岛津SPDC高效液相色谱的使用

一.操作准备二.仪器组成三.操作过程四.注意事项目(Mu)录By孙毅第一页，共二十六页。1.1流(Liu)动相的配制一.操作准备By孙毅用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节。配制好的流动相应通过0.45μm适宜的滤膜滤过，用前脱气。应配制足量的流动相及时待用。第二页，共二十六页。一.操作准(Zhun)备1.2样品溶液的配制样品用规定溶剂配制成供试溶液。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm或适宜的滤膜滤过。必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

By孙毅第三页，共二十六页。一.操作准(Zhun)备1.3检查仪器状态检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。By孙毅第四页，共二十六页。LC-15C液相色谱泵、SPD-15C紫外-可见检测器、LCsolution

15c色谱工(Gong)作站。

仪器组成二.仪器组成By孙毅第五页，共二十六页。3.1接通电(Dian)源三.操作过程将各仪器电源插头插入插座内，按power键打开泵和检测器电源，打开泵（该仪器除梯度外可用单泵也可同时用双泵，用单泵可仅开一个泵，用双泵需两个泵同时打开，双泵操作与单泵操作基本一致）。By孙毅第六页，共二十六页。3.2泵(Beng)的操作三.操作过程打开泵和检测器电源，仪器由红灯转换为绿灯，更换所需的流动相，然后将排液阀旋钮逆时针旋转180°以打开排液阀。

按“purge”键运行，开始冲洗。如果排液阀旋钮旋转的度数超过180°，任何排出的流动相都可能包含气泡。这是正常现象。

By孙毅第七页，共二十六页。3.2泵(Beng)的操作三.操作过程等绿灯不再闪烁时代表清洗完成，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。按“pump”键，开始泵的运行。

By孙毅第八页，共二十六页。3.3工(Gong)作站的使用三.操作过程双击桌面Lcsolution

15c】图标，确认已经开启LC系统后，启动【LC实时分析”工作站。启动【LC实时分析】工作站后，确保分析仪器的所有单元（泵、柱温箱和检测器）都已连至系统控制器。确保所有单元上都没有显示任何错误消息。By孙毅第九页，共二十六页。3.3工作站的使(Shi)用三.操作过程设置系统配置，以便该系统与仪器的实际配置相匹配。仅当第一次将LCsolution

15c连接到分析仪器，或仪器的配置发生变化时，才需要下列设置。如果仪器的配置没有任何变化，点击“视图”里的助手栏，点系统配置用单泵或双泵进行运行。By孙毅第十页，共二十六页。3.4仪器(Qi)参数设置三.操作过程点【文件】项下【新建方法文件】，单击“仪器参数视图”下【正常】选项，可以在其中输入分析条件，例如LC停止时间、泵A流速、检测器A波长通道

等。确保为每一检测器设置了【LC停止时间】【结束时间】。

【LC停止时间】是控制仪器的持续时间。如果时间程序或馏分收集时间程序都没有设置，则将其保留为0.01min。By孙毅第十一页，共二十六页。3.4仪器(Qi)参数设置三.操作过程如用单泵运行，泵【模式】钩选“等浓度洗脱”（双泵运行勾选“二元高压梯度洗脱”），点【高级】选项卡中“泵”选项，设置泵A流速（一般为1.000ml/min）和压力限制最大值、最小值。如需双泵（如梯度洗脱等），点【LC时间程序】设置梯度洗脱表，单击“下载”将设置传输到仪器，使用新名称保存方法文件。By孙毅第十二页，共二十六页。进(Jin)样设置三.操作过程确保显示【就绪】，且【色谱图视图】中的基线稳定后（一般约需15～30分钟）。单击【LC实时分析】窗口助手栏上的“单次运行”图标，出现“单次运行”屏幕，设置样品名、样品ID、数据文件、数据描述、进样体积等，然后单击【确定】。By孙毅第十三页，共二十六页。检测器调(Diao)零三.操作过程检测器调零：点击“检测器A零点”图标，使检测器数值调零。By孙毅第十四页，共二十六页。3.5进(Jin)样三.操作过程吸取不少于20μl的样品，放在进样口，向左打开进样阀，将样品全部打入进样口，再向右打下进样阀，系统即自动开始采集数据。单次分析开始，并且【LC实时分析】窗口中的状态从【就绪】变为【运行】。By孙毅第十五页，共二十六页。3.5进(Jin)样三.操作过程当达到【仪器参数视图】中指定的检测器的【结束时间】时，自动终止数据采集。如设定的【结束时间】要修改，可以单击【采集】助手栏中的【停止】图标，也可以在【数据采集】菜单的【更改分析时间】项目中，在数据采集过程更改结束时间。一旦开始数据采集，【仪器参数视图】设置变为只读，并且不能在【仪器参数视图】中更改结束时间。By孙毅第十六页，共二十六页。3.6

数据(Ju)处理三.操作过程方法1单击“Lcsolution

15c”中的“再解析”，“LC再解析”开始。

选择【文件】菜单中的“选择项目文件夹”，然后选择预测定的数据文件，数据文件即打开。

By孙毅第十七页，共二十六页。3.6

数据(Ju)处理三.操作过程单击助手栏中的【向导】图标，单击“program”点击【下一步】，设置正确的积分参数。

记录要识别的峰的保留时间，单击【下一步】输入所需峰的详细内容，然后单击【完成】。单击化合物表右上角【视图】按钮，查看【结果】。

单击【LC数据】助手栏中的【应用到方法】图标，出现屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并单击【保存】。

重复以上操作进行下一次测定，直到检验结束。By孙毅第十八页，共二十六页。3.6

数据(Ju)处理三.操作过程方法2除上述办法分析数据外，可以直接找到存储数据文件的文件夹，打开文件，单击【数据】然后点击【峰表】，在峰表中查看并记录所需的保留时间，峰高，峰面积等信息。By孙毅第十九页，共二十六页。3.7打(Da)印报告三.操作过程打印报告：在【LC数据分析】点击左下角的【报告格式】出现“操作人”名，选定“操作人”双击。然后点击左下角【数据】，从【数据】中拖动【数据文件】进行打印报告。By孙毅第二十页，共二十六页。3.8清(Qing)洗和关机三.操作过程分析完毕后，先关色谱工作站和检测器，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，一般用先用25～30%甲醇冲洗，然后用纯甲醇冲洗，25～30%甲醇一般冲洗

15～30分钟，纯甲醇冲洗不得少于30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。关断电源，作好使用登记，内容包括日期，检品，仪器完好状态等。By孙毅第二十一页，共二十六页。注意事(Shi)项四.注意事项1.色谱柱与进样器及其出口端与检测器之间应为无死体积连接，以免试样扩散影响分离。2.新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。3.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞。By孙毅第二十二页，共二十六页。注意(Yi)事项四.注意事项4.发现记录基线波动，出现毛刺等现象，首先应检查检测器流通池是否有气泡或污染，如不是流通池引起，仪器稳定后方能进行操作。5.进样时，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析。如果同类色谱柱依法操作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。By孙毅第二十三页，共二十六页。注意事(Shi)项四.注意事项6.以硅胶作载体的化学键合相填充剂，其稳定性受pH值影响很大。所以流动相一般pH应为2.5～7.5。如果使用高pH值流动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动相，保护分析柱，并尽可能缩短在高pH值下的使用时间，用后立即冲洗。7.色谱仪管路系统，从泵、进样器、色谱柱至检测器流通池，在分析完毕后，均应按要求充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意