环境中微生物的地检测和分离纯化

实用标准文案环境中微物的检测和离纯化姓名：王韬班级：生76组号：7-2组同组人：袁堂谧实验日期：2009-11-12一、

实验目的：1.熟悉常用微生物培养基配置法。2.联系无菌操作技术。3.学习单菌落划线分离法。4.通过实验认识环境中微生物分布。二、

实验原理：1.微生物的分离与纯化从混的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称微生物的分离与纯化用的是平板分离法了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸度、温度和氧的条件要求不同，而供给他们适宜的培养条件，或加入某些抑制剂成一支其他菌生长而利于此菌生长的环境。2.平板菌落计数法：平板菌落数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细菌，取一定量的稀液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即个单菌落应代表原样品的一个单细胞。该计数法最大的优点是可以获得活菌的信。三、实验材料：土壤悬液（稀释100倍知菌落平板，无菌水，取液器，培养箱，培养皿，无菌涂棒，接种环，接种针，酒精灯四、实验步骤：(一培养基的制备（提前准肉汤蛋白胨培养基：牛肉膏2g蛋白胨4gNaCl2g蒸馏水400mL琼脂8g1.称量：按上述配方称量各类质。2.溶解：在400mL水中溶解牛膏、蛋白胨和NaCl混合加热溶解。3.调pH值：调至7.2-7.44.过滤（本实验无需过滤）5.加凝固剂：加入称量好的琼，混合均匀。6.分装7.包扎和灭菌8.倒平板(二从土壤中分离微生物1.采土（已事先准备选较肥沃的土壤，铲去表层土5-20cm深度的或精彩文档

实用标准文案特殊要求的土壤数十克，装入已菌的牛皮纸袋，封好袋口，做好编号记录。2.制备土壤稀释液（已事先稀至倍称取1.0g放入盛99mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中置摇床荡5min使土均匀分散成土壤悬3.继续稀释土壤悬液至合适浓无吸头从上述稀释液中吸取0.1mL土壤悬液，注入事先装有0.9mL无菌水Ep管，用同样的方法，分别配置浓度为10，10

的土壤溶液。4.涂布用一只新的无菌吸头别吸取各浓度的土壤悬液均匀地注入装有培养基的平板上，用无菌玻璃涂棒涂。每个浓度3个。5.培养：将平板倒置与℃箱中培养24h统计所长出的菌落数。6.菌落计数(三周围环境中微生物的检1.取一个平板，分成5区。做标记（下同别未洗过的、用自来水沾湿、用自来水清洗过肥皂清洗过用酒精棉球擦过的手指在对应的区上轻轻涂抹（用力一致2.取一个平板，分区，对应放或涂上头发、牙垢、纸币和玩具。3.取一个平板，置于酒精灯火边1min.4.取一个平板，置于试验台空中11min。5.取一个平板，打开皿盖，对培养基咳嗽。6.取一个平板，分区，分别用水，饮用水涂布。7.取一个平板，用培养基轻沾下嘴唇。(四单菌落划线分离取一个平板，分区，用接种环取知菌种，在平板上划线。划完一边后，灼烧接种环，冷却后从上次划线的末端朝一个方向划线。以此类推，划完各个方向。五、实验结果：1.土壤中的微生物平板计数结照片见后附录，图1-图9)板号

浓度10

10

10

123

315338无法计数

70无法计数无法计数

无法计数无法计数无法计数表1.土壤微生物平板计数结果按照数据选取原则，应选择浓度10

板的结果。由计算公式得：土壤中的细菌含量（个/g土壤）)=7×1062.周围环境中微生物的检测结说明（照片见后附录，图12-图181)分别用未洗过的、用自来水湿、用自来水清洗过、用肥皂清洗过和用酒精棉球擦过的手指实验中，细菌多的是用自来水沾湿的手指，用自来水清洗过的、用肥皂清洗过的、未洗过的手指的细菌量依次递减，用酒精清洗过的手指没有细菌生长。2)酒精灯火焰边放置的养皿出现菌落空气中放置11min的培养皿出现10个菌落。3)头发，牙垢，玩具，咳嗽和唇都有细菌。纸币未发现细菌。4)河水和饮用水精彩文档

实用标准文案3.单菌落划线分离（照片见后,图图11六、实验结果讨论：1.土壤微生物分离实验中，3个度的板中，只有10

的两个板和

的一个板的菌落可以计数。另外几个板法计数的主要原因是细菌没有涂开，而产生了菌苔，或者因为菌落太过密集无法区分。可以改进操作，在滴加细胞悬液时就应该分散滴加。滴加完应该布较长时间。涂布时最好按照一定的方向，不要随意乱涂。土壤中细菌数的量级在10个。另外，从菌落的形态分析，可以看出，土壤中存在多种细菌可见多种细菌广泛分布于土壤中。在分离过程中，有两个因素可能造成较大差。一是土壤悬液的稀释，进行下一级稀释时应将本级稀释液充分混匀。二涂布时可能引入杂菌，涂布时两个细胞重叠也会造成计数时的误差。2.我认为无菌操作中应注意以几点：1)始终在酒精灯火焰旁操作。2)始终用无菌材料与样品直接触。3)尽量避免物品之间的接触，括无菌器件与无菌器件的接触。4)清楚细菌的来源，在实验过中应随时避免。例如培养皿开口应尽量小，时间尽量短。开口应对准火焰，不要朝向人或其它细菌可能来源方向。手或者其他器件不要出现在培养开口前方。3.从周围环境中微生物的检测果中可以看出，我们的周围环境，平时接触的各种物品，人体自身都存在大量细。所以应注意平时卫生。例如，要饭前洗手，饭后漱口。但是，也有些看似卫的习惯是不科学的。例如，在手指实验中，用自来水洗过的手指和自来水沾过的手指的细菌含量都是很大的。主要原因是干手指的细菌不易脱落。纸币实验也可以说明这点。废旧的纸币在培养基上擦了两次，但没有任何细菌。皂洗过的手指细菌含量较少。而用酒精擦过的手指没有任何细菌生长。这说，洗手时，应该用肥皂等清洗干净，否则还不如不洗手。实验结果表明，对有“洁癖”的人来说，除非用酒精灯消毒液经常擦拭物品，否则，不可能达清除所有细菌的目的。人身体上就存在大量细菌，例如我们的嘴唇，我们呼的气体等等。4.单菌落划线实验中，我操作误，所以没有得到预期结果。划每个方向时我都重新接种了新菌落。所以没能得单菌落。七、参考文献：陈金春，陈国强，微生物学实验导，清华大学出版社2005八、思考题：见实验讨论。九、附录：精彩文档

实用标准文案图1.10浓土壤稀释液（可计数）图2.浓度土壤释液（可计数）图3.10

浓度土壤稀释液（无法计数）

图4.10

浓度土壤稀释液（无法计数）图5.10

浓度土壤稀释液（无法计数）

图6.10

浓度土壤稀释液（可计数）图7.10浓土壤稀释液（无法计数）图8.10

浓度土壤稀释液（无法计数）精彩文档