第十八章常见病毒鉴定演示文稿

第十八章常见病毒鉴定演示文稿第一页，共八十三页。优选第十八章常见病毒鉴定第二页，共八十三页。第十八章常见病毒鉴定返回总目录第三页，共八十三页。本章内容第一节呼吸道病毒

1第二节2第五节5肝炎病毒第六节6第四节4第三节3反转录病毒疱疹病毒肠道病毒朊粒及其他病毒第四页，共八十三页。学习目标及重点学习目标：

掌握流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的主要生物学特点,各病毒的传播途径、临床检验和防治原则区别乙型肝炎病毒常见抗原抗体的组成及其临床意义五种肝炎病毒常用鉴定方法解释流感病毒变异和流行的关系了解朊粒的生物学特征本章重点：★流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的生物学特性和致病性★常见病毒的检验方法第五页，共八十三页。一、流感病毒（一）生物学特性流行性感冒病毒（influenzavirus），简称流感病毒，是流感的病原体甲（A）:抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行乙（B）:对人类致病性较低丙（C）:只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行

1.形态结构（1）形态第一节呼吸道病毒第六页，共八十三页。

（2）结构

核衣壳核酸

核蛋白（NP）

RNA多聚酶核衣壳包膜基质蛋白（MP）脂蛋白（LP）刺突血凝素（HA）神经氨酸酶（NA）第一节呼吸道病毒第七页，共八十三页。2.分型与变异分型：根据NP和MP的不同流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。甲型流感病毒根据其表面HA和NA抗原性的不同，又分为若干亚型。变异：最主要的是抗原性变异:HA和NA抗原性漂移（antigenicdrift）抗原性转变（antigenicshift）第一节呼吸道病毒第八页，共八十三页。3.培养特性：在鸡胚羊膜腔和尿囊腔中增殖红细胞吸附试验（hemoadsorptiontest）易感动物为雪貂4.抵抗力：抵抗力较弱不耐热，56℃30分钟可灭活病毒室温下很快丧失传染性第一节呼吸道病毒第九页，共八十三页。（二）微生物学检验1.标本：血清、咽漱液2.鉴定：ELISA检查患者咽漱液中的抗原用单克隆抗体经免疫酶法PCR技术、核酸杂交等方法检出病毒或进行分型第一节呼吸道病毒第十页，共八十三页。（三）临床意义传染源：患者、隐性感染者、被感染的动物传播途径：飞沫，经呼吸道进入体内致病机理：呼吸道上皮细胞感染增殖，病毒不入血，毒素样物质进入血液症状：上呼吸道症状、发热、头痛、全身酸痛

第一节呼吸道病毒第十一页，共八十三页。二、风疹病毒（一）生物学特性1．形态结构：单股正链RNA病毒有包膜，核衣壳为二十面体对称一个血清型人是唯一宿主2．抵抗力：抵抗力较弱不耐热，56℃30分钟可灭活病毒对紫外线、乙醚、氯化铯、去氧胆酸等均敏感第一节呼吸道病毒第十二页，共八十三页。（二）微生物学检验1．标本：鼻咽分泌物、皮疹液、尿液，脑脊液、血液、骨髓等2．鉴定病毒培养

免疫学检测红细胞凝集抑制试验中和试验补体结合试验酶或荧光素标记单克隆抗体

病毒核酸检测：PCR或核酸杂交技术第一节呼吸道病毒第十三页，共八十三页。（三）临床意义儿童是主要易感者呼吸道传播局部淋巴节增殖后经病毒血症散播全身可垂直传播导致胎儿先天性感染第一节呼吸道病毒第十四页，共八十三页。三、其他呼吸道病毒病毒名称形态结构所致疾病SARS冠状病毒球形、冠状，有包膜，RNA发热、干咳、胸闷、气短，急性呼吸窘迫综合症、休克、多器官功能障碍综合症等麻疹病毒球形、衣壳呈螺旋对称型，有包膜，不分节段的单股RNA发热、咳嗽、流涕、眼结膜充血、皮肤出现红色斑丘疹腮腺炎病毒球形，核心为单股RNA，衣壳呈螺旋对称，有包膜一侧或双侧腮腺肿大，伴有疼痛、发热返回章内容第一节呼吸道病毒第十五页，共八十三页。三、其他呼吸道病毒病毒名称形态结构所致疾病腺病毒球形、双链DNA、核衣壳20面体对称、无包膜咽炎、扁桃体炎、肺炎、流行性眼结膜炎、急性出血性膀胱炎、胃肠炎等副流感病毒球形、单负链RNA、核衣壳螺旋对称、有包膜小儿气管炎、支气管炎、肺炎、普通感冒等呼吸道合胞病毒球形、单负链RNA、核衣壳螺旋对称、有包膜婴幼儿喘息性支气管炎、肺炎、成人普通感冒等鼻病毒球形、单正链RNA、核衣壳20面体对称、无包膜婴幼儿支气管炎、支气管肺炎、成人普通感冒等返回章内容第一节呼吸道病毒第十六页，共八十三页。第二节肝炎病毒一、甲型肝炎病毒（一）生物学特性

1.形态结构属小RNA病毒科,直径约为27nm，呈球形，二十面体立体对称甲型肝炎病毒形态模式图第十七页，共八十三页。HAV电镜图第二节肝炎病毒第十八页，共八十三页。2.抵抗力耐受乙醚、氯仿等脂溶剂耐酸：在pH3的酸性环境中稳定不耐热：100℃5

min可使之灭活在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活数天至数月第二节肝炎病毒第十九页，共八十三页。3.培养特性易感动物：黑猩猩，狨猴，鹰面猴，短尾猴允许性细胞：Vero、恒河猴胚肾细胞（FRHK-4）、人肝癌细胞株（PLC/PRF/S）等在培养细胞中生长缓慢，无CPE第二节肝炎病毒第二十页，共八十三页。（二）微生物学检验HAV-IgM检测：早期、快速诊断最可靠的血清学指标HAV-IgG检测：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫、效果评价或流行病学调查分离培养：原代肝细胞或恒河猴胚肾传代株细胞对HAV敏感，生长缓慢，不引起细胞裂解第二节肝炎病毒第二十一页，共八十三页。（三）临床意义传染源：主要为急性患者和隐性感染者传播途径：粪－口途径传播第二节肝炎病毒第二十二页，共八十三页。二、乙型肝炎病毒HBV流行久远、传播广泛，是全球性公共卫生问题全球3.5亿人携带HBV我国为高流行区感染率：60%

HBsAg携带率：8%～10%慢性乙肝病人：1000万80%原发性肝癌与HBV慢性感染有关

第二节肝炎病毒第二十三页，共八十三页。二、乙型肝炎病毒（一）生物学特性1．形态与结构①小球形颗粒:直径22nm；②管形颗粒:直径22nm，长度在50～700nm之间；③大球形颗粒:即Dane颗粒，直径42nm。第二节肝炎病毒第二十四页，共八十三页。第二节肝炎病毒第二十五页，共八十三页。2.抗原组成（1）表面抗原HBsAg存在于三型颗粒中,是HBV感染的主要标志pres1和preS2抗原的检作为病毒复制的指标抗-preS抗体阳性常见于急性乙肝的恢复期，表示病毒正在或已经被清除抗-HBs保护性抗体（中和抗体）乙肝痊愈（临床）或免疫成功（接种疫苗）的标志第二节肝炎病毒第二十六页，共八十三页。（2）核心抗原HBcAg仅存在于Dane颗粒中，刺激机体产生抗HBc（IgG、IgM）可在感染的肝细胞核心部位的表面存在，表明病毒在复制到血液中即被降解为HBeAg，一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc抗-HBc对机体无保护作用抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志抗HBc-IgG：持续时间长凡有过HBV感染者均可阳性，并可终身伴随第二节肝炎病毒第二十七页，共八十三页。（3）e抗原HBeAg仅存在于Dane颗粒中，HBeAg是HBcAg的降解产物，游离存在于血液中，为病毒复制及强传染性的指标，产生抗－HBe，是预后良好的征象抗-HBe随着HBeAg的消失而出现抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低保护作用第二节肝炎病毒第二十八页，共八十三页。（4）PreS1、PreS2与HBV-DNA成正比是病毒复制的指标抗-PreS1、抗-PreS2在恢复期的早期出现阳性提示病毒正在或已经被清除是预后良好的指标第二节肝炎病毒第二十九页，共八十三页。（二）微生物学检验HBV抗原、抗体检测血清HBV-DNA检测血清DNA多聚酶检测第二节肝炎病毒第三十页，共八十三页。（三）临床意义传染源：患者或无症状HBsAg携带者传播途径：密切接触、血液及体液、母婴传播乙型肝炎的临床表现呈多样性，可由无症状携带至急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎等。病毒不仅存在于肝内，也存在于脾脏和血细胞等。一般认为，病毒在细胞内增殖对肝细胞的直接破坏作用不大，而机体对肝脏的免疫病理损害才是引起肝炎发生的主要原因第二节肝炎病毒第三十一页，共八十三页。三、丙型肝炎病毒（一）生物学特性有包膜的单正链RNA病毒。病毒体呈球形，直径为30～60nm（二）微生物学检验1.检测病毒抗体：用ELISA法检测抗-HCV2.检测病毒RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法第二节肝炎病毒第三十二页，共八十三页。（三）临床意义1.主要通过血液/体液传播，其他如性传播、垂直传播2.是引起输血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因3.HCV感染极易转为慢性4.无症状HCV携带者和慢性丙肝者多见5.人群普遍易感，HCV感染的母亲所生婴儿感染率高6.诱发肝外损伤：肾小球肾炎7.免疫力不牢固第二节肝炎病毒第三十三页，共八十三页。四、丁型肝炎病毒（一）生物学特性HDV是一种缺陷病毒由HBsAg构成其外壳HDV定位于肝细胞核内在血液中由HBsAg包被形成35-37nm颗粒单负链环状RNAHDV结构模式图第二节肝炎病毒第三十四页，共八十三页。（二）微生物学检验1.HDAg是HDV感染的直接标志2.抗-HD抗体检测抗HDV-IgM：是HDV早期感染标志抗HDV-IgG：是HDV既往感染的标志慢性HDV感染时，两种抗体可长期共存3.HDV-RNAHDVRNA是HDV存在及复制的一个有用指标第二节肝炎病毒第三十五页，共八十三页。（三）临床意义只能感染HBsAg阳性的病人共同感染(coinfection)：与HBV同时感染重叠感染(superinfection)：在慢性乙型肝炎或HBsAg携带者的基础上再感染HDV第二节肝炎病毒第三十六页，共八十三页。五、戊型肝炎病毒（一）生物学特性属杯状病毒科，球形，无包膜，直径32～34nm，单正链RNA一个血清型（二）微生物学检验检测HEV：电镜或免疫电镜观察检测抗-HEV抗HEV-IgM：是近期内HEV感染的标志，有早期诊断价值抗HEV-IgG：HEV感染后可长期存在，可用于流行病学调查HEVRNA第二节肝炎病毒第三十七页，共八十三页。（三）临床意义主要通过粪-口途径传播，患者多见于20～40岁成年人，潜伏期为2～9w，多数患者于病后6w即好转或痊愈。少数患者可表现为重症肝炎，甚至可导致死亡。孕妇感染时，发病率高，病情严重，常发生流产或死产HEV致病机制尚不明了，可能是病毒本身作用及机体免疫应答造成肝细胞损伤病后有一定免疫力第二节肝炎病毒第三十八页，共八十三页。六、其他肝炎相关病毒1.庚型肝炎病毒属黄病毒科，为单股正链RNA。主要通过输血等非肠道途径传播，呈全球分布，我国主要在非甲至戊型肝炎病人、献血员、血透病人、器官移植患者及肝癌患者中存在2.TT型肝炎病毒是从一例日本输血后非甲至庚型肝炎病人（TT）血液中发现的一类新型DNA病毒，属细小DNA病毒科，通过血液和血制品传播，也可经消化道传播返回章内容第二节肝炎病毒第三十九页，共八十三页。第三节反转录病毒包括肿瘤病毒亚科、泡沫病毒亚科和慢病毒亚科

HIV-I型和HIV-II型获得性免疫缺陷综合症（AIDS）第四十页，共八十三页。

中国AIDS流行现状截至2014年2月28日，我国累计报告报告的HIV/AIDS587182例，死亡138956例。现存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我国艾滋病疫情总体上保持低流行态势，但依然呈上升趋势，幅度较以前有所减缓。据统计，自2005年至今，性传播比例持续攀升。2014年3月新发现的HIV/AIDS中，异性性传播4515例（69.8%），同性性传播1260例（19.5%），注射毒品传播430例（6.6%），母婴传播36例（0.6%），性接触加注射毒品传播13例（0.2%），既往输血及使用血制品传播11例（0.2%），既往采血浆传播5例（0.1%），传播途径不详203例（3.1%）。50岁以上群体和学生群体所占比例上升，这也是我国HIV传播的新特点第三节反转录病毒第四十一页，共八十三页。一、人类免疫缺陷病毒（一）生物学特性1．形态与结构RNA，有包膜球形病毒。

关键结构：gp120

gp412．HIV复制（1）吸附----gp120

+CD4（2）穿入和脱壳（3）生物合成（4）装配与释放

第三节反转录病毒第四十二页，共八十三页。3．HIV的理化特性对热敏感56℃处理30分钟失去感染性，但不能完全灭活血清中的HIV,灭活方法是100℃20分钟对化学因素敏感，在室温下70%酒精只需1分钟即不能检出活性对紫外线或γ射线不敏感，因此紫外线或γ射线不能灭活HIV病毒第三节反转录病毒第四十三页，共八十三页。（二）微生物学检验1．标本采集采集血液、体液标本2．HIV检验包括HIV抗体、P24抗原、HIV病毒载量、CD4+T细胞计数等抗体检测是诊断HIV感染的唯一标准（1)HIV-1P24

第三节反转录病毒第四十四页，共八十三页。（2）血清抗体检测分为筛查和确认试验免疫印迹法--是HIV血清学检测中最常用的确证性试验第三节反转录病毒第四十五页，共八十三页。（3）测定病毒核酸临床常用于测定感染者体内游离病毒的RNA含量即病毒载量（4）CD4+T细胞计数应用流式细胞仪（FCM）进行CD4+T细胞记数及占淋巴细胞的百分率（正常情况下与CD8+T细胞比例为2:1）CD4+T细胞数:＜0.5×109/L时，为抗反转录病毒药物治疗的指征＜0.2×109/L时，应立刻进行卡氏肺孢子菌的预防治疗

＜0.1×109/L时，易感染巨细胞病毒和结核分枝杆菌（5）耐药性检测检测患者标本中HIV基因序列，监控变异的发生，间接估计药物耐药情况。第三节反转录病毒第四十六页，共八十三页。（三）临床意义HIV无症状携带者和AIDS患者传播途径性接触、输血或血制品、母-婴传播传染源病毒选择性侵犯CD4+细胞，细胞变性、坏死，导致以CD4+细胞缺陷为主的严重免疫缺陷1．致病机制第三节反转录病毒第四十七页，共八十三页。（1）急性期：（2）无症状潜伏期：（3）AIDS期:感染后2～6周内一般为8～10年通常难以检测到HIV抗体血清抗体阳性，具传染性。持续发热、盗汗、失重、不明原因的慢性腹泻、湿疹、银屑病、脂溢性皮炎、皮炎、疱疹-带状疱疹、口腔念珠菌病、黏膜白斑病等机会感染和肿瘤2．临床特征第三节反转录病毒第四十八页，共八十三页。机会性感染带状疱疹毛囊炎第三节反转录病毒第四十九页，共八十三页。在AIDS患者中念珠菌属感染是很常见的,象鹅口疮（上图）尽管不危及生命但十分讨厌.

左图为念珠菌性肺炎.机会性感染第三节反转录病毒第五十页，共八十三页。恶性肿瘤图为AIDS患者常出现的Kaposi肉瘤第三节反转录病毒第五十一页，共八十三页。由于缺乏AIDS宣传及预防意识，中国九十年代出现“AIDS村”

第三节反转录病毒第五十二页，共八十三页。患艾滋病的孩子

第三节反转录病毒第五十三页，共八十三页。二、人类嗜T细胞病毒

------引起T细胞白血病和毛细胞白血病人类嗜T细胞病毒(HTLV)（一）生物学特性电镜下HTLV呈球形，直径约100nm，中心为病毒的RNA和反转录酶最外层系病毒的包膜，其表面嵌有gp120，能与细胞表面的CD4分子结合而介导病毒的感染。包膜内有病毒的衣壳，含有P18和P24两种结构蛋白第三节反转录病毒第五十四页，共八十三页。（二）微生物学检查*电镜观察*免疫血清或单克隆抗体鉴定*血液中HTLV-I抗体的存在即可诊断为该病毒感染；而血液中异常淋巴细胞数量的大量增生，同时证实这些淋巴细胞中有HTLV-IDNA，则可支持成人T淋巴细胞白血病的诊断第三节反转录病毒第五十五页，共八十三页。HTLV-I可经输血、注射或性接触等传播，也可通过胎盘、产道或哺乳等途径垂直传播。（三）临床意义成人T淋巴细胞白血病主要采取化疗，但对HTLV-I的抵抗效果不佳；AZT和其他反转录酶抑制剂能够有效的对抗细胞培养中的HTLV-II。返回章内容第三节反转录病毒第五十六页，共八十三页。

第四节疱疹病毒疱疹病毒（Herpesviruses）是一群中等大小的有包膜的双股DNA病毒，有110个以上成员，其中与人感染有关的人疱疹病毒已发现有8种常用名单纯疱疹病毒1型巨细胞病毒单纯疱疹病毒2型人类疱疹病毒6型水痘带状疱疹病毒人类疱疹病毒7型EB病毒人类疱疹病毒8型第五十七页，共八十三页。球形，直径约为120～300nm。核心为双链线性DNA，衣壳呈20面体，有包膜

对脂溶剂敏感，临床采集标本不应与脂溶剂接触。最适保存温度为-196℃（液氮），在-70℃病毒感性可保存数月，4℃可保存数天，-20℃易破坏病毒包膜，短期保存即完全灭活疱疹病毒共同的特：

第四节疱疹病毒第五十八页，共八十三页。一、单纯疱疹病毒（HSV）HSV-1

HSV-2（一）生物学特性基因组DNA有40%左右的序列同源

HSV的增殖周期短，常潜伏于神经节中引起潜伏感染。抵抗力较弱，易被脂溶剂灭活。温度高于56℃30分钟失去感染性

第四节疱疹病毒第五十九页，共八十三页。（二）微生物学检验1．标本

采集水疱液、唾液、脑脊液、角膜刮取物、阴道拭子等标本，经常规处理后接种或置低温冰箱保存2．分离培养鉴定

常用原代兔肾、人胚肺、人胚肾细胞或地鼠肾等传代细胞分离培养病毒。在鸡胚绒毛膜上，HSV-2形成大空斑，而HSV-1形成针尖大小的空斑。常用实验动物有家兔、豚鼠、小鼠等3．血清学检测中和试验、免疫荧光等鉴定也可分离病毒DNA，根据DNA酶切图谱差异鉴定型别

第四节疱疹病毒第六十页，共八十三页。（三）临床意义直接接触传染或被唾液污染的餐具

间接传染HSV感染一般分为原发感染和复发感染。原发感染好发于婴幼儿或儿童，多为隐性感染，并不表现出症状HSV-2侵及躯体腰以下部位，主要是生殖器，它是引起性病的主要病原体之一HSV-1主要侵犯躯体腰以上部位，可引起口腔、唇、眼、脑及腰以上部位感染

第四节疱疹病毒第六十一页，共八十三页。单纯疱疹病毒感染---多核细胞

第四节疱疹病毒第六十二页，共八十三页。二、水痘-带状疱疹病毒（VSV）（一）生物学特性水痘-带状疱疹病毒（VZV）

初次感染再次感染水痘

（多见于儿童）

带状疱疹（多成人和老人）

第四节疱疹病毒第六十三页，共八十三页。（二）微生物学检验水痘一带状疱疹的临床症状典型，一般不需作微生物学诊断。必要时可检查嗜酸性核内包涵体和多核巨细胞细胞内抗原（三）临床意义

传染源：

主要是患者，病毒经呼吸道、口、咽、结膜、皮肤等处侵入人体1．人是水痘-带状疱疹病毒的唯一自然宿主2．带状疱疹是潜伏在体内的VZV复发感染

第四节疱疹病毒第六十四页，共八十三页。三、人巨细胞病毒（HCMV）和EB病毒一般是宫内感染侵犯胎儿神经系统、肝、肾等器官，人巨细胞病毒（HCMV）

EB病毒（EBV）与多种人类疾病相关如传染性单核细胞增多症、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等鼻咽癌和EB病毒关系密切，血清学检查有高效价EB病毒抗原抗体可采集各种体液、分泌物等样本进行病毒分离、抗原或核酸检测返回章内容

第四节疱疹病毒第六十五页，共八十三页。第五节肠道病毒一、脊髓灰质炎病毒（一）生物学特性1.形态结构球形，直径27～30nm，无包膜单股正链RNA病毒，核衣壳呈20面体立体对称结构电镜下的脊髓灰质炎病毒第六十六页，共八十三页。（一）生物学性状2.培养特性可在猴肾细胞,人胚肾细胞、人羊膜细胞中培养增殖引起CPE敏感的实验动物有猴、猩猩等灵长类动物，将病毒接种于脊髓或脑内容易发病，导致肢体麻痹第五节肠道病毒第六十七页，共八十三页。（一）生物学性状

3.抵抗力：较强第五节肠道病毒第六十八页，共八十三页。（二）微生物学检验1.标本：病人发病早期咽洗液、粪便、血液、脑脊液或组织2.鉴定（1）病毒的分离培养与鉴定第五节肠道病毒第六十九页，共八十三页。（二）微生物学检验2.鉴定（2）血清学诊断（3）其他

电子显微镜分子生物学技术第五节肠道病毒第七十页，共八十三页。二、轮状病毒（一）生物学性状1.形态结构：直径60～80nm，核心为双链RNA，无包膜衣壳壳粒呈放射状排列，负染色后电镜下观察形如车轮，故得名轮状病毒（如右图）电镜下的轮状病毒第五节肠道病毒第七十一页，共八十三页。（一）生物学特性2.培养特性组织培养十分困难需选用特殊的细胞株培养3.抵抗力较强95％的乙醇是最有效的灭活剂第五节肠道病毒第七十二页，共八十三页。（二）微生物学检验1.标本采集病人发病5天内的粪便，密封后送检2.鉴定（1）电镜观察如见特殊车轮状病毒颗粒即可诊断（右图）第五节肠道病毒第七十三页，共八十三页。（二）微生物