毒理总课件一般毒性

第一节毒理学实验基础知识第二节急性毒性试验第三节长期毒性试验第六章主要内容按接触时间分类：急性毒性试验亚急性毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验一般毒性作用及评价

毒性参数和安全限值的剂量轴低高

──┼───┼─┼─┼─────┼─┼─┼───┼──┼─┼──┼→安全限值NOAEL

阈LOAELNOAEL阈LOAELMTDMLDLD50

LD100

或VSD└────┘└────┘LD01

慢性急性

第二节

急性毒性试验

1概念急性毒性:机体一次接触或24小时内多次接触化学物后在短期(<14天)内所发生的毒性效应。第二节急性毒性作用及其评价2急性毒性试验目的与常用参数2.1目的：○评价化学物对机体的急性毒性的大小（以LD50表示）、毒效应的特征和剂量-反应关系，根据LD50进行毒性分级。○为亚慢性和慢性及其他毒理实验的接触剂量提供依据○为毒作用机制研究提供线索

2.2急性毒性常用参数：

毒性上限参数：死亡为终点毒性下限参数：非致死性指标致死剂量：①绝对致死量（LD100）

②半数致死剂量或浓度（LD50或LC50）③最小致死量（MLD，LD01）

③最大耐受剂量（MTD，LD0）2.2.1毒性上限参数（1）急性毒性（LOAEL）观察到有害作用的最低剂量（2）有害作用阈（threshold）（3）急性毒性（NOAEL）未观察到有害作用剂量

2.2.2毒性下限参数

毒性参数和安全限值的剂量轴低高

──┼───┼─┼─┼─────┼─┼─┼───┼──┼─┼──┼→安全限值NOAEL

阈LOAELNOAEL阈LOAELMTDMLDLD50

LD100

或VSD└────┘└────┘LD01

慢性急性

3LD50在毒理学中应用概念：LD50化学毒物引起一半受试对象死亡的剂量最重要最常用的参数，毒性分级的依据统计处理得出的数值较少受实验个体易感性差异的影响。高重现性反映群体大多数的感受性处于剂量反应关系曲线变化最敏感部位。

3.1LD50的意义及应用3.2LD50局限性影响因素多只代表一个剂量界点不能反映中毒特征4.

挥发性的影响5.接触途径的影响6.LD50的波动性7.物种差异，性别的差异8.剂量反应关系斜率9.获得信息有限10.近似值

3.2

LD50的局限性3.3LD50的补充参数（急性毒作用带\LD84/LD16\剂量反应曲线斜率）1.Zac=LD50/Limac※Zac反映急性域剂量距离LD50的宽窄死亡----最低毒作用剂量的宽窄※Zac值越大，急性死亡危险性越小2.

LD84/LD16LD50加减一个S

（累计死亡率是15.9%和84.1%）3.剂量反应曲线斜率3.3LD50的补充参数

为了评价化学毒物急性毒性的强弱及其对人类的潜在危害程度，当前各国都参照相应的急性毒性分级（acutetoxicityclassification）标准来评价化学毒物的急性毒性。4急性毒性评价4.1急性毒性分级标准意义：视化学物毒性评价和安全管理的一个共同尺度。各国分级标准不一样。4.2不同用途的化学物分级标准见p79-804急性毒性评价微毒＞5000＞5000＞5000

◎

LD50值及急性毒性定级

◎急性毒作用带（Zac）

◎剂量-反应曲线斜率

◎中毒症状及程度

◎出现症状的时间

◎死亡前征兆及死亡时间

◎存活动物的体重变化

◎死亡动物的病理变化等

4.3急性毒性评价内容

5急性毒性试验设计○实验动物的准备○染毒途径的选择○染毒剂量的选择○染毒周期与毒效应观察5.1实验动物的选择和处置◎体重：大鼠：180-220g，小鼠：18-22g，◎

性别：♀♂各半◎动物检疫：5-7天◎染毒途径：模拟人可能接触途径◎灌胃、禁食◎试验剂量和方法（视法方法定）◎观察时期和内容：14天，中毒症状，特征◎动物常见表现：兴奋—抑制—死亡◎死亡动物的解剖

5.1实验动物的选择和处置1.3.1大鼠急性经口毒性试验：根据预试结果，正式试验雌雄鼠均设计为1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg和1000mg/kg四个剂量组。（剂量与分组）每组雌雄性SD大鼠各5只（动物数）。2150mg/kg以下剂量组以1ml/100g.bw于动物空腹下一次性灌胃染毒，4640mg/kg以2ml/100g.bw一次灌胃，1000mg/kg剂量组以2ml/100g.bw两次灌胃，中间间隔2小时（染毒方法）。灌胃后观察其中毒症状、体征和死亡情况，连续观察二周，（试验期限）根据各组死亡动物数，查Horn’s表求出LD50及95%可信限，判定毒性分类。急性经口毒性试验（示例）6LD50的计算方法6.1经典方法

机率单位法-对数图解法寇氏法

HORN’S法

Bliss法序贯法6.1.1霍恩（Horn）法

是利用剂量对数与死亡率（反应率）的转换数（即几率单位）呈直线关系而设计的方法，又称平均移动法或剂量递增法。优点：由于该法使用动物数少，结果可直接查表求出LD50及其95％可信限，使用甚为简便。缺点：LD50的95％可信区间范围较大，方法精确度尚不够。

LD50的经典方法霍恩（Horn）法方法要点：＊4个染毒剂量组，＊每组动物数相等，一般用5只动物，＊组距：剂量按等比级数排列。

组距=2.15/3.16LD50的经典方法依据每组动物数、组距和每组动物死亡数，查表即可求出受试化学毒物的LD50及其95％可信限。例如：55

56.1.2改进寇氏法

（1）是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计的方法，又称Karber法或平均致死量法。该法计算简便、准确率高，是较为常用的方法。（2）本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率＜20％，最高剂量组死亡率＞80％。LD50的经典方法预试验：以每组2－3只动物找出全死和全不死的剂量。动物数：一般每组不少于10只（大鼠或小鼠），各组动物数量不一定要求相等。剂量及分组：一般在预试得到的两个剂量组之间拟出等比的六个剂量组或更多的组。此法不要求剂量组间呈等比关系，但等比可使各点距离相等，有利于作图计算。LD50的经典方法—几率单位-图解法LD50测定新方法（符合3R）限量试验固定剂量法急性毒性分级法上下法（up-and-downprocedure)急性系统毒性试验第三节局部毒作用皮肤原发性刺激试验（skinprimaryirritationtest)皮肤致敏反应试验(skinsensitizationtest光致敏反应(photosensitisation)光刺激反应(photoirritation)眼刺激反应(eyeprimaryirritationtest)替代（体外）试验

局部毒作用常用的评价局部刺激作用的试验包括眼刺激试验、皮肤刺激/腐蚀性试验和皮肤致敏试验等，其目的是了解外源化学物对皮肤、眼睛的局部刺激性、腐蚀性和致敏性。我国农药、化妆品和消毒产品的毒理学评价程序均规定局部刺激试验为常规必做项目。眼刺激试验（eyeirritationtest）的观察终点为化学物导致的眼刺激和眼腐蚀性。眼刺激性（eyeirritation）指眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化，而眼腐蚀性（eyecorrosion）指眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。眼刺激试验推荐的传统方法为家兔眼刺激试验，此方法系Draize在1944年提出，故亦称Draize试验试验原则是受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内，以未作处理的另一侧眼作为自身对照。在规定的时间内观察对兔眼的刺激和腐蚀作用程度并按规定的分级标准进行评分。观察指标主要包括结膜（发红、球结膜水肿和分泌物）、角膜（混浊程度和范围）、虹膜（充血、肿胀和角膜周围充血）。观察期限应足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性，一般为7天，必要时可延长至21天。Draize法对试验结果的判定以主观判断为主，眼刺激试验传统方法用非实验动物组织替代兔眼，受精鸡卵尿囊绒膜试验（hen’seggtest-chorioallantoicmembrane,HET-CAM）检测细胞膜损伤的溶血试验（hemolysistest）：检测血红蛋白变性：细胞毒性试验生物模型替代法和其他非生物试验法：眼刺激替代方法皮肤刺激试验包括单次和多次皮肤刺激试验、完整皮肤和破损皮肤刺激试验等，其观察终点为皮肤刺激和皮肤腐蚀性。皮肤刺激性（dermalirritation）指皮肤接触或涂敷受试物后，局部产生的可逆性炎性变化。皮肤腐蚀性（dermalcorrosion）指皮肤接触或涂敷受试物后，引起局部的不可逆性组织损伤。皮肤刺激试验（skinirritationtest）动物：兔子4只，大鼠10只程序：略动物皮肤敏感顺序兔〉豚鼠〉大鼠〉人〉猪

皮肤原发刺激试验接触某种化学物质后产生的局部可逆性的炎症变化皮肤表现：水肿、红斑不适宜做的情况：

=可能有腐蚀性PH〈2或PH〉11.5=经皮途径显示很强的系统途径

=经皮LD50〉2000mg/kg

皮肤原发刺激试验增