CAPANA作业指导书模版

STANDARDOPERATIONSTANDARDOPERATIONPROCEDURE1/9广州金域医学检验中心广州金域医学检验中心GuangZhouKingmedCenterforClinicalLabrotoryKM-SOP0301.71Edition1.0《文件已阅声明表》《Procedurecirculationform》文件名称:抗核抗体作业指导书 表号:KM-MP03•02•02已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格依据此文件执行,不随便对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人担当。〔Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthedocument。Iwillkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure〕阅读人签名表姓〔NAME〕职〔POSITION〕 签名〔SIGNATURE〕 签名日期〔DATE〕周炜张坤波徐葵英李慧源周先军高咏梅贾红艳何晓英朱国强刘红梅张根生

主任助理授权签字人授权签字人授权签字人授权签字人技术员技术员技术员技术员技术员技术员KM-SOP0301.71Edition1.0KM-SOP0301.71Edition1.0广州金域医学检验中心GuangZhouKingmedCenterforClinicalLabrotorySTANDARDOPERATIONSTANDARDOPERATIONPROCEDURE2/9《文件修改记录页》《Procedureamendmentform》序号NO.

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表号:KM-MP03.02.03审批人 批准生效日期(Approved by) date)1 3 文件信息表内容变更《文件信息表》《Procedureinformationform》文件名(Titleofdocument)版本号(EditionNo.)

抗核抗体作业指导书KM-SOP0301.71Edition1.0 生效日期

表号:KM-MP03.02.042023-03-09文控部门(Doc.ControlDept.)/(Reviewedby:Signature/Reviewdate)

试验室文控室回顾人(reviewed by Signature)

(Operativedate)回忆日期(Reviewdate)替代文件(Replaces)存放地点(Location)/持有人〔Holder〕

CopyNo. 地点(Location) 持有人(Holder)试验室文控、试验诊断部、科研开发部陈彬免疫室 周炜/(Authorsignature/Date)审批人签名/日期(Authorizedby:Signature/Date)接收人签名/日期〔Receiptor/Date〕副本数(Copy No./ CopyNum)

周炜陈美才本文件是第 个文件拷贝/共发放 2 个文件拷贝。抗核抗体作业指导书〔TheOperationProcedureofAntinuclearAntibody〕1、试验原理〔TestPrinciple：细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质均可作为检测自身抗体的抗原基质。在第一次温育时，已稀释的血清与固定在载片反响区上生物薄片上的HEp-2细胞核灵长类肝脏反响。如标本为阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与包被在固相上的抗原结合。然后参加荧光素FITC标记的抗人IgG抗体进展其次次温育，结2、样本收集和贮存〔SpecimenCollectionandStorage：1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染；不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干躁管。50ul2-8-2同时避开反复冻融血清。3、安全防范〔SafetyPrecautions：HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。移液过程制止用口。在处理试剂和标本的地方制止吸烟，饮食。.4、试剂Reagents：储存与稳定性：12个月。2-8℃保存，在没有污染的状况下可稳定至有效期。试剂盒组成：(由欧蒙公司出产)HEp-2细胞和灵长类肝。荧光素〔FITIg〔羊，直接使用。阳性比照：抗核抗体〔AN阴性比照：自身抗体阴性，人，直接使用。STANDARDOPERATIONSTANDARDOPERATIONPROCEDURE5/9广州金域医学检验中心广州金域医学检验中心GuangZhouKingmedCenterforClinicalLabrotoryKM-SOP0301.71Edition1.0PBS盐：PH7.2。20封片介质盖玻片〔62mm×23mm〕5、操作步骤〔Procedure〕TheProcedureStepsarefollowedthemanufacturers.试剂预备：15分钟内进展温育。不使用保护袋破损的载片。FITC标记的二抗：直接使用，使用前需用加样器充分混匀。阳性和阴性比照：直接使用。在初次使用前需用加样器充分混匀。PBS吐温缓冲液：112ml20充分混匀。配制好的PBS吐温缓冲液于2-8℃可保存约1周，假设溶液变浑或消灭污染则不能使用。配制记录在《PBS溶液配制记录表》表号:KM-SOP0301.71.02剂清洗，再用足量的水冲洗，并用纸巾擦干净。2个稀释梯度。用磷酸盐缓冲液〔PBS-Tween1:1001000ULPBS+10UL1:1000倍比稀释血清。25ul1:1001:1000稀释后的血清至加样板的反响区中，避开产生气泡。滴加完全部待测标本后才开头温育〔200份。第一次温浴：将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里，反响〔18-25℃〕30分钟清洗：用烧杯盛磷酸盐缓冲液流水冲洗载片1秒钟〔留意水流不要太急，不要直接对着基质冲〔不要吹干将其浸入装有磷酸盐缓冲液的小杯中浸洗5分钟。-〔结合物20ul至一干净加样板反响区，完全加完方可连续温育〔50张载片〕其次次温浴：从磷酸盐缓冲液中取出一张载片，5秒钟内用吸水纸擦一下反面30分钟。从现在开头，留意避开阳光直射载片。清洗：用烧杯盛磷酸盐缓冲液流水冲洗载片1秒钟〔留意水流不要太急，不要KM-SOP0301.71Edition1.0KM-SOP0301.71Edition1.0广州金域医学检验中心GuangZhouKingmedCenterforClinicalLabrotorySTANDARDOPERATIONSTANDARDOPERATIONPROCEDURE6/9直接对着基质冲5分钟。封片：将盖玻片直接放在泡沫板的凹槽里。滴加甘油/PBS至盖玻片：每一个擦拭反响区间隙。将载片覆有生物薄片的一面朝下放在已预备好的盖玻片上，马上查看并轻轻调整使盖玻片嵌入到载片的凹槽里。然后连续下一张。6.6.1标本阴性。荧光强度抗体滴度1:1001:10001:10000弱阴性阴性荧光强度抗体滴度1:1001:10001:10000弱阴性阴性1:100中阴性阴性1:320强弱阴性1:1000强中阴性1:3200............6.3 结果报告：6.3.1依据载片上细胞核特异性荧光模型报告结果。一些重要的荧光模型有：核均质型、核颗粒型、核仁型、着丝点型和核点型。具体参见荧光模型图谱。6.3.2对于阳性结果，依据荧光强度确定抗体滴度。6.3.3假设起始稀释度1:100细胞核无特异性荧光模型，不发荧光，报告阴性结果。6.3.4KM-SOP0301•71•017、结果解释〔InterpretationofResults〕IgG反响性1:100阴性1:100阳性1:320或更高7．2

结果推断阴性。血清标本中未检出抗核抗体JO-1SS-A/SS-BSm/RNP的荧光模型。阳性。提示各种风湿病和其他疾病8、质量掌握〔QualityControl：使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。开头试验前，将全部试剂置于室温。动都会导致检测的敏感度的降低。结果。全部稀释过的溶液。9、方法学特性〔MethodCharacteristic：敏感性特异性灵敏度〔Sensitivity〕和特异性〔Specificit敏感性特异性基质参考参考人HEP-2细胞：ANA100%ELISA+印迹〔n=128，来源：德国〕100%ELISA+印迹〔n=128，来源：德国〕ANA97%间接免疫荧光法：HEP-2〔n=263，来源：德国〕81%法：HEP-2〔n=263，来源：德国〕周密度〔Precision〕1。荧光强度用数值表示，可从“0〔无特异性荧光〕到“5〔格外强的荧光强度。批间差异：定量检测时，全部基质荧光强度上的差异不超过±1。〔CDC1-CDC11〕进展检测，结果说明该检测系统与这些血清无穿插反响。10、临床意义〔ClinicalSignificance〕:IgGIgA、IgM中。在很多疾病中特别是风湿性疾病患者血清中可检测到抗核抗体。在抗核抗体检测中，以免疫荧光法最为常用。该方法敏感、简洁ELISA法检测自身抗体快速、敏感，但由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就需要多种单独的抗原，因此该法在临床免疫试验室的应用受到肯定限制。常见的自身免疫性疾病及其抗核抗体的阳性率：自身免疫性疾病系统性红斑狼疮ANA阳性率活动期95-100%非活动期80-100%药物诱导的红斑狼疮100%混合性胶原病〔MCTD、夏普综合征〕100%类风湿性关节炎20-40%其他风湿病20-50%进展性系统性硬化症85-95%多肌炎及皮肌炎30-50%枯燥综合征70-80%慢性活动性肝炎30-40%溃疡性结肠炎26%靶抗原

荧光模型多核苷酸：组蛋白

DNARNAH1、H2A、H2B、H3、H4H2A-H2B复合物

核均质型核均质型核均质型核浆中的核糖核蛋白U1-nRNPEN：

核粗颗粒，核仁阴性核仁抗原

SmSS-A〔Ro〕SS-B〔La〕原纤维蛋白RNA多聚酶Ⅰ

核粗颗粒，核仁阴性核仁颗粒型核仁颗粒型STANDARDOPERATIONSTANDARDOPERATIONPROCEDURE9/9广州金域医学检验中心广州金域医学检验中心GuangZhouKingmedCenterforClinicalLabrotoryKM-SOP0301.71Edition1.0PM-Scl〔PM-1〕7-2-RNP〔To〕核仁均质型核仁均质型4-6-S-RNA核仁均质型〔NOR〕1-2点着丝点：着丝点蛋白典型的颗粒其他蛋白Scl-70核浆接近于均匀的荧光，核仁增加增殖性细胞核抗原颗粒型，50%10倍增加核颗粒核点型KuMi-1网状型细颗粒Mi-2细颗粒板层素核膜型的活动性相关。假设安康人血清中检测到此抗体