毒性酶类试验

毒性酶类验（一）血试验1、原理某些细菌代谢过程中能产生溶血素可使人或动物的红细胞发生溶解不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。2试验方法

平板法

试管法（1）平板法将培养物接种于血平培养基上，36±1℃培养24～，观察结果。溶血试验溶血类型及象（）α（甲型溶:菌落周围现较窄的半透明的草绿色溶血环。（2）β（乙）溶血:菌周围出现较宽的透明溶血环。（）γ-型溶血菌周围无溶血环。（2）试管法将待检菌培养液与等的2%羊血球混合，在36±1℃

培养16察果溶血养液可出现透状。3结果观察与记有溶血现象，为阳性，记+；无溶血现象，为阴性，记-(二链激酶试验1原理：A群球菌群能产生激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解为性反应。此试验用于测定链球的致病性。阳性反应具有致病性。2试验方法：吸取草酸钾血浆mL(0.01g草酸加5mL血浆混匀经离心沉淀吸取清液)加mL生盐水，混匀后，再加入待检下培18-24h肉培养物mL0.25％氯化钙mL匀37℃水浴中，2min观察次。待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2内不溶化，继续放置h后观察。同用肉浸液肉汤做阴性

对照，用已知的链激阳性的菌株做阳性对照。3结果观察与记；如凝块全部溶化阳+凝块h仍不溶化为阴性-（三）卵脂酶试验1原理：些微生物能产生卵磷脂酶，在离子存在时，能迅速分解卵磷脂，成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄变混浊，以此鉴别细菌。2试验方法：（1）卵黄平板法A法：将待检菌培养物划线接种或种于卵黄琼脂平板上，361℃养～6h，观察结果。B法：先用卵黄磷脂酶抗血将平板涂一半，置于36℃待干后，将待检菌接种于未涂血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半361℃氧培养观察结

果。在未涂抗血清的一半板上，菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性。两边均无不透明区，阴性。乳糖卵黄脂平板借以确定菌可否产生磷脂酶。卵磷脂酶抗原性，其性可被相应抗清所抑制，（2）卵黄盐水法：将庖肉培养基培养物经除菌过滤收集滤液在支灭菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在管中加入滤液，一管加入生理盐水0.2mL作照。在36℃水浴中，经2h、4h、24h观结果。管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳。3结果观察与记：菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。两边均无不透明区，为阴性。管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳。

两管无沉淀者，为阴。（四）浆凝固酶试验1原理：病性葡萄球菌能产生血浆凝固，可使血浆中的纤维蛋白原转变成维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固象为阳性。2试验方法（1）玻片法：清洁干燥载玻片，一滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，min内血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊则为阳性两者呈均匀混浊无凝固为阴性。（2）试管法：取灭菌小试管3支各加入血浆①－无菌水(1:1)0.5ml，1支加入检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液0.5ml其余2支作对照管支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌液0.5ml作阳性对照;另支入营养肉汤或氯化钠溶作空白对照3同时放37℃

温箱或水浴中培养，0.5观