细胞融合和单克隆抗体制备

关于细胞融合和单克隆抗体制备第1页，共26页，2023年，2月20日，星期五考纲要求2.2.2细胞融合与单克隆抗体

细胞融合与单克隆抗体

ⅡⅠ：对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它们。Ⅱ：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理和评价。第2页，共26页，2023年，2月20日，星期五回顾：1、抗体的化学本质？2、抗体由什么细胞产生？

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞（浆细胞）产生抗体。第3页，共26页，2023年，2月20日，星期五小资料：2010年全球治疗用单克隆抗体药物的销售总额达到440亿美元，如果加上100亿美元的单抗诊断和研究试剂，单抗药物的市场总量达到550亿美元。2011年单抗药物的市场总量已经达到628亿美元。到2015年，全球单克隆抗体药销售额达980亿美元。我国的单克隆抗体药物从无到有，并且在我国医药市场发挥越来越重要的作用。目前我国单抗市场规模每年以50%以上的速度递增。

准确识别各种抗原物质，并与特异性结合，可以起到诊断、治疗疾病的效果。第4页，共26页，2023年，2月20日，星期五—把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体。浆细胞—产量低，纯度低，且抗体的特异性差。回顾体液免疫过程思考1：传统的生产抗体方法是？思考2：用该方法生产抗体有什么缺点？第5页，共26页，2023年，2月20日，星期五1个B细胞

B细胞群

大量专一抗体1.克隆单一的B淋巴细胞，形成B细胞群，需要用到什么技术？2.对B细胞进行克隆化培养可行吗？为什么？3.哪种细胞可以大量增殖呢？4.如何获得既能产生专一抗体，又能无限增殖的细胞呢？如何制备纯度高、特异性强的抗体呢？只能分泌一种特异性抗体设计方案1：单克隆抗体：由单一B细胞克隆产生的高度专一、仅针对某一特定抗原的抗体。

第6页，共26页，2023年，2月20日，星期五杂交瘤细胞动物细胞培养技术诱导细胞融合需要什么技术？骨髓瘤细胞

+一种特定B细胞大量的化学性质单一的抗体设计方案2：既能分泌抗体又能无限增殖第7页，共26页，2023年，2月20日，星期五细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等诱导的手段？原理？动物细胞融合融合成功的标志：细胞核融合第8页，共26页，2023年，2月20日，星期五植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合融合原理融合的方法诱导方法用途细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性去壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒获得杂种植株制备单克隆抗体第9页，共26页，2023年，2月20日，星期五单克隆抗体的制备第10页，共26页，2023年，2月20日，星期五注射抗原B细胞骨髓瘤细胞融合注射抗原的目的是什么？单克隆抗体的制备诱导产生相应的效应B细胞第11页，共26页，2023年，2月20日，星期五诱导细胞融合后，培养基中有几类细胞？B淋巴细胞B淋巴细胞—B淋巴细胞B淋巴细胞—骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞（杂交瘤细胞）单克隆抗体的制备注射抗原B细胞骨髓瘤细胞融合第12页，共26页，2023年，2月20日，星期五杂交瘤细胞资料分析1：细胞内DNA复制有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。B淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但体外培养时一般不会分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，但能不断分裂增殖。多种杂交瘤细胞思考：请根据资料设计方案选出杂交瘤细胞。选出杂交瘤细胞都能产生同一种抗体吗？为什么？方案：选择培养基培养（即加入氨基嘌呤）

结果：杂交瘤细胞第13页，共26页，2023年，2月20日，星期五24孔板资料分析2：（1）多孔细胞培养板：将细胞培养液稀释后，转移到多孔细胞培养板上，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。（2）抗体能够特异性识别抗原并与之结合。思考：请根据资料设计方案选出能产生专一抗体的杂交瘤细胞。方法：克隆化培养+抗体检测结果：能产生专一抗体的杂交瘤细胞第14页，共26页，2023年，2月20日，星期五多种杂交瘤细胞选择性培养基

筛选1专一抗体检验阳性克隆化培养

筛选2单克隆抗体的制备产生专一抗体的杂交瘤细胞归纳提升：制备单克隆抗体过程中两次筛选的方法、目的？第15页，共26页，2023年，2月20日，星期五多种杂交瘤细胞选择性培养基

筛选1专一抗体检验阳性克隆化培养单克隆抗体

筛选2培养杂交瘤细胞的方法有哪两种？单克隆抗体的制备特异性强，灵敏度高，并可大量制备。产生专一性抗体的杂交瘤细胞第16页，共26页，2023年，2月20日，星期五1、作为诊断试剂2、用于治疗疾病和运载药物准确、高效、简易、快速把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合，制成“生物导弹”。应用主要有：单克隆抗体的制备“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）第17页，共26页，2023年，2月20日，星期五构建概念模型1.完成学案中单克隆抗体的制备过程流程图分组展示第18页，共26页，2023年，2月20日，星期五1.背诵记忆以下问题，同位间相互检测（1）为何要给小鼠注射抗原？获取的B淋巴细胞只有一种吗？（2）制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？（3）如何诱导诱导细胞融合？细胞融合后，培养基中有几类细胞？（4）单克隆抗体的制备过程中两次筛选方法、目的分别是什么

？（5）杂交瘤细胞的特点？单克隆抗体的优点？（6）杂交瘤细胞的培养方法有哪两种？（7）制备过程采用了哪些动物细胞工程技术手段？（8）单克隆抗体的应用？记忆整合第19页，共26页，2023年，2月20日，星期五思考：1.本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？

杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体3.两次筛选的方法和目的？（1）用选择性培养基，选出多种杂交瘤细胞；（2）克隆化培养和抗体检测，选出能产生特定（单一或相应）抗体的杂交瘤细胞。4.单克隆抗体的优点特异性强，灵敏度高、可以大量制备第20页，共26页，2023年，2月20日，星期五巩固训练1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞

C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.操作步骤基本相同D.都能形成杂种细胞D3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D第21页，共26页，2023年，2月20日，星期五变式训练1、完成步步高243页第2题2.单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广泛应用于疾病的诊断和治疗。用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下图所示：第22页，共26页，2023年，2月20日，星期五2014•新课标Ⅰ，40某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目为40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目为60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。体验高考1、完成步步高244页第3题第23页，共26页，2023年，2月20日，星期五回答下列问题：(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过___次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是__小鼠，理由是______。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交廇细胞外，还含有_____________________________，体系中出现多种类型细胞的原因是___________。(3)杂交瘤细胞中有__个细胞核，染色体数目最多是____条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_____________。第24页，共26页，202