液相色谱法测奶制品中的防腐剂含量

液相色谱法测奶制品中的防腐剂含量第一页，共十五页，2022年，8月28日主要内容第二页，共十五页，2022年，8月28日实验背景食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食品防腐剂。但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，不仅能破坏维生素B1,还能使钙形成不溶性物质,影响人体对钙的吸收,同时对人的胃肠有刺激作用,过量食用还可引发癌症。苯甲酸的毒性远远大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性条件下抑菌范围广,以及价格低廉,仍作为主要防腐剂加入到食品中。但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的。然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，但足以影响婴儿等特殊人群的健康。第三页，共十五页，2022年，8月28日性状与性能山梨酸苯甲酸无色晶体粉末，相对分子质量为：112.13，熔点132～135℃，沸点228℃，耐光耐热性好，难溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。白色晶体，相对分子质量为144.11，熔点121.7℃，沸点249.2℃，常温下难溶于水，溶于热水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。第四页，共十五页，2022年，8月28日食品中测定防腐剂方法的比较第五页，共十五页，2022年，8月28日食品中测定防腐剂方法的选择检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，虽然灵敏度高但重现性差。气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高。对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对简单。另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力。故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量。第六页，共十五页，2022年，8月28日高效液相法的测定过程第七页，共十五页，2022年，8月28日仪器及试剂仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器（100um）超声波发生器;溶剂过滤器;0.45μm滤膜;容量瓶;恒温水浴锅试剂：液态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水（1:1）氢氧化钠溶液（0.1mol/L）;亚铁氰化钾溶液（0.2mol/L）醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸(1mg/mL),山梨酸（1mg/mL）;混合标准工作液（苯甲酸+山梨酸）0.2mg/mL第八页，共十五页，2022年，8月28日山梨酸、苯甲酸的提取第九页，共十五页，2022年，8月28日

液相色谱条件

柱子:EclipseXD13-C18柱(4.6mm×150mm，5μm);流动相:磷酸盐缓冲溶液-甲醇(V/V90:10);等梯度洗脱;流速0.3ml/min;保留时间15min;柱温35℃;进样量20ul;紫外检测波长227nm；第十页，共十五页，2022年，8月28日实验步骤1.混合标准液的配置分别移取混合标准工作0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml于6个容量瓶（10ml），稀释定容。2.流动相处理流动相用0.45um水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理3.开机出现平直基线进样4.定性分析分别进苯甲酸,山梨酸标准溶液10uL,确定各个峰保留时间5.标准曲线测定分别吸取60uL的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量分析表6.样品分析取样品60uL进样，记录保留时间和峰面积第十一页，共十五页，2022年，8月28日标准色谱图第十二页，共十五页，2022年，8月28日液相色谱仪使用注意事项(1)使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤。(2)必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（0.45um）。(3)流动相使用前必须脱气。(4)改变流动相时防止交叉污染。(5)不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶。(6)定期清洗烧结不锈钢吸滤头。(7)防止过高压力冲击色谱柱。(8)每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子。(9)严禁使用气相色谱那样的尖头针进样。(10)在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀(11)色谱柱不用卸下前:a.必须洗去缓冲液；b.防止产生微生物；c.用大于10%的有机溶剂充满整个色谱柱；d.柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封。第十三页，共十五页，2022年，8月28日参考文献1.祝伟霞,魏蔚,杨冀州,刘亚风《高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸》,中国国境卫生检疫杂志,2005年10月第28卷第5期2.周毅刚,龙苏,王晓春,等.高效液相法测定食品中苯甲酸和山梨酸含量.中国医师杂志,2001,13(3):184-1883.全国