(5.2.1)-2.1紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法物质吸收紫外光区和可见光区的电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。

概念利用紫外-可见吸收光谱，通过被测物质在紫外-可见光区的特定波长处或一定波长范围内的单色光辐射的吸光度，进行定性和定量分析的方法，称为紫外-可见分光光度法。光的吸收定律（朗伯-比尔定律）

原理当单色光穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内，被该物质吸收的光量（吸光度）与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比。关系式式中，A为吸光度；T为透光率；E为吸收系数；c为溶液浓度；L为液层厚度。

原理关系式指单位浓度、单位液层厚度时的吸光度。常使用百分吸收系数（）简便易行：本法使用的仪器设备均不复杂，价格较低廉，操作简单，易于普及；准确度较高：本法相对误差在2%~5%之间，适用于对测定结果的准确度有较高要求的试样的分析；灵敏度高：本法灵敏度可达10-7~10-4g/ml，适用于低浓度试样的测定；专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。

特点供试品溶液的吸光度读数在0.3~0.7之间为宜。测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后，再计算含量。一般选择吸光度最大的波长作为测定波长，选择的溶剂不干扰测定。

注意事项当溶液的pH值对测定结果有影响时，应将供试品溶液的pH值和对照品溶液的pH值调成一致。对照品比较法由光的吸收定律（朗伯-比尔定律）可得下列关系：供试品溶液的浓度供试品溶液的吸光度对照品溶液的浓度对照品溶液的吸光度对照品比较法药物的实际测得量可按下式计算供试品初次稀释体积供试液的稀释倍数对照品比较法原料药供试品溶液的吸光度对照品溶液的浓度对照品溶液的吸光度供试品初次稀释体积供试液的稀释倍数供试品的取样量对照品比较法片剂供试品片粉的取样量对照品比较法注射剂供试品的取样体积注射剂的标示量

片剂含量计算示例标示量为30mg精密称定总质量为3.8611g研细细0.6528g甲醇约70ml水浴中超声15分钟,溶解加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过续滤液10ml,加甲醇稀释至刻度，摇匀在310nm的波长处测定吸光度为0.560取格列喹酮对照品精密称定甲醇溶解并定量稀释制成浓度为0.112mg/ml的对照品溶液测定吸光度为0.571标示量的90.0%~110.0%片剂含量计算示例AX为0.56001对照品溶液的吸光度AR为0.57102供试品初次稀释体积V为100ml03对照品溶液的浓度CR为0.112mg/ml04供试品片粉的取样量W为0.6528g0510片供试品的总重W10为3.8611g06已知标示量为30mg/片07片剂含量计算示例精密量取续滤液10ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，所以供试液的稀释倍数D为50除以10。吸收系数法由光的吸收定律（朗伯-比尔定律）可推导出供试品溶液中被测成分的浓度计算公式：供试品溶液的浓度供试品溶液的吸光度为百分吸收系数液层厚度（吸收池的光路长度）浓度换算因数（系将g/100ml换算成g/ml）吸收系数法由光的吸收定律（朗伯-比尔定律）可推导出供试品溶液中被测成分的浓度计算公式：供试品初次稀释体积供试液的稀释倍数吸收系数法原料药供试品溶液的吸光度液层厚度供试品初次稀释体积供试液的稀释倍数供试品的取样量吸收系数法片剂供试品片粉的取样量吸收系数法注射剂供试品的取样体积注射剂的标示量

片剂含量计算示例标示量为5mg精密称定总质量为1.4422g称取细粉0.3041g乙醇约75ml加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过续滤液5ml,加甲醇稀释至刻度，摇匀在243nm的波长处测定吸光度为0.401标示量的90.0%~110.0%百分吸收系数为385振摇30分钟,溶解片剂含量计算示例吸光度A为0.40101初次稀释体积V为100ml02片粉的取样量W为0.3041g0320片供试品的总重W20为1.4422g04泼尼松龙的百分吸收系数为