(3.2.5)-细菌接种技术

微生物检验细菌接种技术知识目标：能叙述细菌常用分离培养技术。能力目标：能进行常规细菌接种和培养。任务目标一、分区划线细菌接种时，应根据待检标本的种类、检验目的及所用培养基的类型选择不同的接种方法。细菌常用的接种方法有分区划线法、连续划线法、斜面接种法、半固体穿刺法等。临床最重要的一个方法是分区划线法。

分区划线法多用于含菌量较多的细菌标本的接种，如粪便、脓汁、痰液等标本。经过分区划线，可将标本中的细菌分散开，从而获得单个菌落。1.准备：标本、血平板、记号笔、标记用标签、生物安全柜或超净工作台、红外电热灭菌器（酒精灯）、接种环、培养箱等2.标记：用笔在不干胶标签纸上写好标记，然后粘贴在接种的平板底部。3.取菌：右手持接种环（执笔式）通过红外电热灭菌器灭菌（或者在酒精灯火焰上烧灼灭菌），待冷却后挑取少许标本。步骤4.划线左手持琼脂平板（45°角），用拇指打开皿盖，使其与皿底间分开2~3cm宽的缝隙，右手持取标本的接种环深入皿内，先将细菌标本在培养基一角涂成薄膜，并以此为起点，使接种环与接种平板琼脂面呈30°至40°角，以腕力在平板琼脂表面进行,连续不重叠划线作为第一区，其范围不能超过平板的1/4。

灭菌接种环，待冷却后，转动平皿至适合操作的位置（各区之间的交角应为120℃左右，即平板转动一定角度约60°角，以便充分利用整个平板的琼脂面积），将接种环通过第一区3~4次，连续不重叠划线，作为第二区。同法依次划完第三、四区，第四区切勿接触第一、二区。注意每区的划线须有数条线与上区交叉接触，每区线间需保持一定距离，线条要密而不重复；划第三至第四区间可不灭菌。5.培养：划线完毕，盖好皿盖，倒置放入37℃恒温培养箱中培养18~248h。分区划线结果四区划线结果三区划线结果二区划线结果此方法适用于接种含菌量较少的标本。二、连续划线

步骤1.准备：标本、血平板、记号笔、标记用标签、生物安全柜或超净工作台、红外电热灭菌器（酒精灯）、接种环、培养箱等2.标记：用笔在不干胶标签纸上写好标记，然后粘贴在接种的平板底部。3.在先将接种环通过红外电热灭菌器灭菌（或者在酒精灯火焰上烧灼灭菌），待冷却后挑取少许标本4.划线左手斜持平板，用手托着平板底部，五指固定平板内缘，在酒精灯旁以拇指、食指、中指将平板盖撑开大约30-45度角，将已挑取细菌的接种环先在平板一侧边缘均匀涂布，然后运用腕力将接种环在平板上自上而下，来回划线。线要密而不重叠，充分利用平板的面积，不能划破琼脂表面，注意无菌操作，避免空气污染。5.培养：划线完毕，盖好皿盖，倒置放入37℃恒温培养箱中培养18~248h。连续划线结果三、斜面接种此方法主要用于纯种增菌及保留菌种或生化反应。用接种针挑取单个菌落。步骤1.准备：标本、试管、记号笔、标记用标签、生物安全柜或超净工作台、红外电热灭菌器（酒精灯）、接种针、培养箱等2.标记：用笔在不干胶标签纸上写好标记，然后粘贴在接种的试管表面。3.在先将接种针通过红外电热灭菌器灭菌（或者在酒精灯火焰上烧灼灭菌），待冷却后挑取少许标本4.划线

左手拿试管，打开试管塞后，试管口通过火焰灭菌，再将取有细菌的接种针由斜面底部向上划一直线，再由下至上在斜面上做曲线划线。5.试管口灭菌后加塞，接种针烧灼灭菌后放回原处6.培养：划线完毕放入37℃恒温培养箱中培养18~248h。斜面接种法结果四、穿刺接种法此方法用于半固体培养基或细菌生化反应用鉴别培养基的接种。步骤1.准备：标本、试管、记号笔、标记用标签、生物安全柜或超净工作台、红外电热灭菌器（酒精灯）、接种针、培养箱等2.标记：用笔在不干胶标签纸上写好标记，然后粘贴在接种的试管表面。3.在先将接种针通过红外电热灭菌器灭菌（或者在酒精灯火焰上烧灼灭菌），待冷却后挑取少许标本

4.划线

左手拿试管，打开试管塞后，试管口通过火焰灭菌，再将取有细菌的接种针从培养基的中心向下垂直穿刺接种至试管底上方约5mm处（勿穿至管底），然后由原穿刺线退出。5.试管口灭菌后加塞，接种针烧灼灭菌后放回原处6.培养：划线完毕放入37℃恒温培养箱中培养18~248h。穿刺接种法结果五、液体接种法该法主要用于细菌的增菌培养或进行细菌的生化反应。步骤1.准备：标本、试管、记号笔、标记用标签、生物安全柜或超净工作台、红外电热灭菌器（酒精灯）、接种针、培养箱等2.标记：用笔在不干胶标签纸上写好标记，然后粘贴在接种的试管表面。3.在先将接种环通过红外电热灭菌器灭菌（或者在酒精灯火焰上烧灼灭菌），待冷却后挑取少许标本4.划线

左手拿试管，打开试管塞后，试管口通过火焰灭菌，再将取