于肺炎,若是能采集到比较想象的痰液时,建议一个磨炼周期(4天)内只送1次痰标本,不用连续送检,更不建议24小时内多次采集,除非痰液外不雅性状消逝突然转变.4.疑惑分枝杆菌沾染者,应连续采集3天清晨痰液送检.二.痰标本的采集方法有哪些？天然咳痰法：留取前刷牙,用清水漱口3次(或硼酸漱口),以除掉口腔内大多数杂菌,以后先深吸气,再使劲咳出呼吸道深部的痰液吐至一次性无菌痰怀(痰培育适用)或专用蜡浸小纸盒(抗酸杆菌涂片适用)内,盖好盖子.若是患者痰液较深,或许粘稠难于咳出时,可采纳3%～5%的Nacl溶液(气道刺激高反应的患者如哮喘,不宜运用).氯化铵溶液.N-乙酰-L-半胱氨酸溶液进行雾化吸入,以帮忙排痰,最正确痰液采集量为2～10m1,最低不克不及少于1ml.特别取痰法：由临床医生采集,依照方法的不合,重要有：纤支镜抽吸法：纤维支气管镜检讨可直接从肺部沾得病灶获取支气管排泄物,操控较为安稳.用支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的沾得病原菌,但也不克不及完整防备咽喉部正常菌群污染,防污染珍爱套下采集的样本拥有较大价值,常常运用的采集方法有：收集支气管肺泡灌洗(BAL).经支气管镜直接吸引或用防污染样本毛刷采集

!在欧美已将该方法采抜的标本作为代替金尺度力法

(肺穿抽吸或活检

)用呼吸道沾染的诊疗中经人气道吸引排泄物

(ETA)：经人气道吸引是今朝临床对不克不及天然咳痰的患者较为常常运用的力法.但由于气管插管等侵入性操控,原有的天然樊篱防守机制遇到损害,以及长久平卧后气道排泄物的坠积毁伤气管局部黏膜造成黏膜的自洁才能损掉,情况微生物.口腔菌群常下行定植下气管中而不再保持无菌情况,因此此方法采集的标本相同会遇到定植菌群的污染,也应该在培育前先做及格性筛查.经气管穿刺吸引物(transtrachealaspiration,TTA)：由于采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道下常菌群的污染,曾较广泛推选运用于下呼吸道细菌性沾染的病原学诊疗,特别适合于厌氧菌培育.但此方法属于侵入性方法,患者比较苦楚,不轻易接收.经胸壁针刺吸引物(transthoracicneedleaspiration,TNA):关于沾染性疾病,法方法只用于诊疗一些原由不明的肺炎(特别在少儿)和免疫弊端患者的肺炎,或贴近胸壁的肿块病灶的标本采集;胃内采痰法：清晨空腹时,将胃管拔出胃内,用打针器抽取胃液.适用于无自觉症状的肺结核患者特别是婴幼儿(由于婴幼儿不会咳嗽,常将痰液存入胃中),由于胃内痰液中的大多数细菌被胃酸杀去世,而结核杆菌可抵挡胃酸,该样本比较适合作结核分枝杆菌培育.小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌,用棉拭子伸入咽部,小儿因压舌刺激咳嗽可喷出痰液黏在拭子上,进而获取标本.或许先令患儿怙恃平坐于无扶手椅子上,将患儿头向左俯卧平放于怙恃的双腿上,医护人员用右手轻轻拍打患儿背部,左手翻开痰杯盖子,持握痰杯的同时用手指轻轻按压其咽喉部天突穴处,刺激其咳嗽,由于俯卧,患儿没法将痰液吞下,只好从口中吐出,此时用痰杯顺手接住即可达成采样.三.为何痰标本采集前应进行口腔洁净由于人体喉以上呼吸道黏膜概略及唾液中含有大批正常菌群;口腔卫生情况差者,以及老年.重症或住院患者的上呼吸道定植菌更多,以致经过口咽部咳出的痰常遇到正常菌群和定植菌的污染,影响成果的剖断,因此为了减少污染,采集痰液前需进行口腔洁净.四.痰标本的输送.保存.查收和挑选痰标本输送和保存时应留神什么？标本采集后需赶快(小于2小叫)送至实验室,输送耽误可以致肺炎双球菌.流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界情况和自溶现象而去世亡;延缓送检或待办理标本应置于10--20“C室温保存,既可防备苛养菌去世亡,也能防备杂菌迅速发展,保存光阴不得高出24小时;对可疑烈性呼吸道传得病(如SARS.肺炭疽.肺鼠疫等)的患者磨练标本,在采集.输送或保存进度中一定留神生物安稳防备.(2)奈何查收挑选痰标本‘?申请单填写应完整,条码清楚,表记唯一.容器内标本与申请单符合,采集时同在划定规模内.若是高出24小时应拒收.对侵入性操控获取的标本,须与医生磋商办理方法,并作记录.标本容器一定符合划定,密闭无溢漏.否则拒收.黄色.灰色.血性.铁锈色,浑浊.加厚,体现团块状的标本为及格标本;而无色.白色.有黑色小点,不清楚,体现泡沫状,有明显食品剩余.纸屑灰尘.土壤的为不及格标本,应拒收.显微镜筛查,脓细胞＜10/HP或复层鳞状上皮＞25/LP的标本为不及格标本,应退回.所采集的标本种类与申请项不符合(如恳求痰液的厌氧培育,未采纳穿刺法取痰,未用打针器等厌氧装置输送;恳求做痰培育却运用未灭菌的抗酸杆菌专用痰盒,等等),应拒收.一致患者同时送检多份痰液,或一致天送检多份申请项目相同的痰液,只选做其中质量较好的一份,其余痰液全体退回.以培育为申请项目标痰液,当标本量少于1ml时,应拒收.拒收与退回标本应详细填写拒收记录和反应单(或许在信息系统上填写反应并提交).下呼吸道沾染标本中哪些不适合做厌氧培育哪些标本能够用于厌氧培育?为何?易被口咽部排泄物污染的标本如咳痰.导痰.经口腔或鼻腔吸引的痰液.经人工气道吸引的排泄物和直接经纤支镜吸引的下呼吸道标本由于遇到正常菌群中大批厌氧菌的污染,均不可用于厌氧培育.防污染毛刷刷出物(PSB).经气管穿刺吸引物(TTA).经胸壁针刺吸引物(TNA).开胸肺活检(0LB)组织标本,由于防备了上呼吸道正常菌群的污染和防备与氧气接触,可用于厌氧培育.下呼吸道沾染及格标本的特点有哪些？一般以为,来自下呼吸道的及格标本应该是含脓细胞和支气管柱状上皮细胞许多,而受唾液污染稍微的不及格标本则来自颊黏膜的鳞状上皮细胞许多.奈何进行痰标本的及格性筛查?痰标本留取后应先涂湿片,在不染色的情况下即可进行.将接种针前端5mm处折弯,曲成直角做成接种钩,挑取黄豆大小痰块,在载玻片上涂布开,使成(2×2)cm2大小的涂膜或许直接加(2×2)Cm2的盖玻片,轻压使痰块张开,放在显微镜下不雅察.依照《全国临床磨练操控规程》供应的尺度,鳞状上皮细胞＜10/LP,且白细胞＞25/LP者为及格痰标本.但经由现实不雅察关于天然咳痰采集的痰标本,白细胞≥25/HP(相当于≥100/LP)的痰标本与下呼吸道沾染拥有较高的一致性,可将一些拥有溢出的非沾染性的肺部疾患除去在外.而若是鳞状上皮细胞≥25/LP,解说标本可能只是是唾液或许被稍微污染,应拒收.关于既有脓性成分,又有唾液成分的混淆性痰标本奈何办理?前辈行洗净,分别出脓性成分,再进行镜下挑选.若是脓性成分满足挑选前提,痰标本仍可运用;否则应弃去.接种培育痰标本的预办理.涂片.染色.镜检,消化与接种培育下呼吸道细菌学磨炼的标本进行细胞学和细菌学和显微镜检讨的目标是什么？下呼吸道标本涂片进行细胞学检讨的重要目标是对送检标本进行质量评论,确认其能否应该进入下一步磨炼流程;其次,可初步断定标赋性质属于沾染性仍旧肺沾染性[比如纯真性未合并细菌沾染的肺癌.硅慌张病(矽肺).过敏性支气管炎.哮喘.支气管扩大等肺病的病理性痰液就属于非染性].解析标本能否须要进行细菌培育.下呼吸道标本涂片进行细菌学检査的重要目标是经由过程不雅察有无细菌,细菌的形态特点和染色特点,细菌的数量.分布,以及各种细菌与炎症溢出的白细胞之间的相互感动(吞噬.包裹.伴行),解析判定标本中与沾染相关的病原菌,将其与正常菌群或定植菌相鉴别,并依照形态特点揣摸其大概的种类,并有助于形态特别微生物的迅速诊疗.有益于选择适合的首代培育基.最重要的意义是痰涂片显微镜磨炼对所有痰培育流程起到决策性的导航感动,第二天固体培育基上的菌落不雅察相结合,挑选出存心义的菌落进行下一步实验.决策痰培育陈说的最后精准性和临床符合率.痰涂片湿片检讨的目标是什么?痰或下呼吸道标本的湿片检讨可迅速供应某些特其余重要信息,尤其是对下呼吸道真菌沾染(侵袭性曲霉菌沾染.毛霉菌沾染等)的快速诊疗拥有重要意义.方法：将痰液与10%KOH溶液为增强结果,推选运用10%甘油水溶液配制)在载玻片混匀,盖上盖玻片,放到显微镜下暗视线不雅察.当标本中含有大批细胞碎片刻,载玻片可在火焰上过一下,轻轻按压盖玻片使标安分别.当査见鹿角样分开菌丝时提示曲霉菌沾染,査见无分支或分支较少的无隔菌丝时可能为毛霉菌沾染.(3)为何痰培育标本要进行洗净的预办理？奈何办理?由于于上呼吸道有大批正常菌群定植,除了侵入性操控采集的标本(如PSB.TNA或TTA可避开上呼吸道正常菌群外,其余呼吸道标本如天然咳痰.支气管冲刷液.气道吸引痰等均不可防备地被口腔菌群污染,为防备太多菌群扰乱磨炼,所与有须要对痰标本进行洗净办理.方法：在一次性痰杯中参加15～20ml灭菌心理盐水,强烈振荡5～10秒(可运用振荡器的强挡),而后用接种钩遴选出症液中的脓性部分

,或将积淀于杯底的脓痰小片钩出放入另一个无菌杯中

,反复上述步伐

,如斯清洗

2~3

次,

即可达到恳求

.(4)奈何制备一张尺度的痰涂片

?痰涂片关于痰培育的最后价值拥有决策性意义,而制备好一张优秀的痰涂片关于染色,镜检都拥有异样大的帮忙.革兰染色：采纳压片法制备薄涂片.方法：从清洗后的痰液中挑取最拥有代表性的脓痰小片或从脓痰块中最模范的部分切下一小块用于制片大小如绿豆,置于一张洁净载玻片的此侧端,左手持玻片于火焰或灭菌红外灯前轻轻加热,此时右手取另一张冷的载玻片“十”字交叉,将痰块夹在两张玻片中心,按压使之充分张开,压住不要松开,向右边缓慢匀速地拖动,即可达成一张痰涂片.如斯,制备的涂片,薄而均匀,便于染色脱色,由于细胞充分张开,便于不雅察胞内吞噬现象.抗酸染色：采纳抹片法制备厚涂片.方法：运用去掉落棉头的棉签断端挑取痰液的脓性部分在载玻片中心作画圆状涂抹,厚度以能透过涂膜,看清不睦的文字为宜.奈何染片和阅片?1.经典染色方法各种教科书和各个版本的规程上都详细阐述.这里介绍经由本章节作者改良后的革兰染色方法,试剂运用书籍上介绍的经典革兰染色液,将碘液改为Albert碘液对倍稀释,脱色液运用3：7(v/v)的丙酮酒精溶液,复染液改为1：5(v/v)稀释的碳酸复红.染色进度：滴加结晶紫染色液笼盖涂片染色1分钟,蒸馏水冲洗;丢掉落剩余水滴,滴加碘液笼盖涂片1～2分钟媒染(室温低于20℃时作响应延长),蒸馏水冲刷;丢掉落剩余水滴,滴加丙酮酒精液脱色时,需不断晃悠玻片,使液体矫捷均匀笼盖涂片,1～2秒后倒掉落,不冲刷,再次滴加脱色液,晃悠笼盖,脱色3～4秒后倒掉落,仍不冲刷,又滴加脱色液进行第三次脱色,此时缓慢晃悠玻片,脱色4～6秒后蒸馏水冲刷;丢掉落剩余水滴,滴加稀释复红,晃悠玻片混匀染液后笼盖涂片复染1分钟用蒸馏水冲刷,天然润湿或滤纸吸干后上油镜.今朝,各种商品化染色液层见叠出,质量参差不齐,配方均进行了不合程度的改正,其解说书恳求的染色操控流程各不相同.但是,为了达到最正确染色结果,运用新厂家的染色液时多一定进行流程探究.除了运用混淆菌进行质控之外,还应该运用痰涂片.脓液涂片.血涂片,以及粪便涂片进行现实染色结果考证,找出一个最正确染色流程.流程一定后,微生物室所有成员一定严苛执行该流程,不允许任意任性改正.痰涂片阅片才能的培育,是一项渐渐聚集的进度,须要经由天长日久频频的增强练习才华培育.优胜的练习计划应将阅片与第二天的菌落不雅察相结合,渐渐建立起理性熟习.其余,由于痰涂片中的细菌经由抗生素和人体免疫因子(白细胞溶酶.补体.抗体)的影响后其形态与对数期纯培育物不太一致,须要总结各种稀有细菌的形态变异特点.运用药敏实验中出于亚控制情况下的细菌涂片染色镜检能迅速总结经验.所谓亚控制情况细菌等于指,处于抑菌环边缘或比MIC低一个梯度浓度孔中的细菌.阅片技术：1.先在低倍镜下查找适合阅片的地区,该地区脓细胞呈团块状分布,分别而不浓密,且周围无鳞状上皮细胞或无大批呈团状分布的细菌球.2.用心找寻脓细胞胞质中有无吞噬的细菌或真菌孢子,留神细菌

,/真菌的染色排列特点(如成双.链状.并行.分枝.葡萄状.放射状.文字形.栅栏状.条索状等),菌体特点(如大小.粗细.长短.歪曲);有无真菌菌丝团块或许放线菌菌丝被结节状分布的炎性细胞包裹.3.差异吞噬与黏附的方法：位于细胞核上的细菌为黏附;细菌与细胞核不在一致层面上的为黏附;多种不合形态和染色特点的细菌纠结成球状者为黏附;链球菌一致条链,部分在细胞上,部分在细胞外时为黏附;真菌在脓细胞中未产生占位现象的为黏附;革兰阳性细菌染色深浅与胞外菌完整相同时商酌为黏附.胞内菌体周围有一圈微弱狭窄淡染区的为吞噬;由于细胞的位阻效应以致胞内菌染色相对于胞外角偏淡,加之受溶酶体的破坏,胞内G‘细菌染色体现班驳不均现象;胞内G杆菌菌体拥有膨大趋势;真菌孢子会将细胞核挤到细胞的边缘,形成新月形.不雅察细菌与细胞分布的相关性,若是某种形态的细菌在片中,细菌多的地方细胞少,而细胞多的地方细菌少,那么这类形态的细菌多为定植菌;反之即便没有吞噬,也应商酌为沾染菌;关于产荚膜的细菌,吞噬现象的不雅察比较艰辛,采纳分布相关性(即伴行行动)比较轻易找到沾染菌.其余,关于产生荚膜的细菌,只需用心找寻,荚膜低表达或荚膜损掉的菌体,也能在胞内发明.丝状真菌和诺卡菌以及其余放线菌由于菌体较大,其产生的炎性反应为包裹涌现,即真菌菌丝团块或许丁放线菌菌丝被结节状分布的大批炎性细胞包裹.6.特别细菌的辨识：流感杆菌在脓细胞内为

G-微小杆菌

,灰尘样分布,

常常一个细胞中吞噬大批的细菌

;卡他莫拉菌

(以及其余莫拉菌)为G-双球菌,胞外细菌量大,而胞外菌分布较少,且无荚膜;鲍曼不动杆菌为G-球杆菌,眼镜形,由于产荚膜,其分布特点是胞内菌较胞外菌少;金黄色葡萄球菌在痰涂片中轻易辨识,胞内成对或葡萄状排列,染色比胞外菌偏淡;铜绿假单胞菌为G-细而刚正的杆菌,散在排列;粘液性铜绿则在胞外形成明显淡染的粘液层,大批细菌会合成片状分布;肺炎克雷伯菌为G-粗大杆菌,成对排列,胞外菌多有厚重荚膜;其余肠杆菌科细菌及气单胞菌为G-规矩杆菌,形态与大肠埃希菌相像;肺炎链球菌为G-矛尖状双球菌,胞外菌有厚重荚膜,而胞内菌染色偏淡且班驳不清,轻易漏诊;嗜麦芽寡养単胞菌为G-修长杆菌,并行排列形成筷子样,菌体常常有波折;化脓性链球菌在涂片中为G+长链状排列的球菌,菌体为正圆形,比葡萄球菌小,咆内菌染色偏淡,易消逝班驳.隐球菌在校涂片中为G-大球形真菌孢子,周围向不着色的荚膜,在涂片中染色较淡,易漏诊,咆内菌着色班驳,或形成不看色的球形空泡,在细胞内具明显的占位,细胞核被排挤到边缘形成新月形.为何痰培育标本要进行均质化的预办理？奈何办理?答：一般情况下病原菌沾染肺部,其部位鄙人呼吸道深部,炎性溢出物为了将炎症限制,病原菌被包裹在其中,由于肺属于与外界情况单向相通的脏器,溢出的病理产品不轻易及时排出,沾染灶中炎症溢出物频频包裹,层层叠叠,病原菌常常位于包裹物的最里层,位于脓细胞胞质中.若直接接种于培育基上,包裹物中有价值的细菌很难打破包裹在培育基上发展,而痰的均质化有助于包裹物内部细菌的流露,可进步沾染菌的阳性检出率.方法：痰均质化法以胰酶均质化为常见.其方法为：在盛装痰标本的容器中参加等量用无菌P7.6的磷酸盐缓冲液(PBS)配制的l%的胰蛋白酶溶液,搁置35℃培育箱内消化90分钟即能使痰液均质化,而对细菌培育无影响.其余,可运用无菌心理盐水取代灭菌PBS,但消化效能较低,须要延长消化光阴至120分钟.其余,还可用玻璃组织研磨器.痰标本培育能否可用肉汤增菌或高选择性培育基?为何?答：不想法采纳肉汤増菌或高选择性培育基等极端的方法.由于肉汤増菌后与沾染不相关的细菌也一起增殖,很多时刻与沾染不相关的污染菌发展速度大于H标细菌,以致目标细菌由于竞争控制而无法分别.再则,增菌后标本的原始情况产生转变,最后以致培育成就没法代表患者体内的真切情况,使痰培育掉去应有的诊疗价值.而高选择性培育基则又是另一个极端.由于以致肺部沾染的细菌多种多样,目标菌常常未知,进行痰培育时,我们的分别目标其实不理解,采纳高选择性培育基将会由于培育基的选择性过强而控制真切有价值的微生物,以致稍微的漏诊.因此高选择性培育基在痰培育中不常运用.除非是有目标性地选择分别某些特定的微生,比如嗜肺军团菌.痰标安分别培育基的选择.接种及培育成就解析(菌落不雅察)奈何进行?答：1.一般细菌培育应同时划区接种：血平板：适用于分别肺炎链球菌和其余细菌.加抗生素的巧克力平板：适用于分别嗜血杆菌.麦康凯/中国蓝平板：适用于分别革兰阴性杆菌;CHROMagar或含抗毒素的SDA：适合于分别曲毒菌.毛霉菌或许稀有沾染的酵母样真菌,如隐球菌.分别培育：血平板和巧克力平板置于5%CO2情况,麦康凯平板中国蓝平板置大气情况,于35℃孵育;而CHRO