04实验四 气相色谱法检测山梨酸和苯甲酸含量

实验四气相色谱法检测山梨酸和苯甲酸含量一、实验原理与目的1、目的要求：掌握采用气相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸的含量，学会样品的制备和处理方法，学会使用气相色谱仪。2、测定原理：试样酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。二、 试剂与材料（食品中山梨酸、苯甲酸的测定（依据GB/T5009.29-2003）2.1乙醚：不含过氧化物。2.2石油醚：沸程30°C〜60°C。盐酸。无水硫酸钠。2.5盐酸（1+1）：取100mL盐酸，加水稀释至200mLo2.6氯化钠酸性溶液（40g/L）：于氯化钠溶液（40g/L）中加少量盐酸（1+1）酸化。2.7山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g,置于100mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。2.8山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、250Mg山梨酸或苯甲酸。三、 仪器与设备1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。。2 。3天平：感量为1mg。4干燥恒温箱。5瓷坩埚。 6压力消解器、压力消解罐或压力溶弹。7可调式电热板、可调式电炉。四、 分析检测过程或操作方法4.1试样提取称取2.50g事先混合均匀的试样，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸（1+1）酸化，用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1min,将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化钠

酸性溶液（40g/L）洗涤两次，静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中，置40°C水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解残渣，备用。4.2色谱参考条件4.2.1色谱柱：玻璃柱，内径3mm,长2m，内装涂以5%磷酸固定液的60目〜80目ChromosorbWAW.4.2.2气流速度：载气为氮气，50mL/min（氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件）。4.2.3温度：进样口230C；检测器230C；柱温170C。4.3测定进样2pL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2pL试样溶液，测得峰高与标准曲线比较定量。五、结果计算试样中山梨酸或苯甲酸的含量按式（1）进行计算。X= 右x1000X= 右x1000mxAxX1000式中：X——试样中山梨酸或苯甲酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——测定用试样液中山梨酸或苯甲酸的质量，单位为微克（Ug）;V]——加入石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂的体积，单位为毫升（mL）；V2——测定时进样的体积，单位为微升（卩L）；m 试样的质量，单位为克（g）;5 测定时吸取乙醚提取液的体积，单位为毫升（mL）；25——试样乙醚提取液的总体积，单位为毫升（mL）。由测得苯甲酸的量乘以1.18，即为试样中苯甲酸钠的含量。计算结果保留两位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％其他山梨酸和苯甲酸的气色相谱图见图1。山梨酸保留时间2min53s；苯甲酸保留时间6min8s。六、问题与思考要点说明思考题1七、知识链接肉制品中亚硝酸盐的发色剂作用八、实验实训要求与任务一、撰写实验报告，要求如下内容和格式：实验项目名称：（如食品中亚硝酸盐含量的测定）一、实验原理与目的二、试剂与材料三、仪器与设备四、分析检测操作过程五、结果与计算六、问题与思考二、实验前准备1、了解哪些食品中亚硝酸盐含量较高？亚硝酸盐有什么危害？如何产生的？2、了解亚硝酸盐检测方法？重点掌握分光光度法如何检测？样品如何制备和处理？3、如何查找亚硝酸盐检测标准？食品中亚硝酸盐限量标准？4、检测亚硝酸盐时应注意什么？如何提高亚硝酸盐检测准确度？5、怎样确定分光光度计的最大吸收波长。如果我们测定的样品是橙色，则最大吸收波长的范围如何确定？6、什么叫空白实验？什么叫标准曲线？绘制标准曲线时应注意哪些方面？思考