骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩

骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩第1页/共18页毕业生：指导教师：骨碎补中总黄酮的提取、含量测定及抗氧化活性研究2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩第2页/共18页研究背景及意义实验部分报告内容CONTENTS结果与讨论结论第3页/共18页

黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然产物，几乎存在于所有的绿色植物中，具有多种明显的药理活性。目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑制疼痛等方面。同时黄酮也是一种很强的抗氧化剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。1.研究背景及意义第4页/共18页黄酮的提取工艺

采用乙醇热回流法提取。工艺流程：骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取液2.实验部分第5页/共18页乙醇浓度对提取率的影响提取温度对提取率的影响

料液比对提取率的影响

提取时间对提取率的影响单因素实验第6页/共18页正交试验设计

为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平的正交试验，试验因素水平见下表：第7页/共18页骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究采用邻苯三酚自氧化法取50mmol/LTris-HCI缓冲溶液(pH=8.2)4.5mL，与4.1mL蒸馏水混匀后在25℃水浴中保温20min，分别加入0.1mL的不同浓度的黄酮样品液，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol/L邻苯三酚0.3mL，迅速摇匀后倒人比色杯，420nm下测定吸光度Ai。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光度A0。清除率的计算：清除率（%）=(A0-Ai)/A0×100%式中：A0以蒸馏水为空白实验的吸光度；Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。黄酮清除O2-·自由基能力的测定第8页/共18页黄酮清除·OH能力的测定采用邻菲罗啉法 在6个25mL容量瓶中一次加入9mmol/LFeSO4，9mmol/L水杨酸各2mL，不同浓度的黄酮粗提取溶液1mL，8.8mmol/LH2O2启动反应1h，用蒸馏水定容，静置，于510nm处测定吸光度Ai。以蒸馏水为空白，测定吸光度A0。 清除率（%）=(A0-Ai)/A0×100%其中：A0为空白实验的吸光度； Ai为不同浓度反应液的吸光度。第9页/共18页乙醇浓度对提取率的影响3.实验结果与讨论图1乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。第10页/共18页提取温度对提取率的影响由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长,但60℃到90℃黄酮含量减小。而60℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度为60℃。图2提取温度与总黄酮含量的关系曲线第11页/共18页料液比对提取率的影响由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。图3

料液比与总黄酮含量的关系曲线第12页/共18页提取时间对提取率的影响由图4可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过3h时，总黄酮含量反而降低。故选用3h为宜。图4提取时间与总黄酮含量的关系曲线第13页/共18页正交试验结果

比较左表中4因素的R值的大小，可以看出A因素，即乙醇浓度为最重要因素。四因素对黄酮提取量影响的主次顺序为乙醇浓度>浸提时间>浸提温度>料液比，并且最佳的提取工艺条件为：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取时间3h、提取温度60℃，即A1B2C3D2。第14页/共18页

黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果图5提取浓度与清除率的关系曲线由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。第15页/共18页黄酮清除·OH自由基能力的实验结果图6提取浓度与清除率的关系曲线由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。第16页/共18页4.结论（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄酮。（2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研究得到骨碎补中总黄酮提取的最佳工艺条件：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取时间3h、提取温度60℃。在此条件下，用紫外分光光度法测得总黄酮的含量为3.51%。（3）