实验七 实验注意事项

实验七实验注意事项第一页，共十页，2022年，8月28日实验原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。脯氨酸的测定第二页，共十页，2022年，8月28日脯氨酸的测定（一）材料及试剂1.材料：植物叶片。2.试剂及配制：2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol·L－1磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。(配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好现用现配。)3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。100μg·mL-1脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100μg·mL－1脯氨酸母液）。冰醋酸；甲苯。第三页，共十页，2022年，8月28日（二）实验步骤1.

脯氨酸标准曲线的制作

用100μg·mL－1脯氨酸母液配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μg/mL的标准溶液。取标准溶液2mL，然后向各管分别加入2ml3％的磺基水杨酸溶液，加入2ml冰醋酸及4mL2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热1h，溶液即呈红色。冷却后加入4ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻，取上层液，以甲苯溶液为空白对照，在520nm波长处测定吸光度（A）值。

OD值为纵坐标，脯氨酸浓度（μg/mL）为横坐标绘制标准曲线。回归方程式第四页，共十页，2022年，8月28日2.样品的测定2.1脯氨酸的提取

称取不同处理的植物叶片各0.5g，分别置大试管中，然后向各管分别加入5mL3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取过程中要经常摇动），冷却后3000r/min离心10min。取上清液待测。2.2测定吸取2ml提取液于带玻塞试管中，加入2mL去离子水，2mL冰醋酸及4mL2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热1h，溶液即呈红色。冷却后加入4mL甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻。用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。第五页，共十页，2022年，8月28日从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量，按下公式计算样品中脯氨酸含量：

X×提取液总量（mL）脯氨酸含量（μg·g－1Fw）＝—————————————————

样品鲜重（g）×测定时提取液用量（mL）公式中：X－从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg/mL）（三）计算结果依据回归方程式计算得到脯氨酸含量（μg/mL）第六页，共十页，2022年，8月28日相对电导率测定取根系或植物叶片，自来水洗净，蒸馏水冲洗干净，吸干表面水分。秤取1g，剪成长约1cm小段。将材料装到30ml指形管内，加入去离子水15ml，抽真空至材料下沉，室温放置1~2h。测电导率R1。（用根系时可以不用抽真空）将指形管沸水浴15~20min（注意加盖防止水分蒸发），以充分杀死植物组织，取出放入自来水中冷却至室温，测电导率R2。相对电导率=R1÷R2×100%第七页，共十页，2022年，8月28日植物含水量的测定

1、取成熟植物叶片，剪成适当大小，迅速称量鲜重Wf（~1g）。2、将植物材料浸入蒸馏水并置于4℃冰箱中数小时至恒重（因植物材料而异）。3、将材料从水中取出，用吸水纸迅速吸去材料表面水分，称取其饱和鲜重Wfs。（12h以上）

4、将上述材料放入一信封内，放入烘箱中，在105℃下杀青30min，然后将温度调到80℃烘至恒重。5、称取材料干重Wd。第八页，共十页，2022年，8月28日自然含水量=×100％相对含水量（RelativeWaterContent，RWC）植物组织含水量的指标

RWC=自然鲜重-干重水饱和鲜重-干重=×100％×100％植物含水量的测定

组织饱和含水量有较好的重复性，而组织的鲜重、干重不太稳定（鲜重常随时间及处理条件而有变化）。第九页，共十页，2022年，8月28日蒽酮试剂：称取1.0g蒽酮，溶于80